滋陰降火方藥對牙周炎患者齦溝液中IL－1β及MMP－2含量的影響

河北省青縣中醫院 李水清 郝麗霞 王競超（滄州 062650）

牙周炎是一種以炎癥細胞浸潤牙齦組織致炎癥性水腫出血、組織液滲出、牙槽骨的吸收及組織進行性破壞為主要臨床表現的慢性感染性疾病。此疾病不僅是成年人喪失牙齒的重要原因，而且近年發現牙周炎易引起內分泌系統、心血管系統及呼吸系統等方面的疾病。［1－2］目前，該病的病因不明，缺乏有效的治療手段。本研究以滋陰降火的治療法則，創制滋陰降火方藥，在臨床上化裁治療慢性牙周炎，取得較好的臨床療效。為進一步研究滋陰降火方藥治療慢性牙周炎的作用機制，本研究選取來我院就診的124例慢性牙周炎患者作為實驗對象，觀察慢性牙周炎致炎因子IL－1β及MMP－2細胞信號傳導通路中關鍵分子表達的影響，探討該方療效的作用機制。

1 材料與方法

1.1 主要試劑 濾紙簽 （whatman，German），IL－1β及MMP－2人酶聯免疫吸附試驗試劑盒（R＆D，USA）。

1.2 主要儀器設備 分光光度計，電子天平，酶聯免疫檢測儀:國營華東電子管廠。

1.3 方法

1.3.1 研究對象:來我院口腔科門診就診的124例慢性牙周炎患者隨機分為對照組和治療組，每組62人，其中每位患者均以一顆單根牙作為研究對象，并且牙齦指數 （GI）≥3，附著喪失 （AL）≥2 mm，無吸煙史，無系統性疾病，兩組患者在年齡、性別、病情、病程等方面的差異無顯著性 （P＞0.05），具有可比性。

1.3.2 齦溝液的采樣:在采樣前，每個收集齦溝液的濾紙簽均放入0.15 mL EP管中在電子分析天平上稱重、記錄、備用。然后去除齦溝液收集部位的菌斑和牙石，用棉簽擦拭后，氣槍將牙面吹干，1 min后將濾紙簽插入齦溝或牙周袋內，遇阻力后停止插入，停留1 min，抽出濾紙簽，迅速放回EP管中;等待3 min后再將第二個紙簽以相同的方式放入同一位點。將兩個紙簽放入同一個EP管內，后置入－70℃凍存。若濾紙簽被血液浸漬則棄置不用。

1.3.3 治療:牙周基礎治療，齦上潔治，齦下刮治和根面平整在局麻下根據具體病情使用Gracy刮治器分次完成，調整磨牙、去除明顯咬合創傷等。同時給予患者刷牙頻率、方法等方面的口腔衛生指導。治療組在此基礎之上給予滋陰降火方藥口服，組成方藥:知母25 g，黃柏10 g，生地黃30 g，牡丹皮、澤瀉各10 g，茯苓7 g，山茱萸10 g，山藥15 g，黃芩10 g，金銀花、白茅根各15 g。兩組患者均以7 d為1個療程，3個療程后，再次對牙周炎組進行兩組患者的齦溝液采樣和對比。

1.3.4 齦溝液中IL－1β及MMP－2水平檢測:將250μL含1% 牛血清白蛋白的PBS緩沖液加入裝有樣本濾紙簽的EP管中，漩渦混勻器上震蕩EP管1 min，然后2 000 r離心5 min。取出紙簽，分離上清液分裝，分別用于檢測IL－1β及MMP－2。用ELISA雙抗體夾心酶聯免疫吸附法檢測上清液中IL－1β及MMP－2的水平，按說明書進行操作:（1）將100μL標準液或樣品置含有單克隆抗體的96板孔中，留第一孔為底物空白;（2）除底物空白孔外，其他各孔加入200μL McAb－乙酰膽堿脂酶;（3）加入200μL底物到各孔中，在18℃ ～25℃室溫下，350 rpm振蕩30 min;（4）震蕩孵育后，每孔均加50μL反應停止液;（5）用450 nm波長檢測吸光度值，根據標準濃度作出標準曲線，并計算出樣品的相應濃度。IL－1β及MMP－2人ELISA檢測試劑盒的靈敏度為1.5 pg/mL及12.5 ng/mL。細胞因子水平低于試劑盒最低限的位點計分為 “0”。

1.3.5 統計分析:采用SPSS13軟件進行統計分析，慢性牙周炎患者兩組采集位點的臨床指標檢測之間比較采用ANOVA檢驗及兩兩比較。

2 實驗結果

兩組患者齦溝液中炎性因子IL－1β及MMP－2含量結果詳見表1。從表中可以看出，在治療前對照組與治療組中患者齦溝液中炎性因子IL－1β及MMP－2含量差異無顯著性 （P＞0.05），治療后，治療組基礎治療和運用滋陰降火方藥的治療后，治療組患者齦溝液中炎性因子IL－1β及MMP－2含量明顯下降，與對照組比差異具有非常顯著性 （P ＜0.01）。

表1 齦溝液中炎性因子IL－1、MMP－2含量（±s）

表1 齦溝液中炎性因子IL－1、MMP－2含量（±s）

注:與對照組治療后比較，△P＜0.01

組別 IL－1含量 （pg/mL）治療前 治療后MMP－2含量 （ng/mL）治療前 治療后對照組 103.4±22.1 95.2±15.9 212.4±12.1 145.2±17.2治療組 109.5±21.6 54.3±18.5△ 209.5±21.6 64.2±15.5△

3 結論

牙周炎是人類口腔兩大疾患之一，根據我國第三次全國口腔健康調查表明，目前我國大約有80%～97%的成年人患有不同程度的牙周疾病。現代臨床醫學認為牙周炎是細菌入侵襲和肌體防御功能之間動態失衡所引起的慢性感染性疾病，臨床表現為牙齦腫痛、出血等常見的炎癥反應。牙周炎致病因素除了牙周細菌感染外，肌體對牙周細菌的反應，其中包括招募白細胞及隨后釋放的炎癥介質和炎性因子等，均在牙周炎病程中起著關鍵性作用。［3］引起炎癥反應的諸多細胞因子中，尤以IL－1β及MMP－2與牙周炎的發生發展有著密切的關系。現有研究證明IL－1β是介導牙周炎癥過程的主要因子，IL－1β協同其他炎性因子直接抑制骨形成和金屬蛋白酶因子，促進結締組織降解，抑制膠原纖維形成，延遲牙周病灶的愈合和患牙骨的形成。［4］在肌體內，MMP家族具有促進炎癥細胞遷移和降解基底膜的作用，其中MMP－2在牙周組織中膠原纖維的改建和牙根吸收等方面起極其重要的作用，Ejeil等證實MMP－2含量與牙周組織中膠原纖維的破壞程度呈正相關。［5］

在中醫學中，牙周炎屬“牙宣”范疇，《仁齋直指方》認為:“齒者骨之所終，髓之所養，腎實主之;故腎衰則齒豁，精固則齒堅，虛熱則齒動。”其中說明牙齒與腎之間的重要關系，腎虛則齒浮動，虛火上炎則齒衄。本臨床研究，運用滋陰降火方藥治療陰虛火旺而致牙周炎的患者，其研究結果表明滋陰降火方藥能夠有效地降低IL－1β及MMP－2的含量，從而抑制了炎癥的發生，控制了牙周炎的病程，從而說明滋陰降火方藥抑制或消除IL－1β及MMP－2炎性因子是治療牙周炎疾病的機制之一。隨著對牙周炎發病機理的認識，用中醫藥調節肌體的免疫機制治療牙周炎已成為目前研究的熱點，本研究從牙周炎病因病機的一方面為研究牙周炎機制提供了思路，但對于滋陰降火方藥治療牙周炎的效果及作用機制還有待進一步的研究。

［1］ 曹采芳.牙周病學［M］.北京:人民衛生出版社，2001.43－471

［2］ 李德懿.牙周病微生物學［M］.天津:天津科技翻譯公司，1994.98－1 231

［3］ 趙玉雪，趙麗娟.白細胞介素－1及其與牙周病的關系［J］.中國實用口腔科雜志，2012，5（6）379－381

［4］ 趙麗鳳，王新革，黃紀美.齦溝液中IL－1β的監測和臨床意義［J］.求醫問藥 （下半月刊），2012，10（3）:269－270

［5］ 左渝陵，金釗，余劍鋒.益氣升陽法對慢性牙周炎患者齦溝液IL－6和 MMP－2含量的影響 ［J］.現代預防醫學，2012，39（21）:5 678－5 682

（2013－12－18 收稿）