高效液相色譜法測定安神補(bǔ)腦片中淫羊藿苷含量

劉 源，石繼偉

（江蘇省鎮(zhèn)江市藥品檢驗(yàn)所，江蘇 鎮(zhèn)江 212003）

安神補(bǔ)腦片由淫羊藿、鹿茸、制何首烏、干姜、甘草、大棗組方，具有健腦安神、生精補(bǔ)髓、益氣養(yǎng)血等功效。其收載于《國家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編·內(nèi)科心系分冊》，該標(biāo)準(zhǔn)中尚無淫羊藿的質(zhì)量控制指標(biāo)。淫羊藿苷作為淫羊藿的活性成分，是本方有效成分之一。為了有效控制安神補(bǔ)腦片的質(zhì)量，筆者參考相關(guān)文獻(xiàn)[1－2]，采用反相高效液相色譜法測定該制劑中淫羊藿苷的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀；AG245型電子天平(瑞士梅特勒公司)；UV－2401PC型紫外分光光度計(jì)。淫羊藿苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為110737－200415，供含量測定用）；安神補(bǔ)腦片（吉林長春制藥有限公司，批號為 100101，090810）；乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18柱（250 mm × 4．6 mm，5 μm）；流動相：乙腈 － 水（35 ∶65，V／V）；柱溫：30 ℃ ；進(jìn)樣量：10 μL；流速：0．7 mL ／min；檢測波長：270 nm。

2．2 溶液制備

精密稱取淫羊藿苷對照品適量，置100 mL容量瓶中，加入甲醇適量，振搖使溶解，加甲醇稀釋至刻度，精密吸取2 mL置20 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，制成10 μg／mL的溶液，作為對照品溶液。取樣品裝量差異項(xiàng)下供試品，研細(xì)，取3片量，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加甲醇稀釋，超聲處理30 min，冷卻至室溫，再稀釋至刻度，濾過，精密量取續(xù)濾液1 mL置10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，即得供試品溶液。取不含淫羊藿藥材的陰性樣品，加甲醇制成陰性對照品溶液。

2．3 測定波長選擇

精密吸取對照品溶液2．0 mL置20 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，在紫外分光光度計(jì)下掃描。結(jié)果在269．7 nm波長處有最大吸收。最終選擇270 nm波長作為高效液相色譜儀檢測波長，見圖1。

圖1 淫羊藿苷紫外吸收光譜圖

2．4 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：取2．2項(xiàng)下3種溶液，按擬訂色譜條件測定。結(jié)果見圖2，表明陰性對照品溶液對測定無干擾。

線性關(guān)系考察：稱取淫羊藿苷對照品 10．06 mg，置 100 mL容量瓶中，加甲醇適量，振搖使溶解，加甲醇稀釋至刻度，制成0．100 6 g／L的溶液，作為對照品貯備液，分別精密吸取對照品貯備液 1．0，2．0，4．0，6．0，8．0，10.0 mL，置 20 mL 容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密吸取10 μL，注入高效液相色譜儀，依法測定。以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)、淫羊藿苷質(zhì)量濃度（X，μg／mL）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y＝29．548 X＋2．354 5，r＝0．999 8。結(jié)果淫羊藿苷質(zhì)量濃度在 5．03 ～50．3 μg／mL 范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：精密吸取對照品貯備液2．0 mL，置20 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果的 RSD為0．11%（n＝5），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別在 0，4，8，16，24 h 時(shí)進(jìn)樣，測定淫羊藿苷的峰面積。結(jié)果的 RSD為1．01%（n＝5），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一樣品，連續(xù)進(jìn)樣6次，在相同測試條件下測定。結(jié)果淫羊藿苷平均含量為 10．743 4 μg／mL，RSD 為 0．61%（n＝6），表明該方法重復(fù)性較好。

加樣回收試驗(yàn)：分別稱取已知含量的樣品適量，精密加入對照品適量，按2．2項(xiàng)下方法制備溶液并測定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

2．5 樣品含量測定

取供試品溶液和對照品溶液，各進(jìn)樣10 μL，以峰面積計(jì)算含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

曾分別采用超聲30 min和加熱回流提取30 min兩種方法處理供試品，結(jié)果兩種方法提取的供試品溶液含量一致，因超聲方法提取簡便、快捷，故選擇超聲30 min作為供試品提取方法。

曾分別用乙腈 －水（24∶76）和乙腈 －水（35∶65）為流動相，前者因水相比例大，保留時(shí)間過長；以后者為流動相時(shí)，出峰時(shí)間比較合適，且分離度好。故選用乙腈－水（35∶65）為流動相。

安神補(bǔ)腦片現(xiàn)行藥品標(biāo)準(zhǔn)中尚無對處方中主藥淫羊藿進(jìn)行質(zhì)量控制的指標(biāo)。該方法可準(zhǔn)確測出淫羊藿中有效成分淫羊藿苷的含量，能有效排除處方中其他藥材所含成分的干擾，且靈敏、簡便、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性和分離度均能達(dá)到含量測定要求，為安神補(bǔ)腦片的質(zhì)量控制提供了有效途徑。

參考文獻(xiàn)：

[1]寧江松，楊江歐．高效液相法測定金復(fù)康口服液中淫羊藿的含量[J]．藥物分析雜志，2002，22(4)：328 －329．

[2]羅 曼，陳萬里．HPLC法測定復(fù)方杜仲口服液中淫羊藿的含量[J]．中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2004，5(3)：32 －44．