花天膠囊對前列腺增生大鼠超氧化物歧化酶和丙二醛的影響

敖 曼，熊 怡，劉 佳

（1.貴州省貴陽市第一人民醫院，貴州 貴陽 550001； 2.貴州省遵義市第二人民醫院，貴州 遵義 563000）

良性前列腺增生（BPH）又稱前列腺肥大，多發于老年男性，是泌尿系統的常見病。BPH的發病率隨男性年齡遞增而增加，50歲的男性40%有BPH組織學改變，80歲則高達90%[1]。隨著我國步入老齡化社會，BPH發病率的大幅提升，給老年人的健康與生活帶來了嚴重的危害，因此對BPH的研究和治療顯得極為緊迫和重要。中藥由于具有安全性高、不良反應少、療效肯定、適合長期服用等特點，在治療BPH方面具有一定的優勢，有著較好的發展前景[2]。不少BPH患者通過中醫辨證論治，收效尚佳。毋庸置疑，中藥的諸多優點對于BPH患者整體體質的調節及控制病情的進展將起著重要作用[3]。筆者將花天膠囊用于前列腺增生大鼠，并檢測超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量，初步探討其作用機制。現報道如下。

1 材料與方法

1.1 動物與材料

SD大鼠，體重250～300 g，雌雄兼用，貴陽醫學院實驗動物中心提供，合格證號為 SCXK（黔）2002－0001。花天膠囊，主藥為花粉、天麻，囊內容物為淡黃色粉末，氣清香，味微甜，每 g含原生藥 0.15 g（上海同濟堂藥業有限公司，批號為 091006），臨用前用蒸餾水配制成所需濃度的混懸液；甲睪酮片（上海信誼康捷藥業有限公司，批號為090101）；前列康（商品名普樂安片，浙江康恩貝制藥股份有限公司，批號為0810123）。U－2001型紫外掃描分光光度計（日本日立公司）。SOD即用型試劑盒（南京建成生物工程研究所）。MDA即用型試劑盒（南京建成生物工程研究所）。

1.2 方法

1.2.1 建模[4]

雄性SD大鼠61只，體重250～300 g。基礎飼養1周適應環境后，隨機分為6組：對照組（等量0.9%氯化鈉注射液）、模型組（等量 0.9% 氯化鈉注射液）、前列康組（1.60 g /kg）、花天膠囊高劑量組（1.08 g /kg）、中劑量組（0.54 g/kg）、低劑量組（0.27 g /kg）。動物均靜脈滴注給藥，每天上午除對照組大鼠靜脈滴注給予等量0.9%氯化鈉注射液外，其余組均灌胃給予甲睪酮8 mg/kg，制作前列腺增生模型；每天下午除對照組和模型組大鼠給予等量生理鹽水外，其余組均靜脈滴注給予相應藥物。各組每日給藥1次，連續28 d，每隔7 d稱重1次，根據體重調整給藥劑量。

1.2.2 SOD 活力檢測

末次給藥后1 h，各鼠稱體重后處死，剖開下腹部，仔細分離并摘除前列腺，取相同部位等質量的前列腺組織，加生理鹽水研磨制備成10%勻漿，用于SOD檢測。按操作步驟完成后，于紫外分光光度計550 nm波長處測定吸光度，計算SOD活力。

組織勻漿中 SOD活力（U/mgprot）＝(對照管吸光度 －測定管吸光度)/對照管吸光度÷50% ×反應液總體積/取樣量(mL)÷組織中蛋白含量（mgprot/mL）

操作步驟：對照管依次加入試劑 11.0 mL，蒸餾水 0.1 mL，試劑 20.1 mL，試劑 30.1 mL，試劑 40.1 mL；旋渦混勻器充分混勻，置37℃恒溫水浴箱40 min，加顯色劑 2 mL，測吸光度。2）測定管依次加入試劑1 1.0 mL，各試驗組大鼠前列腺組織上清液0.1 mL，試劑 20.1 mL，試劑 30.1 mL，試劑 40.1 mL；旋渦混勻器充分混勻，置37℃恒溫水浴箱40 min，加顯色劑2 mL，測吸光度。用考馬斯亮藍法測定前列腺組織蛋白濃度。

1.2.3 MDA 含量檢測

取相同部位等質量的前列腺組織，加生理鹽水研磨制備成10%勻漿，用于MDA檢測。按操作步驟完成后，于紫外分光光度計550 nm波長處測定吸光度，計算MDA含量。

組織MDA含量（nmol/mL）＝[（測定管吸光度 －測定空白管吸光度）/（標準管吸光度 －標準空白管吸光度）]×標準管濃度（10 nmol/mL）×樣本測試前稀釋倍數

操作步驟：標準管加入10 nmol/mL標準品0.1 mL和試劑 1 0.1 mL混勻試劑，再次加入試劑23 mL和試劑31 mL。標準空白管加入無水乙醇0.1 mL和試劑10.1 mL混勻試劑，再次加入試劑2和試劑31 mL。測定管依次加入各試驗組大鼠前列腺組織上清液 0.1 mL和試劑 10.1 mL，混勻，再加入試劑 23 mL和試劑31 mL。測定空白管加入依次加入各試驗組大鼠前列腺組織上清液0.1 mL和試劑 10.1 mL，混勻，再加入試劑 23 mL和 60%冰醋酸1 mL。混勻后，置95℃水浴10 min，3 500～4 000轉離心10 min，取上清液，測吸光度。

1.3 統計學處理

2 結果

結果見表1。

表1 各組大鼠前列腺組織SOD活力及MDA含量比較(±s)

表1 各組大鼠前列腺組織SOD活力及MDA含量比較(±s)

注：與對照組比較，＃P ＜0.01；與模型組比較，*P ＜0.05，△P ＜0.01。NS為0.9%氯化鈉注射液。

MD A含量(n m o L/m g)8 7.9 9 ± 6 5.3 2 155.0 6 ± 2 5.7 9＃1 0 8.9 7 ± 4 3.0 8△1 1 2.2 2 ± 3 2.7 5△1 2 3.7 3 ±59.1 3 1 3 5.9 4 ± 6 6.2 9組別對照組（n＝1 0）模型組（n＝1 1）前列康組（n＝1 0）花天高劑量組（n＝1 1）花天中劑量組（n＝9）花天低劑量組（n＝1 0）劑量（g/k g）等量N S等量N S 1.6 0 1.0 8 0.5 4 0.2 7 S O D活力(U/m g p o r t)1 2 7.9 7 ± 1 4.8 0 7 8.2 4 ± 2 6.6 2＃1 2 7.6 9 ± 3 3.1 6*1 1 0.5 8 ± 3 1.8 7*1 1 5.7 0 ± 4 5.7 6*1 0 4.4 4 ± 3 8.7 9

3 討論

大量研究證明，體內過量的自由基會損傷蛋白質、細胞膜，促使細胞組織DNA突變，從而誘發或加速人體多種疾患的產生與惡化。在輻射損傷、炎癥和應急反應、腫瘤病變、再灌注損傷、衰老等多種情況下，多伴隨自由基異常劇增。SOD是體內自由基－超氧陰離子自由基重要的清除劑。

SOD是一類廣泛分布于組織細胞內的金屬酶，可催化超氧陰離子自由基發生歧化反應[5]，對于平衡機體氧化與抗氧化系統、免除自由基損傷起著至關重要的作用。Ripple等[6]研究表明，氧化損傷具有誘導前列腺細胞增生和致癌變的潛在作用。SOD可清除自由基，減少細胞膜過氧化損傷，保護細胞膜的穩定性和細胞的通透性，從而保持前列腺正常的生理功能[7]。MDA是膜脂質過氧化的重要產物。機體在多種情況下遭受的傷害，其中傷害因子之一就是活性氧積累誘發的膜脂質過氧化。在前列腺細胞膜損害或前列腺增生時，伴隨有MDA的含量增多[8]。

慢性細菌性前列腺炎患者的氧化應激和氧化損傷作用明顯增強，表現為一氧化氮（NO）、MDA增加，SOD等降低，并與疾病的進程密切相關。劉小平等[9]發現，慢性細菌性前列腺炎和慢性非細菌性前列腺炎患者血清中MDA水平增高，而SOD活力水平降低，認為這與前列腺炎的長期慢性炎癥刺激有關。

本試驗結果表明，花天膠囊可明顯增加大鼠前列腺組織中SOD的活力，明顯降低前列腺組織中MDA的含量，提示其可能通過對SOD及MDA的作用，發揮抗前列腺增生效果，可能是其抗前列腺增生的作用機制之一，但尚需進一步研究。

參考文獻：

[1]馬 躍，張唯力.良性前列腺增生合并慢性前列腺炎的研究進展[J].中華男科學雜志，2010(7):25－27.

[2]張江磊，侯建全.組織學前列腺炎與良性BPH臨床進展的關系[J].江蘇醫藥，2010，2(4):36.

[3]吳學杰，楊羅艷，張選志.良性前列腺增生合并慢性前列腺炎的臨床分析[J].中華男科學雜志，2008（14）:527 －529.

[4]周建衡，洪振豐.前列寧顆粒對大鼠前列腺增生的影響[J].福建中醫院學報，2008，18(5)：45 －47.

[5]黎瑞珍，楊慶建.超氧化物歧化酶(SOD)活性的測定及其應用研究[J].瓊州大學學報，2004，11(5):34.

[6]Ripple MO，Henry WF，Rago RP，et al.Prooxidant－ antioxdant shift induced by androgen treatm ent of human prostate carcinomacells[J].J Natl Cancer lnst，1997，89:40－48.

[7]Kolasa A，Marchlewicz M，Adler G，et al.Expression ofE.Sod，GPX5 mRNAs and immunoexpression of Cu/ZnSOD in epididymal epithelialcells of finasteride－treated rats[J].Andrologia，2008，40(5):303－311.

[8]羅文峰.非那雄胺對前列腺增生癥患者頭發、SOD和MDA的影響[J].臨床醫學工程，2011，18(3):397 －398.

[9]劉小平，鄧 巖.氧自由基在前列腺炎發病中的作用[J].中國男科學雜志，2001，15(4):264 －265.