H PLC同時測定復方雞骨草膠囊中綠原酸、芍藥苷和梔子苷的含量

羅國瓊

（廣西金嗓子有限責任公司，廣西柳州 545001）

H PLC同時測定復方雞骨草膠囊中綠原酸、芍藥苷和梔子苷的含量

羅國瓊

（廣西金嗓子有限責任公司，廣西柳州 545001）

目的：建立高效液相色譜法（HPLC）測定復方雞骨草膠囊中綠原酸、芍藥苷、梔子苷的含量。方法：采用Agilent TC-C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脫；檢測波長為0～21 min：327 nm，21～27 min：238 nm，27～40 min：230 nm。結果：綠原酸線性范圍為0.036 1～0.902 5 μg，平均加樣回收率為97.74%，RSD為1.40%（n=6），梔子苷線性范圍為0.148 2～5.929 6 μg，平均加樣回收率為97.68%，RSD為1.14%（n=6），芍藥苷線性范圍為0.098 9～3.954 8 μg，平均加樣回收率為97.70%，RSD為0.99%（n=6）。結論：該方法簡便可行，結果可靠，可有效控制復方雞骨草膠囊的質量。

復方雞骨草膠囊；綠原酸；芍藥苷；梔子苷；HPLC

WORDSCompound Jigucao Capsule；Chlorogenic Acid；Paeoniflorin；Geniposide；HPLC

復方雞骨草膠囊由茵陳、梔子、白芍、毛雞骨草、人工牛黃、珍珠層粉等中藥制成，具有清利肝膽濕熱的功效。臨床主要用于肝膽濕熱所致的脅肋不舒，脘腹脹滿，疲倦乏力，口苦尿黃等癥。為提高其質量可控性，本研究采用高效液相色譜法（HPLC）同時測定了制劑中君臣藥茵陳、梔子及白芍的有效成分綠原酸、芍藥苷、梔子苷的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1200系列液相色譜儀，Waters e2695型液相色譜儀，Shimadzu UV-2405紫外-可見分光光度計，必能信BUG-40超聲儀，AND GR-202電子分析天平。

1.2 試藥

復方雞骨草膠囊及分別不含茵陳、梔子、白芍的陰性樣品由廣西玉林制藥集團有限責任公司提供；對照品綠原酸（110753-200413）、芍藥苷（110736-201136）、梔子苷（110749-200714）購自中國藥品生物制品檢定研究院；乙腈為色譜純，水為超純水，其余所用試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

Agilent TC-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：乙腈A-0.1%磷酸溶液B按表1梯度洗脫；柱溫：35℃；流速：1.0 mL/min；檢測波長：0～21 min：327 nm，21～27 min：238 nm，27～40 min：230 nm；進樣量10 μL。色譜圖見圖1。

表1 流動相變化梯度

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液制備分別精密稱取綠原酸、梔子苷、芍藥苷對照品適量，加70%甲醇制成濃度分別為18.05，148.24，98.87 μg/mL的混合溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液制備取復方雞骨草膠囊內容物1.0 g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，稱定重量，超聲處理（250 W，50 kHz）30 min，取出放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液同供試品溶液方法制備。

2.3 方法學考察

2.3.1 線性關系考察取綠原酸對照品，用70%甲醇制成濃度分別為3.61，7.22，18.05，36.1，72.2，90.25 μg/mL的系列溶液，分別進樣10 μL，在擬定的色譜條件下測定，以進樣量（μg）為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程

表明綠原酸進樣量在0.036 1～0.902 5 μg范圍內呈良好的線性關系。

另取梔子苷對照品系列溶液（濃度為14.824，29.648，59.296，148.24，296.48，592.96 μg/mL），芍藥苷對照品系列溶液（濃度為9.887，19.774，39.548，98.87，197.74，395.48 μg/mL），同綠原酸法繪制標準曲線，分別得回歸方程

圖1 復方雞骨草膠囊HPLC圖

表明梔子苷進樣量在0.148 2～5.929 6 μg范圍內、芍藥苷進樣量在0.098 9～3.954 8 μg范圍內均有較好的線性關系。

2.3.2 精密度試驗精密吸取混合對照品溶液（綠原酸：18.05 μg/mL、梔子苷：148.24 μg/mL、芍藥苷：98.87 μg/mL）10 μL，分別連續進樣6次，測定峰面積，結果綠原酸峰面積的平均值為252.8，RSD為0.51%，梔子苷峰面積平均值為1 444.1，RSD為0.38%，峰面積平均值為560.4，RSD為0.62%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.3.3 穩定性試驗取同一批號（批號：360041）的供試品溶液，分別在0，2，4，8，10，16，24 h進樣1次，測定峰面積。結果綠原酸峰面積平均值為256.1，RSD＝1.37%（n=7）；梔子苷峰面積的平均值為1666.5，RSD＝0.86%（n=7）；芍藥苷峰面積的平均值為527.8，RSD＝1.31%（n=7）。表明供試品溶液在24 h內相對穩定。

2.3.4 重現性試驗取同一批樣品內容物（批號為360041），平行制備6份供試品溶液，按擬定色譜條件在Waters e2695型液相色譜儀上測定其含量。結果綠原酸含量平均值為0.235 5 mg/粒，RSD為1.19%；梔子苷含量平均值為2.132 0 mg/粒，RSD為0.88%；芍藥苷含量平均值為1.132 3 mg/粒，RSD為0.96%，由此可見本法重現性較好。

2.3.5 加樣回收率試驗取已知含量的本品內容物1.0 g（批號：360041），精密稱定，共18份，每6份分別精密加入綠原酸、梔子苷、芍藥苷對照品適量，按供試品溶液制備方法制成供試液，依照所擬色譜條件測定。結果見表2，3，4。

2.3.6 專屬性實驗分別取缺茵陳、梔子、白芍的陰樣對照溶液，照2.1項下色譜條件進樣測定，結果分別在綠原酸、梔子苷、芍藥苷峰的相應位置上未檢出相應的色譜峰，表明本法專屬性較好。見圖1。

表2 綠原酸加樣回收率測定結果

表3 梔子苷加樣回收率測定結果

表4 芍藥苷加樣回收率測定結果

2.4 樣品含量測定

取復方雞骨草膠囊內容物1.0 g，精密稱定，照2.2項下制備方法制成供試液，精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，測定，以外標法計算含量，結果批號為360041，360044，360045，360047，360049的樣品中綠原酸的含量分別為0.235 5，0.240 8，0.246 7，0.227 0，0.231 7 mg/粒；梔子苷的含量分別為2.1320，2.113 6，2.146 0，2.526 8，2.430 9 mg/粒；芍藥苷的含量分別為1.132 3，1.216 6，1.210 7，1.156 4，1.035 5 mg/粒。

3 討論

3.1 檢測波長的選擇

根據綠原酸、梔子苷、芍藥苷的各自紫外掃描圖譜，同時參照相關文獻[1-5]所用波長，分別選用其最大吸收波長327，238，230 nm作為其檢測波長，在各自的洗脫時間內利用可變紫外檢測器自由變換成各自的最大吸收波長，從而得到最理想的色譜峰。

3.2 流動相的選擇

采用HPLC分別測定綠原酸、梔子苷、芍藥苷含量的流動相很多，有甲醇-水，甲醇-磷酸溶液，乙腈-水，乙腈-磷酸溶液等[1-15]。經過實驗考察比較，要使三種成分在復方制劑中同時分離，需采用梯度洗脫才能取得較滿意的結果，本法最終選定的流動相系統可使綠原酸、梔子苷、芍藥苷均能達到基線分離，與其他峰分離度大于1.5，理論板數均大于6 000。

3.3 供試品溶液的制備方法考察

參考相關文獻[7-15]，采用了甲醇、乙醇、70%甲醇、70%乙醇、50%甲醇、50%乙醇等不同的溶劑提取，同時比較了加熱回流、浸泡與超聲處理等不同的提取方法，結果表明選用70%甲醇與50%甲醇回流與超聲提取均可以使3種有效成分完全提取出，但50%甲醇溶液過濾較為困難，文中所用方法最為方便、快捷，因此選用。

本研究采用HPLC同時測定復方雞骨草膠囊中綠原酸、梔子苷和芍藥苷的含量，結果表明該方法重現性、穩定性好，專屬性強，精密度、回收率均較好，可作為該制劑的質量控制方法。

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Simultaneous Determination of Contents of Chlorogenic Acid,Paeoniflorin and Geniposidein Compound Jigucao Capsules by HPLC

Luo Guoqiong（Guangxi Golden Throat Co.LTD.，Guangxi Liuzhou 545001，China）

Objective:To establish a method for the content determination of chlorogenic acid，paeoniflorin and geniposide in compound jigucao capsules.Methods:Agilent TC-C18column（4.6mm×150mm，5 μm）was adopted with acetonitrile-0.1%phosphoric acid solution as mobile phase，gradient elution，a detection wavelength of 0～21 min at 327nm，21～27 min at 238 nm，27～40 min at 230 nm.Results:There was a good linear relationship within the range of 0.036 1～0.902 5 μg for chlorogenic acid，0.148 2～5.929 6 μg for geniposide，and 0.098 9～3.954 8 μg for paeoniflorin.The average recoveries were 97.74%with RSD of 1.40%（n=6），97.68%with RSD of 1.14%（n=6）and 97.70%with RSD of 0.99%（n=6）for chlorogenic acid，geniposide and paeoniflorin respectively.Conclusion: The method was simple and reliable，it can be applied to the quality control of compound jigucao capsules.

10.3969/j.issn.1672-5433.2014.07.007

2014-04-17）

羅國瓊，女，助理工程師。研究方向：中藥質量標準分析與研究。E-mail：ler630@126.com