高效液相色譜法測定消渴平膠囊中鹽酸小檗堿含量

趙嚴麗，陳淑娟

（1．廣東省河源市食品藥品檢驗所，廣東 河源 517000； 2．廣東醫學院，廣東 東莞 523808）

消渴平膠囊是由人參、黃連、天花粉、天冬、黃芪、丹參、枸杞子、沙苑子、葛根、知母、五倍子、五味子等12味中藥組方，具有益火養陰、清熱瀉火的功效，用于陰虛燥熱、氣陰兩虛所致的消渴病。處方中黃連具有清熱燥濕、瀉火解毒作用，鹽酸小檗堿對痢疾桿菌、大腸桿菌、肺炎雙球菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌、傷寒桿菌及阿米巴原蟲有抑制作用。本試驗以其所含有效成分之一鹽酸小檗堿為指標，采用高效液相色譜法測定方中鹽酸小檗堿的含量。現報道如下。

1 儀器與試藥

LC－2010 A型高效液相色譜儀(日本島津公司)，UV－1601型紫外分光光度計(日本島津公司)；AG－135型電子分析天平(Mettler公司，準確度為 0．01 mg)；KQ250DA型超聲清洗器。鹽酸小檗堿對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110713－200911，含量為 86．8%，供含量測定用)；消渴平膠囊（吉林益民制藥有限公司，批號分別為 20100902，20101006，20110609，規格為每粒0．4 g）；乙腈為色譜純，甲醇、磷酸均為分析純，水為超純水，十二烷基磺酸鈉（化學試劑，上海雙龍化學品廠）。

2 方法與結果

2．1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Inertsil C18柱 (250 mm ×4．6 mm，5 μm)；流動相：0．1%磷酸溶液（每 100 mL加十二烷基磺酸鈉 0．1 g）－乙腈(52 ∶48)；測定波長：265 nm；柱溫：30 ℃ ；流速：1．0 mL ／min；進樣量：5 μL。理論板數按鹽酸小檗堿峰計算應不低于4 000。

2．2 溶液制備

精密稱取鹽酸小檗堿對照品適量，加甲醇制成0．206 4 g／L的對照品貯備液；再精密量取對照品貯備液適量，加甲醇制成10．32 μg／mL的對照品溶液。取裝量差異項下的樣品內容物約0．6 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入鹽酸 － 甲醇（1∶100）50 mL，密塞，稱定質量，置 60℃水浴 15 min，取出，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，再稱定質量，用鹽酸 －甲醇（1∶100）補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。取處方中除黃連外的其余藥材，按處方量依法制成粉末，再按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2．3 方法學考察

專屬性試驗：分別精密吸取供試品溶液、陰性對照品溶液和對照品溶液各5 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖（圖1）。可見，供試品溶液色譜中，在與鹽酸小檗堿對照品溶液色譜相應位置上有相同保留時間的色譜峰，陰性對照品溶液無干擾，表明方法可行。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察：分別精密吸取質量濃度為 10．32 μg／mL的對照品溶液 3，4，5，6，7 μL，注入高效液相色譜儀，測量峰面積。以峰面積（A）為縱坐標、質量濃度（C）為橫坐標繪制標準曲線，得鹽酸小檗堿回歸方程 A＝23 513 C －66．1，r＝0．999 9（n＝5）。結果表明，鹽酸小檗堿進樣量在 0．030 95～0．072 25 μg范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液（10．32 μg／mL）5 μL，重復進樣 6次。結果峰面積的 RSD為 0．42%（n＝6），表明儀器精密度較好。

穩定性試驗：取同一供試品（批號為20100902）溶液，室溫下放置，于 0，4，8，12，18，24 h 時分別進樣測定。結果的 RSD 為0．43%（n＝5），表明供試品溶液在 24 h內穩定。

重復性試驗：取樣品（批號為20100902）6份，每份約0．6 g，依法制備供試品溶液并測定含量。結果鹽酸小檗堿含量為0．791 7 mg／g，RSD為0．56%（n＝6），表明方法重復性較好。

加樣回收試驗：精密稱取已知含量的樣品（批號為20100902，鹽酸小檗堿含量為 0．791 7 mg ／g，平均每粒重 0．428 4 g）約 0．3 g，共 6份。另取鹽酸小檗堿對照品 12．23 mg，用甲醇溶解并稀釋成質量濃度為 0．053 08 g／L的溶液，精密量取 4，5，6 mL各2份，加入到6份樣品中，按供試品溶液制備方法制備溶液，依法測定。結果見表1。

表1 鹽酸小檗堿加樣回收試驗結果（n＝6）

2．4 樣品含量測定

分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各5 μL，注入高效液相色譜儀，測定3批樣品的鹽酸小檗堿峰面積，按外標法計算含量。結果批號為 20100902，20101006，20110609的 3批樣品，平均粒重分別為 0．408 2，0．405 4，0．403 8 g，平均 含 量分別為0．339 2，0．315 4，0．341 5 mg ／粒。

3 討論

用紫外分光光度計對對照品溶液在200～400 nm波長范圍進行掃描，結果在265 nm波長處具有最大吸收。故選擇265 nm作為測定波長。

在供試品溶液制備方法中，曾選用超聲、水浴、冷浸等方法[1]，比較了水浴和超聲時間，結果以鹽酸－甲醇（1∶100）混合溶液在60℃水浴15 min再超聲處理30 min的方法，提取完全，含量較穩定；試驗中比較了兩種不同比例的流動相，即0．1%磷酸溶液－乙腈（70 ∶30）和 0．1% 磷酸溶液 － 乙腈（52 ∶48）[2－3]，結果表明，選擇0．1%磷酸溶液－乙腈（52∶48）作為流動相時，色譜圖基線較穩，樣品中鹽酸小檗堿與其他雜質峰能夠完全分離，鹽酸小檗堿的理論板數大于4 000。本方法準確、簡便，重現性及回收率均理想，可作為該制劑的質量控制方法。

參考文獻：

[1]胡安青．HPLC法同時測定金雞片中鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿的含量[J]．中國藥師，2012，15（11）：1 590 －1 592．

[2]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京：中國醫藥科技出版社，2010:1 042．

[3]YBZ05142006－2009，國家藥品標準[S]．