化濁解毒方對黃褐斑模型小鼠c－myc基因表達的影響

劉艷蘇，王麗麗

（1．河北省晉州市人民醫院，河北 晉州 052260； 2．河北省中醫藥研究院，河北 石家莊 050031）

黃褐斑，又稱“肝斑”“蝴蝶斑”[1]，是常見的產生于面部的色素沉著性皮膚病，以女性患者居多。黃褐斑的成因比較復雜，常因服用避孕藥物、精神壓力大、內分泌失調或外用化妝品刺激引起[2]，是臨床上常見而又難以治愈的皮膚病。雖然針對該病的研究較多，但病理機制仍不清楚。本試驗采用紫外線造模法制作黃褐斑病理模型，研究化濁解毒方對試驗動物角朊細胞中c－myc基因表達的影響，以探討化濁解毒方治療黃褐斑的機制。

1 材料與方法

1.1 儀器、試藥與動物

SS－3型紫外線光療儀；半自動生化分析儀；BX41型研究用熒光顯微鏡（奧林巴斯公司）。c－myc單克隆抗體；生物素標記馬抗鼠 IgG、SP試劑盒（Zymed公司）。化濁解毒方由丹參 60 g，柴胡30 g，茯苓 30 g，白術 20 g，薏苡仁 60 g，僵蠶 24 g，金銀花 30 g，連翹30 g，夏枯草30 g組方，加水1 000 mL，煎煮 2次，煎取200 mL。SD雌性小鼠90只，動物合格證號為804089，體重(20±5)g，由河北醫科大學實驗動物中心提供。

1．2 方法

將試驗動物隨機分為模型組(A組)、治療組(B組)和正常對照組(C組)，各30只。將3組試驗小鼠背部脫毛，裸露面積約2 cm×2 cm，每周脫毛1次。參照文獻[3]復制黃褐斑模型。A組、B組小鼠以波長為320 nm的中波紫外線照射，每日1次，每次20 min，連續照射4周。復制模型過程中常規飼養動物。A組、C組小鼠給予生理鹽水1 mL，每日1次；B組小鼠在模型復制成功后給予化濁解毒方煎劑，按照小鼠體重換算，濃縮至 1 mL，每日1次。均灌胃給藥，連續治療4周。治療結束后，3組小鼠背部人工脫毛，面積為2 cm×2 cm。全部斷頭處死后，立即取下背部脫毛處全層皮膚，冷凍于－70℃冰箱內保存待測。

1．3 c－myc基因表達測定

將標本經石蠟包埋及連續切片，切片厚度為4 μm。切片經二甲苯脫蠟、蒸餾水沖洗、磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗后，加入生物素標記馬抗鼠IgG，37℃溫育，辣根過氧化物標記的鏈霉素卵白素37℃溫育，蘇木精復染。常規脫水，透明，封片，鏡下觀察。分別檢測A組、C組、B組治療后c－myc基因的表達。c－myc基因的判定以胞核內出現黃色顆粒狀物質為陽性，按著色強弱計分為4級：陰性（－）為核內無陽性顆粒；弱陽性(＋)為核內散在陽性顆粒，陽性細胞數在25%以下；陽性(＋＋)為核內深黃色顆粒細胞數在25% ～50%之間；強陽性(＋＋＋)為核內棕黃色顆粒細胞數在50%以上。

1．4 統計學處理

采用 SPSS 11．0統計軟件，組間比較采用 χ2檢驗。P＜0．05為差異有統計學意義。

2 結果

結果見表1。

表1 3組c－myc基因表達情況比較(n＝30)

3 討論

黃褐斑是由于面部的組織細胞間微循環淤阻、細胞溶解死亡、黑素增多、色素沉著形成所造成的[4]。黑素細胞產生的黑素沉著狀況是決定皮膚顏色的主要因素[5]，角朊細胞不僅被動地接受由黑素細胞樹突運送來的黑素，而且對黑素細胞的生長和黑素的生成等有調節作用。Haake等[6]證明了胎兒角朊細胞和黑素細胞之間的關系處于變化中，角朊細胞誘導和促進黑素細胞增殖、遷移和分化。

c－myc基因是調控細胞增殖的主要基因，c－myc原癌基因產物是一種DNA結合蛋白，分布于核內，可促進細胞增殖，誘導細胞凋亡，對于細胞從G1期進入S期極為重要[7－9]。

本研究結果顯示，黃褐斑模型小鼠c－myc基因表達水平與正常對照組相比明顯升高（P＜0．05)；經過化濁解毒方治療后，c－myc基因的表達降低（P＜0．05)。因此，化濁解毒方可能是通過降低黃褐斑皮損角朊細胞中c－myc基因的表達而產生治療效果的。

參考文獻：

[1]陳華英．中醫治療面部黃褐斑療效觀察[J]．現代中西醫結合雜志，2006，15(4)：453．

[2]吳景東，顧 煒，尹 瑩，等．中醫辨證治療黃褐斑臨床體會[J]．中國美容醫學，2008，17(5)：741 － 742．

[3]苑光軍，姜 醒，劉 斌，等．當歸芍藥散對黃褐斑模型SOD、MDA及病理形態學影響的研究[J]．中醫藥信息，2008，25（6）:81 －82．

[4]謝圣影，陳麗芳．自擬祛斑湯結合中藥面膜治療黃褐斑35例臨床觀察[J]．中國臨床醫藥雜志，2008，20（2）：160 －161．

[5]汪 涌，何清濂，林子豪．黑素細胞與影響皮膚色素沉著的因素[J]．實用美容整形外科雜志，1997，8（3）:152 －154．

[6]Haake A，Scott GA．Physiologic distribution and differention of melanocytes in human fetal and neonatal skin equivalentes[J]．J Invest Dermatol，1991，96：71．

[7]李新華．銀屑病患者T淋巴細胞對表皮c－myc、bcl－2及 p53蛋白表達影響的實驗研究[D]．太原：山西醫科大學，2002．

[8]馮 捷，徐漢卿，蘇寶山．復方青黛膠囊對銀屑病表皮角朊細胞中c－myc表達的影響[J]．中國中西醫結合雜志，1996：16（3）：146 －148．

[9]Gordon FP，Mansur CP，Glichest BA．Regulation of human melanocyte growth，dendricity and melanization by keraticytederived factors[J]．J Invest Dermatol，1989，92（5）：565 － 572．