解表清熱片的提取工藝研究

王牛民 ，尤海生 ，呂 軍 ，周家琛 ，魏友霞

（1.西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，陜西 西安 710061；2.大連醫(yī)科大學(xué)，遼寧 大連 116044）

解表清熱片是以荊芥穗、葛根、柴胡、紫蘇葉、薄荷、防風(fēng)、桔梗、白芷、苦杏仁、苦地丁、蘆根、大青葉為原料制成的中成藥，具有疏風(fēng)解表、化痰止咳功效，用于風(fēng)寒感冒引起的發(fā)熱頭痛、咳嗽有痰。筆者對解表清熱的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

B2型中藥濃縮鍋及多功能提取罐（天津輕型制藥機(jī)械廠）；YK160型搖擺式顆粒機(jī)（寶雞制藥機(jī)械四分廠）；10A－VP型高效液相色譜儀（日本島津公司）；磁力攪拌機(jī)（德國 IKA，RCT basic）；電熱套（北京永光明醫(yī)療儀器廠）；FIG－15型真空干燥箱（江陰市干燥成套設(shè)備廠）；SF－300型高速粉碎機(jī)（航天工業(yè)總公司七一零三廠）。配制藥品原材料均為藥用級；葛根素對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為752－200108，含量測定用）；色譜級甲醇，其他試藥為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 制備工藝設(shè)計

組方中荊芥穗、薄荷、紫蘇葉含揮發(fā)油，為活性成分[1－3]，因此將藥材分為2組：提取揮發(fā)油組，包括荊芥穗、薄荷、紫蘇葉三味；水煎煮提取組，包括除以上3味外的其他藥材。將提取揮發(fā)油組藥材采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集，揮發(fā)油用β－環(huán)糊精包合。提取揮發(fā)油后的藥渣與水煎煮提取組藥材合并，參照傳統(tǒng)中藥湯劑提取方法提取水溶性成分，采用煎煮提取，煎提液濾過，濾液與上述提取揮發(fā)油后的水溶液合并，減壓濃縮至相對密度為 1.36 ～1.40（55 ℃ ）的清膏，制粒，揮發(fā)油包合物與顆粒混合，壓片。

2.2 揮發(fā)油提取試驗(yàn)

取提取揮發(fā)油組藥材，采用水蒸氣蒸餾法提取，并考察加水量及提取時間對提取率的影響。按照處方組成比例，分別稱取荊芥穗 50 g、紫蘇葉 15 g、薄荷 15 g，共 7份。其中 4份按照藥材質(zhì)量比例加水（分別為 8，10，12，14 倍），水蒸氣蒸餾 4 h，對收油率進(jìn)行考察；另外3份加入藥材質(zhì)量的10倍水提取揮發(fā)油，提取時間分別為 1，2，3，4，5 h，計算收油率。結(jié)果顯示，加水量為 8 倍、10 倍、12 倍、14 倍時，收油率分別為 0.5% ，0.7% ，0.7% ，0.7% ；提取時間為 1，2，3，4，5 h 時，平均出油率分別為 0.3% ，0.5% ，0.6% ，0.7%，0.7%?？梢?，加水量10倍以上對收油率無明顯影響；加水10倍量時，加熱提取4 h，揮發(fā)油提取完全，最高收油率為0.7%。

2.3 揮發(fā)油包合試驗(yàn)

因素水平確定：參考文獻(xiàn)[4]方法，按照 L9（3）4正交表設(shè)計，考察包合溫度（因素 A）、揮發(fā)油與β－環(huán)糊精比例（因素 B）、攪拌時間（因素C）對包合率的影響。因素水平結(jié)果見表 1。所用揮發(fā)油采用藥材質(zhì)量的10倍水提取。

表1 揮發(fā)油包合正交試驗(yàn)因素水平表

包合方法：稱取β－環(huán)糊精，加適量60℃水，攪拌使成5%溶液，按照表1中設(shè)定包合溫度，在攪拌下滴加揮發(fā)油，攪拌至規(guī)定時間后靜置，冷藏24 h，濾紙濾過，用10 mL無水乙醇清洗濾渣，去除未包合的揮發(fā)油，40℃揮干乙醇，置揮發(fā)油提取器中提取發(fā)油量，計算揮發(fā)油包合率。結(jié)果見表2。

結(jié)果分析：方差分析結(jié)果見表3?？梢?，揮發(fā)油與β－環(huán)糊精之比為1∶10與1∶8時包合物得率無太大差異，從成本節(jié)約考慮，揮發(fā)油與β－環(huán)糊精之比為1∶8為宜。因此，解表清熱片揮發(fā)油β－環(huán)糊精包合優(yōu)選的條件為，揮發(fā)油與β－環(huán)糊精之比為1∶8，40℃攪拌3 h。

優(yōu)選條件驗(yàn)證試驗(yàn)：按照工業(yè)生產(chǎn)投料量，對揮發(fā)油包合優(yōu)選條件進(jìn)行再驗(yàn)證。結(jié)果見表4?？梢姡凑諆?yōu)選條件對揮發(fā)油進(jìn)行包合工藝可行。

2.4 藥材水煎煮提取試驗(yàn)

提取次數(shù)確定：中藥湯劑傳統(tǒng)方法為水煎煮，分析組方中藥材的有效成分，方中荊芥穗及葛根均含有黃酮苷類，柴胡及桔梗均含有皂苷，且黃酮苷及皂苷溶于水，故仍采用傳統(tǒng)的水煎煮法提取。葛根素為方中具有生理活性的水溶性成分[5]，參考文獻(xiàn)[6]方法測定提取液中葛根素含量，以對水溶性成分的提取方法進(jìn)行量化考證。按處方組成比例稱取藥材60 g，加10倍量水，煎提3次，時間分別為 1.5，1.0，1.0 h，提取液分別濾過。分取一半量蒸干，105℃干燥 5.0 h，稱重，計算出膏率；分取 1/10量，置蒸發(fā)皿內(nèi)水浴上蒸干，用70%乙醇轉(zhuǎn)溶入25 mL容量瓶內(nèi)，以70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜濾過，精密吸取續(xù)濾液1 mL，置25 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，作為供試品溶液，測定葛根素含量。結(jié)果見表5。可見，前2次出膏率及葛根素提取率分別占3次合計量的91.21%和92.50%，第3次提取物含量較低，從節(jié)約的角度考慮，生產(chǎn)中采用提取2次。

表2 揮發(fā)油包合正交試驗(yàn)

表3 揮發(fā)油包合正交試驗(yàn)方差分析結(jié)果

表4 揮發(fā)油包合優(yōu)選條件驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

表5 提取次數(shù)考察結(jié)果

水煎煮提取正交試驗(yàn)：按照 L9（3）4正交表設(shè)計，以加水量（因素 A）、浸泡時間（因素B）、煎煮時間（因素C）為考察因素，考察其對提取效果的影響。結(jié)果見表6至表8。可見，加水量的影響具有顯著性意義（P＜0.05），浸泡時間和煎煮時間的影響無顯著性意義（P ＞0.05），A2與 A3及 C2與 C3差異不大。從節(jié)省能源角度考察，以 A2B1C2為佳，即以加10倍量水，浸泡時間為 0.5 h，第1次煎煮1.5 h，第2次煎煮 1.0 h為最佳方案。

優(yōu)選條件驗(yàn)證試驗(yàn)：按照工業(yè)生產(chǎn)投料量，對水煎煮提取條件進(jìn)行再驗(yàn)證。結(jié)果見表9?？梢?，優(yōu)選的水煎煮提取工藝可行。

2.5 葛根素含量測定

2.5.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Hypersil BDS C18柱（150 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動相:甲醇 －水(76∶24)；柱溫：室溫；檢測波長：250 nm；流速：1.0 mL /min；進(jìn)樣量：10 μL。理論板數(shù)應(yīng)不低于 4 000。該色譜條件下，信噪比大于10，樣品中葛根素色譜峰分離良好，分離度大于3。

2.5.2 對照品溶液制備

稱取葛根素對照品，用甲醇溶解為0.070 g/mL的對照品溶液。

2.5.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密吸取葛根素對照品溶液 1，2，3，4，5，6 mL，分別置10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，按照擬訂的色譜條件進(jìn)樣測定，以葛根素質(zhì)量濃度（C）對色譜峰面積（A）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 A＝2 436 C ＋4 562，r＝0.999 9（n＝6）。結(jié)果表明，葛根素質(zhì)量濃度線性范圍為 0.007 ～0.042 g/L。

精密度試驗(yàn):精密吸取同一葛根素對照品溶液，依法進(jìn)樣測定5次。結(jié)果的 RSD為0.042%（n＝5），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取2.4項下制備的同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，12 h 時進(jìn)樣測定，以峰面積計算葛根素含量。結(jié)果的RSD為3.01%（n＝6），表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取表7中1號樣品6份，按2.4項下方法制成供試品溶液，依法進(jìn)樣測定，記錄葛根素的峰面積，計算含量。結(jié)果的 RSD為4.23%（n＝6），表明方法重復(fù)性較好。

加樣回收試驗(yàn)：精密量取表7中1號樣品5 mL共6份，精密加入葛根素對照品溶液適量，按2.4項下供試品溶液制備方法制備溶液，依法進(jìn)樣測定，記錄葛根素的峰面積，計算含量及回收率。結(jié)果見表10。

表6 水煎煮提取正交試驗(yàn)因素水平表

表7 水提取正交試驗(yàn)及結(jié)果

表8 正交試驗(yàn)方差分析結(jié)果

表9 水煎煮提取條件驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果（每批1萬片）

表10 葛根素加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2.5.4 樣品含量測定

取2.4項下供試品溶液，分別進(jìn)樣對照品溶液和供試品溶液10 μL，測定其中葛根素含量。結(jié)果見表7及表9。

3 討論

解表清熱片是醫(yī)院制劑，臨床應(yīng)用多年，療效確切。本研究中利用正交試驗(yàn)設(shè)計和優(yōu)化影響解表清熱片提取的多因素試驗(yàn)，獲得了滿意的試驗(yàn)結(jié)果。優(yōu)化方案是荊芥穗、薄荷、紫蘇葉加10倍量水，水蒸氣蒸餾4 h提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液與水煎煮提取組藥液合并，藥渣與水煎煮提取組藥材合并水煎煮提取水溶性成分。揮發(fā)油與β－環(huán)糊精包合方案為，揮發(fā)油與β－環(huán)糊精之比為1:8，40℃攪拌3 h。水煎煮提取組藥物提取方案為，加藥材 10倍量水，浸泡 0.5 h，第 1次煎煮 1.5 h，第2次煎煮 1.0 h，共提取 2次。β－環(huán)糊精安全無毒、價廉易得，對揮發(fā)油包封后?？煞乐蛊湟萆?，從而提高制劑的穩(wěn)定性[7]。經(jīng)過放大投料量，對生產(chǎn)工藝再驗(yàn)證，結(jié)果顯示，優(yōu)化工藝適合工業(yè)化生產(chǎn)。

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