HPLC測定跌打丸中人參皂苷Rg1的含量

竇紅允 黃東杰 李明 王孟陽 張潔 田永慶

（滄州市食品藥品檢驗所，河北 滄州 061001）

HPLC測定跌打丸中人參皂苷Rg1的含量

竇紅允 黃東杰 李明 王孟陽 張潔 田永慶

（滄州市食品藥品檢驗所，河北 滄州 061001）

目的：建立跌打丸中人參皂苷Rg1的含量測定。方法：色譜柱為Agilent ZORBAX C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈-水（78∶22）；流速：0.8 mL/min，檢測波長為203 nm，柱溫為30℃。結果：人參皂苷Rg1濃度在255.40～766.20 μg/mL與峰面積有良好的線性關系（r=0.998 5），平均回收率為92.8%（n=6），RSD為0.58%。結論：該方法快速、準確、重現性好，可作為跌打丸的質量控制方法。

跌打丸；高效液相色譜法；人參皂苷Rg1；含量測定

跌打丸為骨傷科常用的中成藥，由三七、紅花、血竭、骨碎補、乳香、沒藥、甘草等24味中藥組成，具有活血散瘀、消腫止血之功效，用于跌打損傷、瘀血腫痛、閃腰岔氣[1]，2010年收入《河北省納入基本藥物管理的非基本藥物目錄》。大蜜丸現收載于《中國藥典》（2010年版）一部，小蜜丸執行《國家藥品標準》（試行）——YBZ29212005。跌打丸大蜜丸質量標準中僅收載了血竭素的含量測定，對其君藥三七無含量控制，皂苷成分是三七中的主要有效成分之一，迄今為止已從三七的不同部位分離得到 60余種皂苷成分[2]，其中人參皂苷Rg1含量較高，因此本研究以人參皂苷Rg1為含量測定指標，采用高效液相色譜法（HPLC）對方中的人參皂苷Rg1含量進行了測定，以完善其質量標準。

1 儀器與材料

島津2010A高效液相色譜儀（日本），XS105DU電子天平（上海梅特勒公司），KQ-300VED型雙頻數控超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司），人參皂苷Rg1對照品（原中國藥品生物制品檢定所提供，批號110703-201027,含量96.3%）；甲醇、乙腈為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

跌打丸（北京同仁堂科技發展股份有限公司制藥廠，批號0010209、0010221、12011653、12010456、12010463）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

采用Agilent ZORBAX C18色譜柱 （4.6 mm× 250 mm，5 μm），以乙腈-水（78∶22）為流動相，流速：0.8 mL/min，檢測波長為203 nm，柱溫為30℃，進樣量 20 μL，理論板數按人參皂苷 Rg1峰計算不低于 5 000；在此條件下供試品中的人參皂苷Rg1峰與相鄰的色譜峰達到了基線分離。在本色譜條件下，對照品、供試品、陰性樣品色譜圖見圖1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Rg1對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL約含500 μg的溶液。

圖1 人參皂苷Rg1HPLC圖

2.2.2 供試品溶液的制備取跌打丸，剪碎，取約3 g，精密稱定，加硅藻土2 g，研勻，精密加入甲醇50 mL，精密稱定，加熱回流2 h，放冷，精密稱定，補足減失的重量，濾過，精密量取續濾液 25 mL，蒸干，殘渣加水30 mL使溶解，用乙醚30 mL洗滌，水液用水飽和的正丁醇振搖提取 3次（30，20，20 mL），合并正丁醇液，加氨試液 40 mL，搖勻，放置分層，上層溶液用正丁醇飽和的水40 mL洗滌，取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇使溶解，轉移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備按處方稱取除三七外各味藥材，按2.2.2方法制得陰性樣品溶液。

2.3 線性關系考察

取上述對照品溶液，分別進樣 10，15，20，25，30 μL，注入液相色譜儀，按2.1項色譜條件進行測定峰面積，以進樣量（μg）為橫坐標（X），人參皂苷 Rg1峰面積為縱坐標（Y），得回歸方程，

Y=9 116＋ 434 374 X，r=0.998 5，

人參皂苷 Rg1在 255.40～ 766.20 μg/mL與峰面積有良好的線性關系。

2.4 方法學考察

2.4.1 精密度試驗取供試品溶液，按2.1項色譜條件連續進樣 6次，每次 20 μL，測定峰面積的RSD為0.76%，結果表明儀器的精密度良好。

2.4.2 穩定性試驗取同一批號（12010463）供試品溶液，分別于0，4，8，12，16，24 h精密進樣20 μL，測得人參皂苷Rg1峰面積的RSD為0.83%，表明供試品溶液至少在24 h內穩定。

2.4.3 重現性試驗取同一批號（12010463）供試品 6份，制備供試品溶液，按 2.1項色譜條件測定，計算人參皂苷Rg1質量分數。結果表明，樣品中人參皂苷Rg1質量分數的RSD為0.68%。

2.4.4 加樣回收試驗分別精密量取人參皂苷Rg1對照品甲醇溶液（濃度為0.498 0 mg/mL）5 mL，置6個具塞錐形瓶中，水浴中揮干溶劑，再精密稱取已測定含量的同一批樣品6份（人參皂苷Rg1的含量為0.759 6 mg/g），分別加入上述具塞錐形瓶中，按2.2.2項下的供試品溶液制備方法制備6份供試品溶液，測定人參皂苷 Rg1含量，計算回收率，平均回收率為92.44%（n=6），RSD為0.68%。結果見表1。

表1 人參皂苷Rg1加樣回收試驗

2.5 樣品含量測定

取跌打丸 5批（0010209、0010221、12011653、12010456、12010463），按2.2.2項下的方法制備供試品溶液，并按上述色譜條件，以外標法測定樣品中人參皂苷Rg1的含量。結果樣品中人參皂苷Rg1的質量分數分別為0.88，0.54，0.68，0.80，0.76 mg/丸（n=5）。

3 討論

3.1 提取方法的選擇

同一批號（0010209）樣品，提取人參皂苷 Rg1的方法分別采用了索氏提取、超聲提取、水浴加熱回流提取這3種方法，提取時間均為 2 h，結果顯示超聲提取效果最差，索氏提取和水浴加熱回流提取測定結果基本一致，因此采用相對簡單的水浴加熱回流提取方法。分別采用水浴加熱回流提取 1，1.5，2，2.5 h，結果 2 h與 2.5 h效果差別不大，故采用水浴加熱回流提取2 h作為提取方法。

3.2 流動相的選擇

分別選擇了甲醇-水、乙腈-水為流動相，結果乙腈-水峰形好，分離度比較高。

3.3 不同色譜柱的考察

分別采用了不同廠家的色譜柱 Agilent ZORBAX C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）和phenomenex C18（4.6 mm ×250 mm，5 μm），以乙腈-水（78∶22）為流動相進行試驗，二者均達到滿意的分離效果。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2010年版）一部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010：1154.

[2] 鮑建才，劉剛，叢登立，等.三七化學成分的研究進展[J].中成藥，2006，28（2）：246-254.

Content Determination of Ginsenoside Rg1in Dieda Pills by HPLC

Dou Hongyun，Huang Dongjie，Li Ming，Wang Mengyang，Zhang Jie，Tian Yongqing （Cangzhou Institure for Food and Drug Control，Hebei Cangzhou 061001，China）

Objective：To establish a HPLC method to determine ginsenoside Rg1in dieda pills.Methods：The column of Agilent ZORBAX C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）was used with acetonitrile-water（78:22）as mobile phase，the flow rate was 0.8 mL/min，the detection wavelength was at 203 nm and the column temperature was at 30℃. Results：There was a good linear relationship between ginsenoside Rg1at the concentration of 255.40～ 766.20 μg/mL and the peak area （r=0.998 5），and the average recovery was 92.8% （n=6），RSD was 0.58%.Conclusion：The method is simple，sensitive and accurate.It can be used for the quality control of dieda pills.

Dieda Pills；HPLC；Ginsenoside Rg1；Content Determination

10.3969/j.issn.1672-5433.2014.05.003

2013-10-17）

竇紅允，女，主管藥師。研究方向：藥物分析。通訊作者E-mail：sanxinglouzhu@126.com