高效液相色譜法測定地芍消渴顆粒中鹽酸小檗堿含量

莫武明

(梧州三箭制藥有限公司，廣西 梧州 543001)

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高效液相色譜法測定地芍消渴顆粒中鹽酸小檗堿含量

莫武明

(梧州三箭制藥有限公司，廣西 梧州 543001)

目的：建立高效液相色譜測定地芍消渴顆粒中鹽酸小檗堿含量的方法。方法：色譜柱為Spherigel C18(250mm×4.6mm，5μm)，流動相為乙腈-水(55∶35)，流速為1mL/min，檢測波長為345nm。結(jié)果：鹽酸小檗堿在2.5～20μL進樣量范圍內(nèi)與其峰面積積分呈良好的線性關(guān)系，r=0.999 8(n=6)，回收率為101.6%，RSD=1.8%(n=5)。結(jié)論：高效液相色譜法操作簡便，準確性高，重現(xiàn)性好，可用于地芍消渴顆粒中鹽酸小檗堿含量的測定。

高效液相色譜法；地芍消渴顆粒；鹽酸小檗堿；含量測定

地芍消渴顆粒由地黃、赤芍、黃連等十一味中藥組成，具有滋陰清熱、益氣養(yǎng)血的功效，用于陰虛熱盛兼血瘀型糖尿病的輔助治療。該藥原質(zhì)量控制標準中已有丹參、赤芍、黃連、牛膝的薄層鑒別及赤芍含量測定方法。但該藥組成成分較復雜，為更好地控制其質(zhì)量，筆者對其含有的黃連的有效成分鹽酸小檗堿進行了含量測定，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀：Waters 501泵，484檢測器，U6K進樣器，SP290積分儀。鹽酸小檗堿對照品購于中國食品藥品檢定研究院(批號：110713-200609)；甲醇、乙醇、乙腈等溶劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Spherigel C18(250mm×4.6mm，5μm)，由大連化學物理所提供。流動相：參照日本藥局方中黃連的測定。根據(jù)以上試驗結(jié)果，確定供試品溶液制備方法如下：取條件[1]調(diào)節(jié)比例：乙腈-水(55∶35)，每1 000mL流動相中含磷酸二氫鉀3.4g，十二烷基硫酸鈉1.7g。流速：1mL/min，檢測波長：345nm。

系統(tǒng)適用性試驗：按上述色譜條件，理論塔板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計為9 000，主峰與相鄰色譜峰的分離度為1.5。連續(xù)進樣數(shù)針，被測成分峰面積的RSD為1.6%。

2.2 對照品溶液配制

精密稱取鹽酸小檗堿對照品20mg，置于100mL容量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度。精密吸取上述溶液5mL，置于100mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得10μg/mL對照品溶液。

2.3 供試品溶液制備

氧化鋁除雜質(zhì)試驗：由于本品為復方制劑，成分復雜，向其中加入中性氧化鋁(層析用，100～200目)后可除去大部分干擾測定的成分。經(jīng)試驗，在0.3g樣品中加入中性氧化鋁2g，用乙醇作提取溶劑，可起到較好的雜質(zhì)吸附效果，且對鹽酸小檗堿含量測定無影響。

不同提取方法試驗：取同一批樣品，分別用水浴加熱回流20min，超聲處理20min，測得其鹽酸小檗堿含量分別為0.097 8、0.030 6mg/g，結(jié)果表明加熱回流提取效率較高。

不同提取時間比較：取同一批樣品，用乙醇作提取溶劑，分別提取不同時間，測定鹽酸小檗堿含量，結(jié)果見表1。從表1可知，回流提取60min效果最好。

表1 不同提取時間含量測定結(jié)果

取地芍消渴顆粒適量，研細，精密稱取約0.3g，置于150mL燒瓶中，精密加入乙醇25mL，稱定重量，水浴加熱回流1h，放冷至室溫，稱定重量，用乙醇補足減失重量；加入中性氧化鋁2g，超聲處理5min，稍放置，吸取上清液適量，離心，取離心上清液作供試液。

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀測定，以峰面積外標法計算小檗堿含量，即得。

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取對照品溶液2.5、5、7.5、10、15、20μL，分別進樣分析，測定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標，對照品進樣量為橫坐標，作線性回歸，得回歸方程為：

Y=71.3X+4.87， r=0.999 8

2.5 精密度試驗

取同一批號的樣品，按上述色譜條件重復進樣測定5次，測得鹽酸小檗堿含量分別為 0.797、0.779、0.793、0.783、0.790mg/g，平均值為0.788mg/g，RSD=0.9%，表明該儀器精密度良好。

2.6 回收率試驗

取已知小檗堿含量的樣品(批號110720)0.2g，精密加入適量鹽酸小檗堿對照品，按含量測定方法測定，計算回收率，其中回收率=(C-A)/B×100%，結(jié)果測得平均回收率為101.6%，RSD=1.8%，該方法回收率滿足要求，見表2。

表2 回收率測定結(jié)果

2.7 樣品測定

按上述色譜條件測定4批樣品中鹽酸小檗堿的含量，不同批次樣品的鹽酸小檗堿含量差異較大，見表3。

表3 不同批次鹽酸小檗堿測定結(jié)果

3 討論

地芍消渴顆粒中的黃連味苦、性寒，具清熱燥濕、瀉火解毒的功效，鹽酸小檗堿為其主要有效成分。研究表明[2-8]， 鹽酸小檗堿具有降血脂、降血糖等作用，與通脈降糖顆粒的部分功效相符，可選作本品的質(zhì)控指標之一。本文選用的高效液相色譜法操作簡便、準確性高、重現(xiàn)性好，可用于地芍消渴顆粒中鹽酸小檗堿含量的測定，進而控制本品質(zhì)量。

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(責任編輯：尹晨茹)

2014-01-09

莫武明(1963- )，男，廣西梧州三箭制藥有限公司總經(jīng)理，執(zhí)業(yè)藥師，研究方向為制藥學。

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1673-2197(2014)08-0017-02