降脂寧顆粒薄層鑒別研究

莫 冬

(廣西潤(rùn)達(dá)制藥股份有限公司，廣西 河池 547000)

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降脂寧顆粒薄層鑒別研究

莫 冬

(廣西潤(rùn)達(dá)制藥股份有限公司，廣西 河池 547000)

目的：建立降脂寧顆粒中山楂、荷葉、決明子的薄層鑒別方法。方法：采用薄層色譜法，薄層板選用硅膠G板，采用合適的溶劑展開(kāi)后，在紫外儀下，根據(jù)特征峰的位置檢測(cè)相應(yīng)藥物是否存在。結(jié)果：山楂特征成分熊果酸、荷葉和決明子薄層圖譜均在相應(yīng)位置與降脂寧顆粒薄層圖譜呈現(xiàn)同樣的特征點(diǎn)。在規(guī)定的色譜條件下，各峰分離效果好，斑點(diǎn)清晰，陰性樣品無(wú)干擾。結(jié)論：研究建立的方法重現(xiàn)性好，操作簡(jiǎn)單，特異性強(qiáng)，可用于降脂寧顆粒的質(zhì)量控制。

降脂寧顆粒；山楂；荷葉；決明子；薄層鑒別

降脂寧顆粒由山楂、荷葉、決明子、制何首烏四味中藥組成，原處方收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑》第13冊(cè)116頁(yè)，標(biāo)準(zhǔn)代號(hào)為WS3-B-2549-97，原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)“鑒別”項(xiàng)下有生物堿類(lèi)、蒽醌類(lèi)及黃酮類(lèi)成分的定性鑒別，但其專(zhuān)屬性差。故參考上述質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)[1]，對(duì)本品各藥味的薄層鑒別進(jìn)行研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

硅膠G(層析用)，青島海洋化工廠生產(chǎn)；ZF-2型三用紫外儀，上海市安亭電子儀器廠生產(chǎn)；HS-10260D超聲波清洗器，天津市恒奧科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)。

1.2 試藥

降脂寧顆粒，批號(hào)：20121001、20121002、20121003，廣西潤(rùn)達(dá)制藥股份有限公司提供；降脂寧顆粒，批號(hào)：20121022，吉林某某藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；熊果酸對(duì)照品(批號(hào)：110742-201220)、荷葉對(duì)照藥材(批號(hào)：121322-200903)、決明子對(duì)照藥材(批號(hào)：121011-201005)、何首烏對(duì)照藥材(批號(hào)：120934-201009)均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院；甲醇、鹽酸、乙酸乙酯、羧甲基纖維素鈉、甲苯、甲酸、硫酸、乙醇、氫氧化鈉、乙醚、丙酮、石油醚、氨水、三氯甲烷、環(huán)己烷、二氯甲烷、碘化鉍鉀、茚三酮、磷鉬酸均為分析純，購(gòu)自南寧藍(lán)天實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司；蒸餾水為實(shí)驗(yàn)室自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 山楂特征成分熊果酸薄層色譜鑒別

2.1.1 供試品溶液制備 取4批降脂寧顆粒(20121001、20121002、20121003、20121022)樣品各10g，研細(xì)，加甲醇30mL，超聲處理30min，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0mL溶解，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴mL溶解，作為供試品溶液。

2.1.2 對(duì)照品溶液制備 取熊果酸對(duì)照品適量，加乙酸乙酯制成每lmL含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.1.3 陰性樣品溶液制備 按處方工藝制成不含山楂的降脂寧顆粒陰性樣品，按照“2.1.1”項(xiàng)制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.1.4 鑒別方法 按照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn)步驟[2]，吸取上述供試品溶液各5μL、對(duì)照品溶液2μL、陰性對(duì)照溶液5μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20∶4∶0.5)為展開(kāi)劑展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，于105℃下加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置于日光及紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，分別顯相同顏色的斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn)。薄層色譜分離效果好，斑點(diǎn)清晰，圓整，比移值適中(Rfa=0.48)，重現(xiàn)性和專(zhuān)屬性好，陰性對(duì)照無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

2.1.5 其它提取純化方法研究 曾參照文獻(xiàn)[1]和2010年版藥典“山楂”項(xiàng)下的鑒別對(duì)以下提取純化方法進(jìn)行了對(duì)比試驗(yàn)研究：①取本品100g，研細(xì)，加乙醚250mL，浸漬約6h，不時(shí)振搖，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇lmL溶解，作為供試品溶液；②取本品100g，研細(xì)，加石油醚(60～90℃)250mL，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇lmL溶解，作為供試品溶液；③取本品4g，研細(xì)，加乙酸乙酯20mL，超聲處理15min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状糽mL溶解，作為供試品溶液；④取本品4g，研細(xì)，加乙醇40mL，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0mL溶解，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴?mL溶解，作為供試品溶液。結(jié)果表明提取方法①和②與上述“2.2.1”提取方法效果相差不大，但上述兩種方法取樣量大，提取時(shí)間較長(zhǎng)；提取方法③提取效果不及方法④，但方法④的取樣量偏小，斑點(diǎn)不夠清晰。故優(yōu)選出上述“2.1.1”提取方法。

2.2 荷葉薄層色譜鑒別研究

2.2.1 供試品溶液制備 取4批降脂寧顆粒(20121001、20121002、20121003、20121022)樣品各5g，研細(xì)，加甲醇30mL，加熱回流30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?5mL，用10%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至10，用乙醚振搖提取3次，每次15mL，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，作為供試品溶液。

2.2.2 對(duì)照藥材溶液制備 取荷葉對(duì)照藥材2g，按照供試品溶液制備方法制成對(duì)照藥材溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液制備 按處方工藝制成不含荷葉的降脂寧顆粒陰性樣品，按照供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.2.4 鑒別方法 參照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn)步驟[2]，吸取上述供試品溶液各10μL、對(duì)照藥材溶液6μL、陰性對(duì)照溶液10μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-丙酮-甲醇(10∶3∶3∶0.5)為展開(kāi)劑展開(kāi)，取出，晾干，置于紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。薄層色譜分離效果好，斑點(diǎn)清晰，圓整，比移值適中(Rfa=0.44)，重現(xiàn)性和專(zhuān)屬性好，陰性對(duì)照無(wú)干擾。見(jiàn)圖2。

2.2.5 其他提取純化方法、不同展開(kāi)系統(tǒng)及檢視條件研究 曾有參照文獻(xiàn)[1]對(duì)以下提取純化方法進(jìn)行了對(duì)比試驗(yàn)研究：①取本品10g，研細(xì)，加乙醇40mL，加熱回流30min，濾過(guò)，濾液加10%氫氧化鈉溶液5mL調(diào)成堿性，加三氯甲烷30mL，振搖提取，分取三氯甲烷液，水浴蒸干，殘?jiān)尤燃淄?mL溶解，作為供試品溶液；②取本品10g，研細(xì)，加稀乙醇40mL，加熱回流30min，濾過(guò)，濾液加10%氫氧化鈉溶液5mL調(diào)成堿性，加乙醚30mL，振搖提取，分取乙醚液，水浴蒸干，殘?jiān)尤燃淄?mL溶解，作為供試品溶液；③取本品5g，研細(xì)，加甲醇50mL，加熱回流30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?5mL，用40%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至10，用三氯甲烷振搖提取3次，每次15mL，合并三氯甲烷，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，作為供試品溶液。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明提取方法①、②提取效果不及上述“2.2.1”項(xiàng)提取方法，而“2.2.1”項(xiàng)方法提取效果較方法③略差，但考慮到三氯甲烷毒性太大，故優(yōu)選出“2.2.1”提取方法。

另試用了不同的展開(kāi)系統(tǒng)：①三氯甲烷-甲醇-濃氨試液(20∶3∶1)；②三氯甲烷-甲醇-濃氨試液(20∶3.5∶0.5)；③環(huán)己烷-三氯甲烷-二乙胺(7∶2∶1)；④二氯甲烷-甲醇-濃氨試液(20∶3∶1)。試驗(yàn)結(jié)果表明上述展開(kāi)系統(tǒng)分離效果均不及“2.2.1”展開(kāi)系統(tǒng)。

檢視條件：①以稀碘化鉍鉀試液噴霧，日光下檢視；②以0.5%茚三酮溶液噴霧，105℃加熱后日光下檢視，試驗(yàn)結(jié)果表明上述顯色效果均不及“2.2.1”檢視方法。

2.3 決明子薄層色譜鑒別

2.3.1 供試品溶液制備 取4批降脂寧顆粒(20121001、20121002、20121003、20121022)樣品各10g，研細(xì)，加甲醇30mL，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0mL溶解，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴?mL溶解，作為供試品溶液。

2.3.2 對(duì)照藥材溶液制備 取決明子對(duì)照藥材1g，加甲醇20mL，加熱回流30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，作為對(duì)照藥材溶液。

2.3.3 陰性樣品溶液制備 按處方工藝制成不含決明子的降脂寧顆粒陰性樣品，按照供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.3.4 鑒別方法 按照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄Ⅵ B)實(shí)驗(yàn)步驟[2]，吸取上述供試品溶液各10μL、對(duì)照藥材溶液5μL、陰性對(duì)照溶液10μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚 (60～90℃)-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)的上層溶液為展開(kāi)劑展開(kāi)，取出，晾干，置于紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)，置于氨蒸氣中后，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色。薄層色譜分離效果好，重現(xiàn)性和專(zhuān)屬性好，陰性對(duì)照無(wú)干擾。見(jiàn)圖3。

2.3.5 其它提取純化方法研究 參照2010年版中國(guó)藥典“決明子”鑒別項(xiàng)對(duì)以下提取純化方法進(jìn)行了對(duì)比試驗(yàn)研究：取本品10g，研細(xì)，加甲醇30mL，浸漬1h，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0mL溶解，再加鹽酸1mL，置于水浴中加熱30min，立即冷卻，用乙醚振搖提取2次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，作為供試品溶液。試驗(yàn)結(jié)果表明兩種提取方法效果差不多，但“2.3.1”項(xiàng)提取方法所用的時(shí)間較短，故選用“2.3.1”項(xiàng)提取方法。將決明子對(duì)照藥材的提取方法與文獻(xiàn)[1]的提取方法作了對(duì)比：取決明子對(duì)照藥材1g，加三氯甲烷50mL，加熱回流30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，作為對(duì)照藥材溶液。試驗(yàn)結(jié)果表明該法與“2.3.1”項(xiàng)對(duì)照藥材的方法提取效果差不多，但三氯甲烷毒性太大，故選用“2.3.1”項(xiàng)提取方法。

2.4 制何首烏薄層色譜鑒別研究

參照2010年版藥典對(duì)制何首烏進(jìn)行鑒別研究：取本品10g，研細(xì)，加乙醇50mL，加熱回流1h，濾過(guò)，濾液濃縮至3mL，作為供試品溶液。另取何首烏對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液。上述樣品點(diǎn)樣于G板上，以甲苯-乙醇(2∶1)為展開(kāi)劑，紫外光燈365nm下檢視或以10%磷鉬酸硫酸溶液噴霧，稍加熱后置于紫外光燈365nm下檢視。試驗(yàn)結(jié)果表明樣品斑點(diǎn)較弱，故暫不列入降脂寧顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中。

3 討論

山楂提取純化方法較多，但還不十分全面，有待進(jìn)一步研究；荷葉薄層色譜鑒別的展開(kāi)系統(tǒng)和檢視條件還有待完善；決明子的薄層色譜鑒別要進(jìn)一步考察特征成分的對(duì)比；制何首烏的薄層色譜鑒別要借鑒前人研究經(jīng)驗(yàn)，進(jìn)行耐用性考察，建立更完善的薄層色譜鑒別法。近年來(lái)，關(guān)于降脂寧顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究較多，本文實(shí)驗(yàn)研究對(duì)降脂寧顆粒質(zhì)量控制和標(biāo)準(zhǔn)制定具有一定的參考意義。

圖1 降脂寧顆粒山楂薄層色譜

注：1～3降脂寧顆粒(20121001,20121002,20121003)；4.降脂寧顆粒(20121022,吉林某某藥業(yè))；5.熊果酸對(duì)照品；6.陰性對(duì)照(缺山楂)(溫度：31℃；相對(duì)濕度：78%)。

圖2 降脂寧顆粒荷葉薄層色譜

注：1～3.降脂寧顆粒(20121001,20121002,20121003)；4.降脂寧顆粒(20121022,吉林某某藥業(yè))；5.荷葉對(duì)照藥材；6.陰性對(duì)照(缺荷葉)(溫度：32℃；相對(duì)濕度：78%)。

圖3 降脂寧顆粒決明子薄層色譜

注：1～3.降脂寧顆粒(20121001,20121002,20121003)；4.降脂寧顆粒(20121022,吉林某某藥業(yè))；5.決明子對(duì)照藥材；6.陰性對(duì)照(缺決明子)(溫度：32℃；相對(duì)濕度：78%)。

[1] 降脂寧膠囊試行標(biāo)準(zhǔn).中成藥地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)·內(nèi)科心系分冊(cè)[S].標(biāo)準(zhǔn)代號(hào)：WS-11287(ZD-1287),2002:143.

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[M].一部.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:附錄34-35.

(責(zé)任編輯：尹晨茹)

Identification Research of Thin Layer in Jiangzhining Granules

Mo Dong

(Guangxi Runda Pharmaceutical Co., Ltd.,Guangxi Hechi 547000,China)

Objective:To establish an identification method of thin layer of hawthorn, lotus leaf and cassia seed in the Jiangzhining Granules.Methods:Using thin layer chromatography, silica G plate for thin layer plate.Results:Selecting identification methods for thin layer of constituents with hawthorn characteristic like ursolic acid, lotus leaf and cassia seed. Under the specified chromatographic condition, the separation is good, spots are clear, and there is no interference in negative sample. Conclusion:The method established in the research is with good reproducibility and easy to operate, which can be used to identify the thin layer of Jiangzhining Granules.

Jiangzhining Granules; Hawthorn; Lotus Leaf; Cassia Seed; Thin Layer Identification

2014-03-18

R284.1

A

1673-2197(2014)12-0029-03