花天膠囊對前列腺增生大鼠超氧化物歧化酶和丙二醛的影響

敖 曼，熊 怡，劉 佳

（1.貴州省貴陽市第一人民醫(yī)院，貴州 貴陽 550001； 2.貴州省遵義市第二人民醫(yī)院，貴州 遵義 563000）

良性前列腺增生（BPH）又稱前列腺肥大，多發(fā)于老年男性，是泌尿系統(tǒng)的常見病。BPH的發(fā)病率隨男性年齡遞增而增加，50歲的男性40%有BPH組織學(xué)改變，80歲則高達(dá)90%[1]。隨著我國步入老齡化社會，BPH發(fā)病率的大幅提升，給老年人的健康與生活帶來了嚴(yán)重的危害，因此對BPH的研究和治療顯得極為緊迫和重要。中藥由于具有安全性高、不良反應(yīng)少、療效肯定、適合長期服用等特點(diǎn)，在治療BPH方面具有一定的優(yōu)勢，有著較好的發(fā)展前景[2]。不少BPH患者通過中醫(yī)辨證論治，收效尚佳。毋庸置疑，中藥的諸多優(yōu)點(diǎn)對于BPH患者整體體質(zhì)的調(diào)節(jié)及控制病情的進(jìn)展將起著重要作用[3]。筆者將花天膠囊用于前列腺增生大鼠，并檢測超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量，初步探討其作用機(jī)制。現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 動物與材料

SD大鼠，體重250～300 g，雌雄兼用，貴陽醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號為 SCXK（黔）2002－0001。花天膠囊，主藥為花粉、天麻，囊內(nèi)容物為淡黃色粉末，氣清香，味微甜，每 g含原生藥 0.15 g（上海同濟(jì)堂藥業(yè)有限公司，批號為 091006），臨用前用蒸餾水配制成所需濃度的混懸液；甲睪酮片（上海信誼康捷藥業(yè)有限公司，批號為090101）；前列康（商品名普樂安片，浙江康恩貝制藥股份有限公司，批號為0810123）。U－2001型紫外掃描分光光度計（日本日立公司）。SOD即用型試劑盒（南京建成生物工程研究所）。MDA即用型試劑盒（南京建成生物工程研究所）。

1.2 方法

1.2.1 建模[4]

雄性SD大鼠61只，體重250～300 g。基礎(chǔ)飼養(yǎng)1周適應(yīng)環(huán)境后，隨機(jī)分為6組：對照組（等量0.9%氯化鈉注射液）、模型組（等量 0.9% 氯化鈉注射液）、前列康組（1.60 g /kg）、花天膠囊高劑量組（1.08 g /kg）、中劑量組（0.54 g/kg）、低劑量組（0.27 g /kg）。動物均靜脈滴注給藥，每天上午除對照組大鼠靜脈滴注給予等量0.9%氯化鈉注射液外，其余組均灌胃給予甲睪酮8 mg/kg，制作前列腺增生模型；每天下午除對照組和模型組大鼠給予等量生理鹽水外，其余組均靜脈滴注給予相應(yīng)藥物。各組每日給藥1次，連續(xù)28 d，每隔7 d稱重1次，根據(jù)體重調(diào)整給藥劑量。

1.2.2 SOD 活力檢測

末次給藥后1 h，各鼠稱體重后處死，剖開下腹部，仔細(xì)分離并摘除前列腺，取相同部位等質(zhì)量的前列腺組織，加生理鹽水研磨制備成10%勻漿，用于SOD檢測。按操作步驟完成后，于紫外分光光度計550 nm波長處測定吸光度，計算SOD活力。

組織勻漿中 SOD活力（U/mgprot）＝(對照管吸光度 －測定管吸光度)/對照管吸光度÷50% ×反應(yīng)液總體積/取樣量(mL)÷組織中蛋白含量（mgprot/mL）

操作步驟：對照管依次加入試劑 11.0 mL，蒸餾水 0.1 mL，試劑 20.1 mL，試劑 30.1 mL，試劑 40.1 mL；旋渦混勻器充分混勻，置37℃恒溫水浴箱40 min，加顯色劑 2 mL，測吸光度。2）測定管依次加入試劑1 1.0 mL，各試驗(yàn)組大鼠前列腺組織上清液0.1 mL，試劑 20.1 mL，試劑 30.1 mL，試劑 40.1 mL；旋渦混勻器充分混勻，置37℃恒溫水浴箱40 min，加顯色劑2 mL，測吸光度。用考馬斯亮藍(lán)法測定前列腺組織蛋白濃度。

1.2.3 MDA 含量檢測

取相同部位等質(zhì)量的前列腺組織，加生理鹽水研磨制備成10%勻漿，用于MDA檢測。按操作步驟完成后，于紫外分光光度計550 nm波長處測定吸光度，計算MDA含量。

組織MDA含量（nmol/mL）＝[（測定管吸光度 －測定空白管吸光度）/（標(biāo)準(zhǔn)管吸光度 －標(biāo)準(zhǔn)空白管吸光度）]×標(biāo)準(zhǔn)管濃度（10 nmol/mL）×樣本測試前稀釋倍數(shù)

操作步驟：標(biāo)準(zhǔn)管加入10 nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)品0.1 mL和試劑 1 0.1 mL混勻試劑，再次加入試劑23 mL和試劑31 mL。標(biāo)準(zhǔn)空白管加入無水乙醇0.1 mL和試劑10.1 mL混勻試劑，再次加入試劑2和試劑31 mL。測定管依次加入各試驗(yàn)組大鼠前列腺組織上清液 0.1 mL和試劑 10.1 mL，混勻，再加入試劑 23 mL和試劑31 mL。測定空白管加入依次加入各試驗(yàn)組大鼠前列腺組織上清液0.1 mL和試劑 10.1 mL，混勻，再加入試劑 23 mL和 60%冰醋酸1 mL。混勻后，置95℃水浴10 min，3 500～4 000轉(zhuǎn)離心10 min，取上清液，測吸光度。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠前列腺組織SOD活力及MDA含量比較(±s)

表1 各組大鼠前列腺組織SOD活力及MDA含量比較(±s)

注：與對照組比較，＃P ＜0.01；與模型組比較，*P ＜0.05，△P ＜0.01。NS為0.9%氯化鈉注射液。

MD A含量(n m o L/m g)8 7.9 9 ± 6 5.3 2 155.0 6 ± 2 5.7 9＃1 0 8.9 7 ± 4 3.0 8△1 1 2.2 2 ± 3 2.7 5△1 2 3.7 3 ±59.1 3 1 3 5.9 4 ± 6 6.2 9組別對照組（n＝1 0）模型組（n＝1 1）前列康組（n＝1 0）花天高劑量組（n＝1 1）花天中劑量組（n＝9）花天低劑量組（n＝1 0）劑量（g/k g）等量N S等量N S 1.6 0 1.0 8 0.5 4 0.2 7 S O D活力(U/m g p o r t)1 2 7.9 7 ± 1 4.8 0 7 8.2 4 ± 2 6.6 2＃1 2 7.6 9 ± 3 3.1 6*1 1 0.5 8 ± 3 1.8 7*1 1 5.7 0 ± 4 5.7 6*1 0 4.4 4 ± 3 8.7 9

3 討論

大量研究證明，體內(nèi)過量的自由基會損傷蛋白質(zhì)、細(xì)胞膜，促使細(xì)胞組織DNA突變，從而誘發(fā)或加速人體多種疾患的產(chǎn)生與惡化。在輻射損傷、炎癥和應(yīng)急反應(yīng)、腫瘤病變、再灌注損傷、衰老等多種情況下，多伴隨自由基異常劇增。SOD是體內(nèi)自由基－超氧陰離子自由基重要的清除劑。

SOD是一類廣泛分布于組織細(xì)胞內(nèi)的金屬酶，可催化超氧陰離子自由基發(fā)生歧化反應(yīng)[5]，對于平衡機(jī)體氧化與抗氧化系統(tǒng)、免除自由基損傷起著至關(guān)重要的作用。Ripple等[6]研究表明，氧化損傷具有誘導(dǎo)前列腺細(xì)胞增生和致癌變的潛在作用。SOD可清除自由基，減少細(xì)胞膜過氧化損傷，保護(hù)細(xì)胞膜的穩(wěn)定性和細(xì)胞的通透性，從而保持前列腺正常的生理功能[7]。MDA是膜脂質(zhì)過氧化的重要產(chǎn)物。機(jī)體在多種情況下遭受的傷害，其中傷害因子之一就是活性氧積累誘發(fā)的膜脂質(zhì)過氧化。在前列腺細(xì)胞膜損害或前列腺增生時，伴隨有MDA的含量增多[8]。

慢性細(xì)菌性前列腺炎患者的氧化應(yīng)激和氧化損傷作用明顯增強(qiáng)，表現(xiàn)為一氧化氮（NO）、MDA增加，SOD等降低，并與疾病的進(jìn)程密切相關(guān)。劉小平等[9]發(fā)現(xiàn)，慢性細(xì)菌性前列腺炎和慢性非細(xì)菌性前列腺炎患者血清中MDA水平增高，而SOD活力水平降低，認(rèn)為這與前列腺炎的長期慢性炎癥刺激有關(guān)。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，花天膠囊可明顯增加大鼠前列腺組織中SOD的活力，明顯降低前列腺組織中MDA的含量，提示其可能通過對SOD及MDA的作用，發(fā)揮抗前列腺增生效果，可能是其抗前列腺增生的作用機(jī)制之一，但尚需進(jìn)一步研究。

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