高效液相色譜法測定炎琥寧注射液中脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯含量

李衛紅 ，郭彩娥 ，李曉燕 ，趙 靖 ，賀華英

(1.河北省邯鄲縣醫院，河北 邯鄲 056000； 2.河北省邯鄲市第一醫院，河北 邯鄲 056002；3.河北省邯鄲市中心醫院，河北 邯鄲 056001； 4.河北省邯鄲市婦幼保健院，河北 邯鄲 056001)

炎琥寧注射液系植物穿心蓮提取物穿心蓮內酯經酯化、脫水、成鹽精制而成的脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯鉀鈉鹽，具有祛熱解毒、消炎止痛之功效，對細菌性與病毒性上呼吸道感染及痢疾有特殊療效。其質量標準收載于國家藥品質量標準（WBH33402005），采用紫外分光光度法對脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯的含量進行測定，方法專屬性較差。參考文獻[1－7]采用高效液相色譜法測定炎琥寧注射液中脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯的含量，方法操作簡便、快速，靈敏度高，重復性好，實用性強，現報道如下。

1 儀器與試藥

LC－2010型高效液相色譜儀(日本島津)；AE240型電子天平(瑞士METLER)；炎琥寧注射液(海南靈康制藥有限公司，批號1300521，1300606，130716，1300722，規格：10 mL ∶200 mg)；脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為 111598 －201207，含量：99.3%)；磷酸二氫鉀為分析純，乙腈為色譜純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm)，流動相：乙腈 －0.05 mol/mL 磷酸二氫鉀溶液(35 ∶65)，流速：1.0 mL /min，檢測波長：251 nm，進樣量：10 μL。

2.2 溶液制備

精密稱取脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯對照品20 mg，置50 mL容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取25 mL，置50 mL容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液(200 μg/mL)。精密量取炎琥寧注射液5mL，置 50 mL容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液(200 μg/mL)。以流動相為空白溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗：分別取供試品溶液、對照品溶液10 μL，注入液相色譜儀測定。理論板數按脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯峰計不小于4 000，無雜質峰干擾脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯的測定，見圖 1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察：精密稱取脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯對照品，配制成質量濃度分別為 40，80，160，240，320，400 μg/mL 的溶液，各取10 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖與峰面積。以峰面積(Y)為縱坐標、質量濃度(X)為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程 Y＝21 036.15 X －8 029.31，r＝0.999 9(n＝6)。結果表明，脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯質量濃度在40～400 μg/mL范圍內與峰面積積分呈良好的線性關系。

精密度試驗：取同一對照品溶液，連續進樣6次，對峰面積進行考察。結果的 RSD為0.5%(n＝6)。

重復性試驗：取同一樣品(批號 1300722)，按 2.2項下方法平行制備5份供試品溶液并測定。結果的 RSD為0.6%(n＝5)。

穩定性試驗：取同一份供試品溶液(批號1300722)，分別于0，2，4，8，12，24 h 后進樣分析。結果峰面積的 RSD 為 0.7%(n ＝6)，表明供試品溶液在24 h內穩定。

加樣回收試驗：精密量取已知含量的同一樣品(批號1300722)5 mL，置100 mL容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，分別精密加入低、中、高3個濃度的對照品溶液各3份，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL置50 mL容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，測其含量，計算脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯的加樣回收率。結果見表1。

表1 脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯加樣回收試驗結果(n＝9)

2.4 樣品含量測定

按2.2項下制備方法制備供試品溶液，精密量取10 μL，注入液相色譜儀，測定并計算含量。結果4批樣品含量分別為標示量的 99.30% ，99.92% ，98.61% ，100.27% 。

3 討論

稱取供試品溶液適量，加流動相制成每1 mL含脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯200 μg的溶液，以流動相為空白溶液，于200～400 nm范圍內掃描，結果251 nm波長處有最大吸收，故選取251 nm為檢測波長。

采用高效液相色譜法測定炎琥寧注射液中脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯的含量，方法的專屬性試驗、精密度試驗、重復性試驗、穩定性試驗、加樣回收率試驗的結果均良好，提高了該制劑的質控方法，從而為保障炎琥寧注射液的生產質量和生產效率的提高提供了有效的依據，進而保證了炎琥寧注射液的臨床用藥安全。

參考文獻：

[1]丁 燕，安 瑜.RP－HPLC法測定穿琥寧注射液中脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯的含量[J].藥學服務與研究，2009，9(6):413－421.

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