高效液相色譜法測(cè)定止咳平喘類藥中鹽酸麻黃堿含量

吳芳花，鄔月鑫

（1．廣東省河源市食品藥品檢驗(yàn)所，廣東 河源 517000； 2．廣東醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，廣東 東莞 523808）

鹽酸麻黃堿屬于芳香族氨基醇衍生物，為腎上腺素受體激動(dòng)藥，具有松弛平滑肌、收縮血管及中樞興奮作用。主要用于治療支氣管哮喘、過敏性反應(yīng)、鼻黏膜腫脹等癥，可單獨(dú)組方或與其他藥物組成復(fù)方增效。用藥過量時(shí)易引起精神興奮、失眠、不安、神經(jīng)過敏、震顫等癥狀，有嚴(yán)重器質(zhì)性心臟病或接受洋地黃治療的患者，也可引起意外的心律紊亂。服用麻黃堿后可明顯增加運(yùn)動(dòng)員的興奮程度，有極大的不良反應(yīng)。故這類藥品屬國(guó)際奧委會(huì)嚴(yán)格禁止的興奮劑。由于其止咳平喘效果顯著，所以不少?gòu)S家雖未在處方中標(biāo)示含鹽酸麻黃堿，但卻暗自添加該成分，以求達(dá)到更好療效，筆者采用高效液相色譜法對(duì)止咳平喘類藥的各種制劑中鹽酸麻黃堿的含量進(jìn)行測(cè)定[1－2]，結(jié)果表明，方法簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于止咳平喘類藥中鹽酸麻黃堿的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1200型高效液相色譜儀（安捷倫公司，機(jī)身編號(hào)DE62964787），Edipse XDB－C18柱（安捷倫公司，柱號(hào)為 993967－902），UV －2450型紫外－可見分光光度計(jì)（機(jī)身編號(hào)A10834233686CS），臺(tái)式電動(dòng)離心機(jī)（HJDH1．6），超聲波清洗器（KQ250DA）。鹽酸麻黃堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品藥檢定所，批號(hào)為171237－200505，105℃下干燥3 h）；乙腈為色譜純，磷酸二氫鉀、磷酸均為分析純；強(qiáng)力枇杷膠囊（江西藥都樟樹制藥有限公司，批號(hào)為091001）咳特靈片（廣州白云山制藥總廠，批號(hào)為1110548）；羅漢果止咳糖漿(桂林益佰漓江制藥有限公司，批號(hào)為120304)；止嗽化痰丸（貴陽(yáng)德昌祥藥業(yè)有限公司，批號(hào)為20100141）；水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱：Edipse XDB －C18柱(150 mm ×4．6 mm，5 m)；流動(dòng)相：乙腈 －0．02 mol／L 磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào) pH 至 3．0） －0．2%三乙胺（5 ∶95 ∶0．1）；檢測(cè)波長(zhǎng)：206 nm；流速：1．0 mL ／min；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：35 ℃ 。

2．2 溶液制備

稱取鹽酸麻黃堿對(duì)照品約10 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加水適量使溶解，并稀釋至刻度，作為對(duì)照品貯備液。取對(duì)照品貯備液5 mL至25 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，得質(zhì)量濃度為40 μg／mL的對(duì)照品溶液。分別取各種制劑，加水適量，超聲提取10 min，加水稀釋至質(zhì)量濃度為40 μg／mL（適當(dāng)時(shí)可先定容制得濃溶液離心后取上清液再稀釋），并用微孔濾膜0．45 μm過濾后取續(xù)濾液作為陰性對(duì)照品溶液。參照處方，添加有效濃度的鹽酸麻黃堿，模仿制作工藝，配制鹽酸麻黃堿的陽(yáng)性樣品，并按上述方法配制供試品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密量取對(duì)照品貯備液5 mL置25 mL容量瓶中用水定容至刻度，得質(zhì)量濃度為 40 μg／mL的對(duì)照品溶液。分別進(jìn)樣 2，5，10，20，30 μL，將所得峰面積與所對(duì)應(yīng)的對(duì)照品溶液質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y＝24．18 X＋3．39，r＝1。結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿質(zhì)量濃度在 8．144 ～122．16 μg／mL 范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，信噪比等于3時(shí)檢測(cè)限為2．1 ng。

加樣回收試驗(yàn)：取制備好的陽(yáng)性咳特靈片樣品精密加入鹽酸麻黃堿對(duì)照品適量，按2．2項(xiàng)下方法制備供試品溶液。按擬訂色譜條件測(cè)定，計(jì)算平均回收率和 RSD。結(jié)果見表1。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取糖漿劑及片劑陽(yáng)性供試品溶液，分別于0，1，2，4，8，12，24 h 時(shí)按擬訂色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定并記錄峰面積。結(jié)果的 RSD為0．09%和0．10%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

精密度試驗(yàn)：取2．2項(xiàng)下對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果的RSD為0．3%，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批號(hào)樣品6份，分別制備陽(yáng)性溶液進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果含量平均值為 0．791 0 g／L，RSD 為 0．9% ，表明方法重復(fù)性良好。

表1 鹽酸麻黃堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

2．4 樣品含量測(cè)定

取多種劑型的止咳平喘類藥物，包括膠囊、片劑、丸劑、口服液，按2．2項(xiàng)下方法配制供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖(圖1)，計(jì)算鹽酸麻黃堿的含量，結(jié)果膠囊、片劑、丸劑、糖漿劑中，鹽酸麻黃堿含量分別為 0．321 5，0．212 5，0．278 2，0．791 0 g ／L。

圖1 高效液相色譜圖

3 討論

由于鹽酸麻黃堿也為制造冰毒的重要佐劑，已被納入易制毒化學(xué)品管理。市面上已難買到標(biāo)注含有鹽酸麻黃堿的樣品，所以只能用隨機(jī)購(gòu)買的各種樣品中按處方工藝進(jìn)行添加鹽酸麻黃堿進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)[3－4]。鹽酸麻黃堿一般溶于乙醇、氯仿、乙醚，也溶于水。由于該類藥大部分為中成藥，成分復(fù)雜，同時(shí)考慮到環(huán)保安全的原則，故優(yōu)先選擇直接用水超聲提取的方法進(jìn)行提取[5－6]，結(jié)果證明該法操作簡(jiǎn)便、快捷、重現(xiàn)性好。取質(zhì)量濃度為40 μg／mL的對(duì)照品溶液，置紫外－可見分光光度計(jì)下測(cè)定其紫外吸收光譜，結(jié)果顯示，鹽酸麻黃堿在206 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故選擇206 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。采用磷酸二氫鉀溶液體系峰形不好，柱效低，通過添加三乙胺掃尾劑[7]和磷酸調(diào)節(jié)pH至3．0，以這樣低有機(jī)相，高水相系統(tǒng)進(jìn)行分離，不但峰形較好，分離度達(dá)到要求，雜質(zhì)出峰時(shí)間也縮短，故縮短整個(gè)分析時(shí)間。本試驗(yàn)使用多種色譜柱，分別采用不同的高效液相色譜儀，峰形、分離度、理論板數(shù)都能達(dá)到要求。故本方法具有較好的耐用性。

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