HPLC法測定痛痹康膠囊中士的寧含量

施 猛，任亞東，肖 艷，劉志強(qiáng)

(揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)廣州海瑞藥業(yè)有限公司，廣東 廣州 510663)

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HPLC法測定痛痹康膠囊中士的寧含量

施 猛，任亞東*，肖 艷，劉志強(qiáng)

(揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)廣州海瑞藥業(yè)有限公司，廣東 廣州 510663)

目的：建立痛痹康膠囊中士的寧的含量測定方法，為其質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。方法：采用高效液相法，色譜柱采用正相硅膠柱(4.6mm×250mm，5μm) ，以正己烷-二氯甲烷-無水甲醇-三乙胺(47.5∶47.5∶5∶0.4)為流動相，流速為1.0mL/min，檢測波長為280nm，進(jìn)樣量為10μL。結(jié)果：士的寧的回歸方程為y=7.108 34x-21.971 91,r=0.999 86，其在31.00～387.40μg/mL濃度范圍內(nèi)與峰面積積分線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為101.8%(n=6)，RSD值為2.15%；樣品中士的寧的平均含量為0.19 mg/粒。結(jié)論：該方法操作簡單,穩(wěn)定性、重現(xiàn)性好，可用于該制劑中士的寧含量的檢測。

痛痹康膠囊；士的寧；含量測定

痛痹康膠囊(原名：仲香膠囊)是在清代《急救應(yīng)驗良方》九分散的基礎(chǔ)上加味而成，共由十一味中藥材(制馬錢子、麻黃、乳香、沒藥等)組成[1]。痛痹康膠囊為中藥六類新藥，目前三期臨床試驗已完成，主要用于治療腰錐間盤突出癥引起的腰腿疼痛、下肢麻木等，其總體有效率可達(dá)90%以上。

中藥及其制劑的內(nèi)在穩(wěn)定性是中藥現(xiàn)代化研究的關(guān)鍵點之一。方中的君藥為制馬錢子，其主要成分為馬錢子堿和士的寧，其中士的寧既是有效成分又是毒性成分。為保證臨床用藥安全、有效，應(yīng)當(dāng)合理控制方中士的寧的含量[2]。筆者采用高效液相色譜法(HPLC)對該制劑中的有效成分士的寧進(jìn)行了含量測定，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent1260 高效液相色譜儀(Agilent 公司);PDAD光電二極管陣列檢測器(Agilent 公司);梅特勒XS205 電子天平(梅特勒公司)。

1.2 試藥

樣品：痛痹康膠囊(揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)廣州海瑞藥業(yè)自制，批號：48120501；48120601；48120602)；對照品：士的寧，含量為97%(中國食品藥品檢定研究院，批號：110705-200306)；正己烷、二氯甲烷、無水甲醇為色譜純；三乙胺、三氯甲烷、乙酸乙酯、氫氧化鈉、氨水為分析純。

2 方法

2.1 色譜條件

色譜柱：ECOSIL硅膠柱( 4.6mm × 250mm，5μm) ，流動相：正己烷-二氯甲烷-無水甲醇-三乙胺(47.5∶47.5∶5∶0.4)，檢測波長：280nm，流速：1.0mL/min，進(jìn)樣量：10μL。

2.2 對照品溶液制備

精密稱取士的寧(五氧化二磷減壓干燥12h)對照品約40mg，置于100mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。再精密量取對照品儲備液5mL，置于25mL容量瓶中，用乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液制備方法

取痛痹康膠囊顆粒約5.0g，精密稱定，加氫氧化鈉溶液15mL使之溶解，放置30min，精密加入三氯甲烷50mL，稱定重量，超聲60min(每10min振搖1次)，放冷，用三氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，分取三氯甲烷層，濾過。精密量取續(xù)濾液20mL，置于水浴中蒸干，殘渣加乙酸乙酯溶解，轉(zhuǎn)移并定容至10mL，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4 測定方法

分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，測定峰面積，用外標(biāo)法計算士的寧含量。

3 結(jié)果

3.1 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗和專屬性試驗

參照痛痹康膠囊處方制備不含馬錢子的陰性樣品，研細(xì)，按照“2.3”項所述方法處理，制備陰性對照溶液。取流動相用0.45μm微孔濾膜過濾作為空白樣品。精密量取空白樣品、陰性對照樣品、供試品溶液及對照品溶液各10μL，按上述色譜條件測定，記錄色譜，見圖1。

結(jié)果表明，空白樣品和陰性樣品在士的寧對照品保留時間處無干擾，樣品色譜中士的寧與相鄰雜質(zhì)峰的分離度大于1.5，士的寧的理論塔板數(shù)為14 159，均符合要求，該方法具有檢測士的寧的專屬性。

3.2 精密度

精密量取對照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定樣品峰面積。結(jié)果表明其平均峰面積為1 074.296，RSD為0.25%，表明儀器精密度良好。

3.3 線性關(guān)系考察

精密量取上述對照品儲備液2、3、5、10、20mL，分別置于25mL容量瓶中，用乙酸乙酯稀釋至刻度，得到質(zhì)量濃度分別為31.00、46.50、77.50、155.00、310.00μg/mL的系列溶液。分別精密量取上述對照品系列濃度的溶液及對照品儲備液各10μL，按照“2.1”所述色譜條件進(jìn)行測定。以峰面積為縱坐標(biāo)(y)，士的寧質(zhì)量濃度(x，μg/mL)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程為y=7.108 34x-21.971 91，r=0.999 86。實驗結(jié)果表明，士的寧在31.00～387.40μg/mL濃度范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

3.4 重復(fù)性試驗

分別取同一批號的痛痹康膠囊樣品6份，精密稱定，按照供試品溶液制備方法處理，并按照“2.1”所述的士的寧含量測定方法測定，計算含量。結(jié)果表明，樣品中士的寧平均含量為0.546mg/g，RSD為2.0%，該方法重復(fù)性良好。

3.5 穩(wěn)定性試驗

取“2.3”項下的供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24h測定士的寧峰面積，結(jié)果表明，供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定，平均峰面積為721.068，RSD為1.52%，樣品在24h內(nèi)無明顯變化。

3.6 加樣回收率試驗

精密稱取痛痹康膠囊樣品6份，約2.5g，分別精密加入等量對照品，按照供試品溶液制備方法處理，并按照“2.1”所述色譜條件進(jìn)行測定，計算回收率，結(jié)果見表1。結(jié)果表明，該方法測得的加樣回收率在95%～105%之間，RSD為2.15%，回收率符合要求。

3.7 樣品含量測定

取痛痹康膠囊樣品3批，按供試品溶液制備方法制備，按上述色譜條件依次測定,計算士的寧含量，結(jié)果見表2。測得痛痹康膠囊中士的寧的平均含量為0.19mg/粒，符合規(guī)定。

表2 樣品中士的寧含量測定結(jié)果

表1 加樣回收率實驗結(jié)果 (n=6)

4 討論

筆者參考了《中國藥典》2010年版[3]馬錢子藥材中士的寧的含量測定方法及相關(guān)文獻(xiàn)。針對該制劑的特點，主要對含量測定方法中液相色譜的流動相組成和供試品溶液制備方法進(jìn)行了篩選和優(yōu)化。

筆者將士的寧對照品溶液在250～320nm范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，發(fā)現(xiàn)士的寧在280nm處有最大吸收，故確定檢測波長為280nm。藥典中測定士的寧含量使用的流動相為乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸鈉與0.02mol/L磷酸二氫鉀等量混合溶液(用10%磷酸調(diào) pH 至2.8)。考慮到庚烷磺酸鈉為離子對試劑且價格昂貴，且液相平衡時間較長，色譜洗脫步驟繁瑣。文獻(xiàn)[4-5]報道，當(dāng)在流動相中加入三乙胺后，色譜峰峰形和分離度均得到了明顯改善。王亞靜[6]采用C8柱，以甲醇-水-冰醋酸( 100∶480∶35，用三乙胺調(diào)pH3.2) 為流動相時，能使樣品中的士的寧與馬錢子堿分離開來，說明采用三乙胺調(diào)pH值也是一種有效的方法，其他文獻(xiàn)也有類似報道[7]。因此，參考上述文獻(xiàn)，經(jīng)過多次實驗，選擇了正相硅膠柱，以正己烷-二氯甲烷-無水甲醇-三乙胺(47.5∶47.5∶5∶0.4)為流動相，可使士的寧的峰形和分離度都較好。

圖1 痛痹康膠囊高效液相色譜

此外，筆者還考察了供試品溶液制備方法中不同超聲提取時間對士的寧含量的影響，發(fā)現(xiàn)考察的四種提取時間的士的寧含量分別為0.277mg/mL、0.354mg/mL、0.344mg/mL、0.277mg/mL，說明超聲提取時間對士的寧的含量有一定影響，故選擇士的寧含量最高的60min。

綜上所述，該方法精密度好，操作簡單，準(zhǔn)確可靠，可用于痛痹康膠囊中士的寧的含量測定及該制劑的質(zhì)量控制。

[1] 張錫瑋,李國信,盧春玲,等.仲香膠囊Ⅰ期臨床耐受性研究[J].中國新藥雜志,2009,18(5):424-426.

[2] 房丹,劉維,劉曉亞,等.馬錢子藥理學(xué)研究進(jìn)展[J].遼寧中醫(yī)雜志,2007,34(7):1018-1020.

[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].一部.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:48.

[4] 孫凌,李永吉,王艷宏,等.高效液相色譜法測定接骨挫膠囊中士的寧含量[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2011,17(16):98-99.

[5] 周玲,孫漢斌,鄧旭坤,等.高效液相色譜法測定3種馬錢屬藥材中士的寧和馬錢子堿的含量[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2012,32(16):1301-1302.

[6] 王亞靜.HPLC同時測定腰痛寧貼片中的士的寧和馬錢子堿[J].華西藥學(xué)雜志,2001,26(1):73-74.

[7] 張丹,王之梅,顏學(xué)偉,等.HPLC法測定偏癱康復(fù)液中士的寧和馬錢子堿的含量[J].中國新藥與臨床藥理,2012,23(3):335-338.

(責(zé)任編輯：尹晨茹)

Content Determination of Strychnine in TongBikang Capsule by HPLC

Shi Meng,Ren Yandong*,Xiao Yan,Liu Zhiqiang

(Yangze River Pharmaceutical Group ,Guangzhou Hairui pharmaceutical Co.,Ltd.,Guangzhou 510663, china)

Objective:To establish a method for the determination of strychnine in TongBikang capsule, thus to provide a scientific basis for its quality control.Methods:HPLC method was adopted. These separation was performed on Ecosil HPLC column with mobile phase consisted of Hexane-dichloromethane-anhydrous methanol-triethylamine (47.5∶47.5∶5∶0.4) at the flow rate of 1.0mL/min. The detection wavelength was set at 280nm and the injection volume was 10μL.Results:The linear range of strychnine was 31.00～387.40μg/mL (r=0.999 86) with an average recovery of 101.8% (RSD=2.15%, n=6) . The average concentration of strychnine was 0.19mg/tables.Conclusion:The method is simple, stable, reproducible, and can be used for the preparation of quality control.Key Words: TongBikang Capsule;Strychnine;Content Determination

2014-04-02

施猛(1976-)，男，碩士，揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)廣州海瑞藥業(yè)有限公司工程師，研究方向為藥品研發(fā)。

任亞東(1978-)，男，碩士，揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)廣州海瑞藥業(yè)有限公司執(zhí)業(yè)藥師，研究方向為藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理。

R284.1

A

1673-2197(2014)12-0022-03