肛腸袋泡劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究*

程洪兵，韓石蕊，趙永旗，邵海榮

（河南省濮陽(yáng)市人民醫(yī)院，河南 濮陽(yáng) 457000）

肛腸袋泡劑是我院應(yīng)用多年的協(xié)定處方制劑，是由黃柏、苦參、蒼術(shù)、樸硝等數(shù)10味中藥組方制成的外用熏洗劑，具有解毒消腫、收斂止血之功效，用于內(nèi)外痔、痔瘡術(shù)后肛門膿腫、血栓外痔等的治療。為更好地控制制劑質(zhì)量，建立了該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

美國(guó)Waters 515型高效液相色譜儀；瑞士Precisa 92SM－202A型電子天平。鹽酸小檗堿對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為 110713－201212）；肛腸袋泡劑（批號(hào)分別為 131018，131210，140126，140312）及陰性樣品均由濮陽(yáng)市人民醫(yī)院制劑室提供；乙腈為色譜純，磷酸、十二烷基磺酸鈉等均為分析純，水為注射用水。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀

本品為黃褐色粉末，氣香。

2.2 鑒別

顯微鑒別：取本品，置顯微鏡下觀察，石細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形或長(zhǎng)方形，壁稍厚，見孔溝與紋孔（馬齒莧）；晶纖維和纖維多成束，含晶細(xì)胞的壁不均勻增厚（苦參）；菊糖時(shí)見，表面呈放射狀紋理（蒼術(shù)）。

化學(xué)鑒別：取本品0.5 g，加水 10 mL，搖勻，過濾，取濾液5mL，滴加氯化鋇試液，即有白色沉淀產(chǎn)生。

2.3 檢查

粒度：取樣品內(nèi)容物30 g，稱定質(zhì)量，分別置二號(hào)藥篩和四號(hào)藥篩，保持水平狀態(tài)，左右往返，邊篩動(dòng)邊輕叩3 min。內(nèi)容物應(yīng)能全部通過二號(hào)篩，但混有能通過四號(hào)篩的藥粉比例不得過40%。

水分：照水分測(cè)定法第一法[1]測(cè)定，不得過12.0%。

2.4 鹽酸小檗堿含量測(cè)定

2.4.1 色譜條件

色譜柱：Welchrom C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈－0.1%磷酸溶液(50∶50，每100 mL加十二烷基磺酸鈉0.1 g)；檢測(cè)波長(zhǎng)：265 nm；流速：1.0 mL /min；進(jìn)樣量：20 μL。

2.4.2 溶液制備

取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相制成每1 mL含0.3 mg的溶液，作為貯備液；取貯備液2 mL，置10 mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。取本品粉末(過三號(hào)藥篩)3.0 g，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加流動(dòng)相80 mL，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)40 min，放冷，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。取處方中不含黃柏的其他藥材同比例制備陰性樣品，按照供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.4.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性及陰性干擾試驗(yàn)：分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜峰。在陰性對(duì)照品溶液色譜圖中，與對(duì)照品、供試品溶液色譜中鹽酸小檗堿保留時(shí)間相應(yīng)位置上無(wú)色譜峰，表明在本色譜條件下其他成分對(duì)鹽酸小檗堿測(cè)定無(wú)干擾，專屬性良好。理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：精密量取對(duì)照品貯備液 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分別置10 mL容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻。吸取20 μL注入液相色譜儀，按擬訂的色譜條件測(cè)定峰面積。以鹽酸小檗堿峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣質(zhì)量濃度（X，g/L）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y＝5.008 3×107X＋33 428，r＝0.999 6(n＝6)。結(jié)果表明，鹽酸小檗堿進(jìn)樣質(zhì)量濃度在 30.0～150.0 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):精密量取同一對(duì)照品溶液20 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，按擬訂的色譜條件測(cè)定峰面積。結(jié)果的 RSD為1.28%(n＝6)，表明方法精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):精密量取同一供試品溶液20 μL，室溫放置，分別于 0，1，2，4，8，12 h 時(shí)進(jìn)樣，依法測(cè)定峰面積。結(jié)果峰面積的RSD為1.63%(n＝6)，表明供試品溶液至少在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：分別精密稱取同批次的樣品（批號(hào)為140126）6份，依法制備供試品溶液并進(jìn)樣測(cè)定峰面積，計(jì)算鹽酸小檗堿含量。結(jié)果平均含量為 1.526 0 mg/g，RSD 為 1.39%(n＝6)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密量取已知含量（1.526 0 mg/g）的同批次樣品6份，分別精密加入鹽酸小檗堿對(duì)照品貯備液 6.0，10.0，14.0 mL，按供試品溶液制備方法制備溶液，各取20 μL注入液相色譜儀，按擬訂的色譜條件測(cè)定鹽酸小檗堿含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 鹽酸小檗堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2.5 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，按擬訂的色譜條件和方法測(cè)定鹽酸小檗堿含量。結(jié)果批號(hào)為131018，131210，140312的樣品中鹽酸小檗堿含量分別為 1.657 2，1.596 1，1.720 6 mg /g。根據(jù)樣品測(cè)定結(jié)果規(guī)定含量下限，本品每1 g含黃柏以鹽酸小檗堿計(jì)不得少于1.4 mg。

3 討論

《神農(nóng)本草經(jīng)》載，黃柏“主五臟腸胃中結(jié)熱，黃疸，腸痣，止瀉痢”，具有清熱燥濕、瀉火除蒸、解毒療創(chuàng)之功效[2－3]。黃柏為肛腸袋泡劑的君藥，含鹽酸小檗堿、黃柏堿等多種生物堿，選含量較高的鹽酸小檗堿作為本制劑的含量控制指標(biāo)，能反映本制劑的質(zhì)量。

配制鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液，作紫外光譜掃描，結(jié)果在265 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故選取265 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。對(duì)樣品的取樣量、提取溶劑、流動(dòng)相等做了對(duì)比研究[4－6]，結(jié)果文中所述條件效果最優(yōu)。

方法學(xué)考察結(jié)果表明，采用高效液相色譜法對(duì)處方中黃柏的鹽酸小檗堿進(jìn)行含量測(cè)定，操作簡(jiǎn)便、快速，重現(xiàn)性好，可作為該產(chǎn)品的定量測(cè)定方法。由于該產(chǎn)品有10味藥材，為進(jìn)一步提高、完善質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，確保藥品質(zhì)量穩(wěn)定可控，今后將開展4味以上藥材的薄層色譜鑒別的方法學(xué)研究。

參考文獻(xiàn)：

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