HPLC同時測定天麻片中羌活醇和異歐前胡素的含量

楊躍龍

（懷化市食品藥品檢驗所，湖南懷化 418000）

HPLC同時測定天麻片中羌活醇和異歐前胡素的含量

楊躍龍

（懷化市食品藥品檢驗所，湖南懷化 418000）

目的：建立高效液相色譜法（HPLC）同時測定天麻片中羌活醇和異歐前胡素的含量。方法：色譜柱：Shimadzu C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相：乙腈-水（44∶56），流速為1.0 mL/min，柱溫：30℃，檢測波長：310 nm。結果：羌活醇和異歐前胡素進樣濃度分別在2.4～120 μg/mL（r=0.999 9），1.21～60.5 μg/mL（r=0.999 9）范圍內線性關系良好，平均加樣回收率分別為98.22%、97.82%（n=9）。結論：本法簡便，準確，重現性好，能排除其他成分的干擾，提供了更好的控制該藥質量的方法。

高效液相色譜法；天麻片；羌活醇；異歐前胡素

WORDSHPLC；Rhizoma Gastrodiae Tablets；Notopterol；Isoimperatorin

天麻片是由羌活、天麻、獨活、杜仲等10味藥材提取制成的中藥制劑，具有祛風除濕、舒筋通絡、活血止痛的功效，用于肢體拘攣、手足麻木、腰腿酸痛等癥[1-2]。羌活與天麻同為方中主藥，現行標準（部頒標準中藥成方制劑第四冊：WS3-B-0694-92）中已有關于天麻素含量測定的規定，但未規定對羌活的有效成分進行測定。為有效控制本品的質量，參照相關文獻[3-12]對方中羌活中的羌活醇和異歐前胡素同時進行含量測定。

1 儀器與試藥

日本島津LC-20ATVP高效液相色譜儀（LC-20AT四元泵；SPD-M20A型二極管陣列檢測器；SIL-20A自動進樣器，LCsolution色譜工作站）；CBL9960A超聲波清洗器（上海科導超聲儀有限公司）；METTLER TOLEDO十萬分之一電子分析天平（瑞士）。

羌活醇對照品（批號：110826-200818）、異歐前胡素對照品（批號：110827-200407），均購自中國食品藥品檢定研究院；天麻片（懷化正好制藥有限公司，批號：140101，140102，140103；0.26 g/片）；乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

Shimadzu C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（44∶56），流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：310 nm；進樣量：20 μL。按羌活醇計算，理論板數均不低于5 000。

2.2 對照品溶液制備

精密稱取羌活醇對照品12.00 mg，異歐前胡素6.05 mg置同一100 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為混合對照品儲備液。

2.3 供試品溶液制備

取本品20片，精密稱定，研細，取2.6 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，加甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取濾液，即得。

2.4 線性關系考察

分別精密量取上述混合對照品儲備液1，5，10，20 mL置50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別吸取上述4種稀釋后的溶液及儲備液各20 μL注入液相色譜儀測定，按2.1項下色譜條件測定峰面積，以峰面積為縱座標，以進樣量為橫座標，繪制標準曲線。結果見表1。

表1 標準曲線

2.5 陰性對照試驗

取缺羌活的陰性制劑適量（約相當于供試品的量），按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各20 μL，按2.1項下的色譜條件分別進樣測定，記錄色譜圖。結果顯示，陰性對照溶液對測定結果無干擾，見圖1。

圖1 天麻片HPLC圖

2.6 精密度試驗

精密吸取同一供試品溶液20 μL，按2.1項下的色譜條件連續進樣6次，結果羌活醇、異歐前胡素RSD分別為0.95%，0.86%，表明精密度良好。

2.7 穩定性試驗

精密吸取供試品溶液20 μL，按2.1項下的色譜條件，于0，5，10，15，20，24 h進樣，測定其峰面積積分值，羌活醇峰面積的RSD為0.71%；異歐前胡素峰面積的RSD為0.77%，結果表明供試品溶液在24 h內是穩定的。

2.8 重復性試驗

取同一批樣品（批號：140101），按2.3項下的供試品溶液制備方法，平行制備6份，依法測定，羌活醇和異歐前胡素的總量為0.22 mg/片，RSD為0.92%，結果表明該方法重復性好。

2.9 加標回收試驗

精密稱取本品1.3 g（批號：140101，含量：羌活醇0.15 mg/片；異歐前胡素0.07mg/片；平均片重：0.2610 g），共9份，置錐形瓶中，分別精密加入羌活醇與異歐前胡素混合對照品溶液（羌活醇0.15 mg/mL；異歐前胡素0.07mg/mL）4.0，4.0，4.0，5.0，5.0，5.0，6.0，6.0，6.0 mL，按供試品溶液制備方法制成加標回收溶液，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取濾液按2.1項下的色譜條件進行含量測定并計算回收率。結果見表2。

2.10 樣品的測定

取3批樣品，按2.3項下的供試品溶液制備方法制備，精密吸取20 μL，注入液相色譜儀測定，以外標法計算樣品中羌活醇、異歐前胡素的含量。測定結果見表3。

表2 回收試驗結果（n＝9）

表3 樣品含量測定結果表（n＝3）

3 討論

3.1 指標性成分選擇

中成藥的化學成分極其復雜，而且在治療疾病中是靠多個活性成分相互作用才能起效，一個成分很難代表一味藥的效果。因此選擇盡可能多的成分來評價藥材質量。這兩個成分是天麻片中羌活的主要有效成分[13]，測定其含量十分必要。

3.2 流動相及檢測波長相選擇

為盡可能在短時間內獲得好的分離效果，使用了不同組成的流動相（甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.05%冰醋酸），通過以上三種流動相系統比較綜合考慮，最終確定水-乙腈為流動相。經紫外-可見光分光光度計掃描，羌活醇與異歐前胡素在310 nm都有較大的吸收。采用HPLC時，310 nm作為其檢測波長，羌活醇與異歐前胡素在圖譜中能同時成為主要吸收峰，且其他物質對羌活醇與異歐前胡素的測定沒有干擾。故選擇310 nm作為檢測波長。

3.3 提取方法選擇

為能使被測化合物提取效果最佳，考察了提取溶劑（甲醇、乙醇、70%甲醇）、提取方法（超聲、回流）等影響因素，最后選擇甲醇超聲30 min。

3.4 含量測定方法選擇

考慮到羌活醇與異歐前胡素極性相差不大，可以采用恒定流動相同時對羌活醇與異歐前胡素進行分析。

[1]國家食品藥品監督管理局.國家食品藥品監督管理局標準（試行）YBZ10382006[S].2006-07-11.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2010年版）一部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010：170.

[3]朱磊，趙瑞.高效液相色譜法測定羌活中羌活醇和異歐前胡素的含量[J].科技創新與應用，2012，24（3）：103.

[4]周毅，蔣舜媛，孫輝，等.羌活中揮發油和異歐前胡素的含量測定[J].中國中藥雜志，2007，7（32）：16-19.

[5]張娜，李云霞，孟憲生，等.高效液相色譜法測定羌活藥材中異歐胡前胡素含量[J].遼寧中醫雜志，2006，7（33）：870-871.

[6]張芳，黎定標.HPLC測定羌活提取物中異歐胡前胡素的含量[J].南昌高專學報，2007，3（70）：107-108.

[7]趙湍凌，楊月妍，聞亮.HPLC法同時測定撤熱柴胡飲中連翹苷和黃芩苷的含量[J].中藥新藥與臨床藥理，2011，22（1）：111-113.

[8]代雪平，宋漢敏.高效液相色譜法測定羌活中異歐前胡素含量[J].遼寧中醫學院學報，1999，1（1）：35-36.

[9]李智勇，張興水，王軍練，等.羌活的研究進展[J].陜西中醫學院學報，2003，6（26）：57-60.

[10]趙渤年，劉青，寇桂風，等.HPLC法測定九味羌活顆粒中歐前胡素、異歐前胡素的含量[C].濟南：山東省藥學會第一屆學術年會論文集（下），2005：233-241.

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[12]馬永貴，王婷，賀玉姣，等.HPLC測定青海不同海拔野生與栽培羌活中異歐前胡素的含量[J].青海師范大學學報，2012，1（24）：21-23.

[13]古力娜·沙爾比，郭洪祝，郭慧，等.HPLC測定羌活中阿魏酸、羌活醇、苯乙基阿魏酸酯、和異歐前胡素[J].中草藥，2006，6（37）：937-938.

Simultaneous Determination of Contents of Notopterol and Isoimperatorin in Rhizoma Gastrodiae Tablets by HPLC

Yang Yuelong（Institute for Food and Drug Control of Huaihua City,Hunan Huaihua 418000，China）

Objective：To establish a HPLC method for the content determination of notopterol and isoimperatorin in rhizoma gastrodiae tablets.Methods：The column of Shimadzu C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）was used with acetonitrile-water（44∶56）as mobile phase,the flow rate was 1.0 mL/min,the column temperature was at 30℃and the detection wavelength was at 310 nm.Results：The calibration curves were linear within the range of 2.4～120 μg/mL（r=0.999 9）for notopterol and 1.21～60.5 μg/mL（r=0.999 9）for isoimperatorin.The average recovery was 98.22%and 97.82%（n=9）for notopterol and isoimperatorin respectively.Conclusion：The method is specific,accurate and reproducible,and can exclude the interference of other components.It can be used for the quality control of the product.

10.3969/j.issn.1672-5433.2014.07.006

2014-05-05）

楊躍龍，男，主管藥師。研究方向：藥品檢驗及藥品質量標準。E-mail：307623361@qq.com