高效液相色譜法測定苯磺酸氨氯地平的含量*

湯韶壇，謝佳琪，茍幫潤 ，陳小明

（湘潭大學化學學院環境友好化學與應用教育部重點實驗室，湖南 湘潭 411105）

苯磺酸氨氯地平是二氫吡啶類鈣拮抗劑，屬于第3代降壓藥，因其療效顯著、作用時間長、不良反應少，為目前臨床高血壓治療的首選用藥。美國藥典（USP35）[1]中用反相高效液相色譜法測定其含量，以 ODS為色譜柱，流動相為乙腈－甲醇－0.7%三乙胺溶液(用磷酸調 pH 3.0 ± 0.1，15 ∶35 ∶50)，方法靈敏度高，專屬性強，線性寬，但流動相配制過程復雜，出峰時間長。國家試行標準[2]中也用反相高效液相色譜法測定含量，以ODS為色譜柱，流動相為甲醇－0.03 mol/L 磷酸二氫鉀溶液（75 ∶25），流動相配制簡單，出峰時間短，但線性范圍窄。在美國藥典和國家試行標準的基礎上，本試驗中對測定條件進行了進一步優化與驗證，旨在建立一種快速、準確、線性范圍寬的檢測方法，為國家藥品標準的建立提供依據。

1 儀器與試藥

島津SPD－10Avp plus高效液相色譜儀；OhausAR224CN型分析天平。苯磺酸氨氯地平對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號為100374－201209）；苯磺酸氨氯地平片（山東鑫齊藥業有限公司，規格為每片5 mg，批號為20120514）；無水甲醇（色譜純，天津科密歐化學試劑有限公司）；乙酸銨（分析純，西隴化工股份有限公司）；水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱： WondaSil C18色譜柱(150 mm × 4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇－0.03 mol/L 乙酸銨溶液（70 ∶30）；檢測波長：237 nm；流速：0.8 mL /min；柱溫：室溫；進樣量：10 μL。理論板數按苯磺酸氨氯地平計算不應低于2 000。高效液相色譜圖見圖1。

2.2 溶液制備

精密稱取苯磺酸氨氯地平對照品適量，用流動相稀釋成每1 mL中約含苯磺酸氨氯地平1 000 μg的溶液，作為對照品貯備溶液；精密量取5 mL至50 mL容量瓶，用流動相稀釋成質量濃度約為100 μg/mL的對照品溶液。取苯磺酸氨氯地平片20片，研細，精密稱取細粉適量（約相當于苯磺酸氨氯地平5 mg），加適量流動相超聲20 min，冷卻至室溫，稀釋定容于50 mL容量瓶，搖勻，取續濾液為供試品溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察：精密移取苯磺酸氨氯地平對照品貯備液0.1，0.5，1.0，2.5，5.0，10.0，25.0 mL，置 50 mL 容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，作為線性系列溶液。照2.1項下色譜條件進行測定，記錄峰面積，以質量濃度（μg/mL）對峰面積進行線性回歸，回歸方程為 Y＝19 643 X－1 581.8，r＝0.999 9（n＝8）。結果表明，苯磺酸氨氯地平質量濃度在 2.0 ～1 000.0 μg/mL 范圍內與峰面積呈良好線性關系。

精密度試驗：取2.2項下對照品溶液，按2.1項下色譜條件，連續進樣6次，記錄峰面積。結果苯磺酸氨氯地平峰面積的 RSD為1.61%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：按2.2項下方法制備對照溶液與供試品溶液，分別在 0，1，2，4，8，12 h 時測定峰面積。結果對照品溶液的 RSD為 1.67% （n＝6），供試品溶液的 RSD 為 1.65% （n＝6），表明所測溶液在12 h內穩定。

加樣回收試驗：取已 知含量的樣品（29.3 mg/g，批號為20120514）適量，精密稱定，共9份，分別精密加入對照品貯備液（1.002 g /L）2.0，2.5，3.0 mL，照 2.2 項下供試品制備方法配制，依2.1項下色譜條件測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 苯磺酸氨氯地平加樣回收試驗結果（n＝9）

2.4 樣品含量測定

按2.2項下方法制備對照品溶液，平行制備3批樣品的供試品溶液，按2.1項下色譜條件進行測定，按外標法以峰面積計算樣品含量。結果3批樣品中苯磺酸氨氯地平含量分別為標示量的99.85% ，99.11% ，98.96% ，平均 99.31% 。

3 討論

根據所查閱文獻，曾考察流動相pH對出峰的影響，發現在一定范圍內，流動相pH越小，其他條件不變時所測得的峰面積會更大，且拖尾因子會相應減小，出峰時間延長，可能是由于苯磺酸氨氯地平在不同pH時電離平衡移動所致，故選擇了pH范圍適中的乙酸銨鹽為流動相酸度調節劑；參考USP35，考察了在保證pH相同（用磷酸調節）時流動相中三乙胺的加入量對測定的影響，發現三乙胺含量在0.1% ～0.7%范圍內，峰形隨加入量的增加有比較好的改善，所測得峰面積也有所增加，具體原因有待進一步研究；最后，考察有機相與水相的比例，有機相甲醇比例越大出峰越快。綜上所述，反相高效液相色譜法和文獻[3－7]相比，線性范圍大大增寬，且峰形明顯改善，相對于USP35的方法，明顯縮短了苯磺酸氨氯地平的出峰時間，且操作簡便，不但保證了測定的準確，而且還能大量縮短分析時間。因此，該方法可為藥物質量標準的建立提供參考。

參考文獻：

[1]The United States Pharmacopeial Convention.U.S.Pharmacopeia 35 －NF30[M].The United States Pharmacopeial Convention，2011：2 185 －2 186.

[2]國家藥典委員會.國家藥典標準新藥轉正標準第57冊[M].北京：人民衛生出版社，2006：8 －9.

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