肛腸袋泡劑質量標準研究*

程洪兵，韓石蕊，趙永旗，邵海榮

（河南省濮陽市人民醫院，河南 濮陽 457000）

肛腸袋泡劑是我院應用多年的協定處方制劑，是由黃柏、苦參、蒼術、樸硝等數10味中藥組方制成的外用熏洗劑，具有解毒消腫、收斂止血之功效，用于內外痔、痔瘡術后肛門膿腫、血栓外痔等的治療。為更好地控制制劑質量，建立了該制劑的質量標準，現報道如下。

1 儀器與試藥

美國Waters 515型高效液相色譜儀；瑞士Precisa 92SM－202A型電子天平。鹽酸小檗堿對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為 110713－201212）；肛腸袋泡劑（批號分別為 131018，131210，140126，140312）及陰性樣品均由濮陽市人民醫院制劑室提供；乙腈為色譜純，磷酸、十二烷基磺酸鈉等均為分析純，水為注射用水。

2 方法與結果

2.1 性狀

本品為黃褐色粉末，氣香。

2.2 鑒別

顯微鑒別：取本品，置顯微鏡下觀察，石細胞呈長梭形或長方形，壁稍厚，見孔溝與紋孔（馬齒莧）；晶纖維和纖維多成束，含晶細胞的壁不均勻增厚（苦參）；菊糖時見，表面呈放射狀紋理（蒼術）。

化學鑒別：取本品0.5 g，加水 10 mL，搖勻，過濾，取濾液5mL，滴加氯化鋇試液，即有白色沉淀產生。

2.3 檢查

粒度：取樣品內容物30 g，稱定質量，分別置二號藥篩和四號藥篩，保持水平狀態，左右往返，邊篩動邊輕叩3 min。內容物應能全部通過二號篩，但混有能通過四號篩的藥粉比例不得過40%。

水分：照水分測定法第一法[1]測定，不得過12.0%。

2.4 鹽酸小檗堿含量測定

2.4.1 色譜條件

色譜柱：Welchrom C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈－0.1%磷酸溶液(50∶50，每100 mL加十二烷基磺酸鈉0.1 g)；檢測波長：265 nm；流速：1.0 mL /min；進樣量：20 μL。

2.4.2 溶液制備

取鹽酸小檗堿對照品適量，精密稱定，加流動相制成每1 mL含0.3 mg的溶液，作為貯備液；取貯備液2 mL，置10 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。取本品粉末(過三號藥篩)3.0 g，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加流動相80 mL，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)40 min，放冷，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，作為供試品溶液。取處方中不含黃柏的其他藥材同比例制備陰性樣品，按照供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.4.3 方法學考察

系統適用性及陰性干擾試驗：分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜峰。在陰性對照品溶液色譜圖中，與對照品、供試品溶液色譜中鹽酸小檗堿保留時間相應位置上無色譜峰，表明在本色譜條件下其他成分對鹽酸小檗堿測定無干擾，專屬性良好。理論板數按鹽酸小檗堿峰計算應不低于2 000。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察：精密量取對照品貯備液 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分別置10 mL容量瓶中，加流動相至刻度，搖勻。吸取20 μL注入液相色譜儀，按擬訂的色譜條件測定峰面積。以鹽酸小檗堿峰面積積分值（Y）為縱坐標、進樣質量濃度（X，g/L）為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程 Y＝5.008 3×107X＋33 428，r＝0.999 6(n＝6)。結果表明，鹽酸小檗堿進樣質量濃度在 30.0～150.0 μg/mL范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

精密度試驗:精密量取同一對照品溶液20 μL，連續進樣6次，按擬訂的色譜條件測定峰面積。結果的 RSD為1.28%(n＝6)，表明方法精密度良好。

穩定性試驗:精密量取同一供試品溶液20 μL，室溫放置，分別于 0，1，2，4，8，12 h 時進樣，依法測定峰面積。結果峰面積的RSD為1.63%(n＝6)，表明供試品溶液至少在12 h內穩定。

重復性試驗：分別精密稱取同批次的樣品（批號為140126）6份，依法制備供試品溶液并進樣測定峰面積，計算鹽酸小檗堿含量。結果平均含量為 1.526 0 mg/g，RSD 為 1.39%(n＝6)，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：精密量取已知含量（1.526 0 mg/g）的同批次樣品6份，分別精密加入鹽酸小檗堿對照品貯備液 6.0，10.0，14.0 mL，按供試品溶液制備方法制備溶液，各取20 μL注入液相色譜儀，按擬訂的色譜條件測定鹽酸小檗堿含量，計算回收率。結果見表1。

表1 鹽酸小檗堿加樣回收試驗結果（n＝6）

2.5 樣品含量測定

取3批樣品，按擬訂的色譜條件和方法測定鹽酸小檗堿含量。結果批號為131018，131210，140312的樣品中鹽酸小檗堿含量分別為 1.657 2，1.596 1，1.720 6 mg /g。根據樣品測定結果規定含量下限，本品每1 g含黃柏以鹽酸小檗堿計不得少于1.4 mg。

3 討論

《神農本草經》載，黃柏“主五臟腸胃中結熱，黃疸，腸痣，止瀉痢”，具有清熱燥濕、瀉火除蒸、解毒療創之功效[2－3]。黃柏為肛腸袋泡劑的君藥，含鹽酸小檗堿、黃柏堿等多種生物堿，選含量較高的鹽酸小檗堿作為本制劑的含量控制指標，能反映本制劑的質量。

配制鹽酸小檗堿對照品溶液，作紫外光譜掃描，結果在265 nm波長處有最大吸收，故選取265 nm為檢測波長。對樣品的取樣量、提取溶劑、流動相等做了對比研究[4－6]，結果文中所述條件效果最優。

方法學考察結果表明，采用高效液相色譜法對處方中黃柏的鹽酸小檗堿進行含量測定，操作簡便、快速，重現性好，可作為該產品的定量測定方法。由于該產品有10味藥材，為進一步提高、完善質量標準，確保藥品質量穩定可控，今后將開展4味以上藥材的薄層色譜鑒別的方法學研究。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫藥科技出版社，2010:附錄52.

[2]鄭虎占，董澤宏，佘 靖.中藥現代研究與應用[M].北京：學苑出版社，1998:4 043－4 057.

[3]李學林，崔 瑛，曹俊嶺.實用臨床中藥學[M].北京：人民衛生出版社，2013:117－119.

[4]黃海燕，薛 漓.高效液相色譜法測定三黃片中鹽酸小檗堿的含量[J].中國藥業，2006，15（10）：18 －19.

[5]郭麗芳，余衛兵，廉 辰，等.HPLC法測定囊蟲消膠囊中鹽酸小檗堿的含量[J].中國藥師，2010（1）:148 －149.

[6]饒躍峰，謝先吉，趙青威，等.復方止血栓中鹽酸小檗堿的含量測定[J].中國醫院藥學雜志，2008（3）:245 －247.