男男同性戀人群HIV-1早期感染者T細胞活化水平分析

李珍 吳昊 張彤

(首都醫科大學附屬北京佑安醫院感染中心北京市艾滋病研究重點實驗室北京市艾滋病臨床研究中心，北京 100069)

慢性免疫活化是致病性人免疫缺陷病毒(human滋病(acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)致immunodeficiency virus，HIV)感染的主要特點，在艾 病中發揮著重要的作用［1-2］。HIV相關的免疫活化以表達活化(CD38、HLA-DR)、增生和凋亡標志的免疫細胞的頻率增加為特點，如CD4+T細胞、CD8+T細胞和B 細胞［3-4］。研究者［5-6］認為 CD8+T細胞的活化與疾病進展的關系較血漿病毒載量與疾病進展的關系更為密切。高水平免疫活化在HIV早期感染是否存在?HIV感染早期，T細胞活化能否作為HIV感染疾病進展的早期預測指標?本研究以HIV早期感染者為研究對象，初步闡明HIV早期感染時T細胞的活化水平及其與疾病進展的相關性。

1 資料和方法

1.1 研究對象

以2010年1月至2010年12月間在首都醫科大學附屬北京佑安醫院男男同性戀隊列(men who have sex with men，MSM)中篩查出的25例HIV早期感染者為研究對象，7例HIV未感染者為對照組。感染者滿足以下條件:①HIV抗體在6個月內轉陽;②HIV抗體陰性/可疑，HIV RNA陽性者;③WB確證試驗，抗-HIV-1陽性，蛋白條帶少于4條者為HIV早期感染者。根據抗體、HIV RNA和蛋白條帶出現的時間估算HIV感染者的感染時間。2組之間年齡、性別上均具有可比性。HIV早期感染者均未合并梅毒、乙肝病毒和丙肝病毒感染。研究對象的詳細資料見表1。本研究已通過北京佑安醫院倫理委員會的審查，所有參與者均簽訂知情同意書。

1.2 病毒載量檢測

血漿病毒載量均由國家疾病預防控制中心完成。采用羅氏診斷試劑檢測，最低檢測線為50 copys/mL。

1.3 流式細胞術

復蘇凍存的 PBMCs，PBS加1%牛血清白蛋白(bovine serum albumin，BSA)洗滌后，加入FITC標記的抗人CD4 mAb、PE標記的抗人CD8 mAb、APC標記的抗人 HLA-DR mAb和 Percp-cy5.5標記的抗人CD38 mAb和對應的同型對照抗體，4～8℃ 避光孵育20 min。洗滌后，加入500 μL 1%多聚甲醛固定液。CantoⅡ流式細胞儀(購自美國BD公司)采集數據，FlowJo軟件分析數據。

1.4 統計學方法

采用SPSS 16.0軟件分析處理數據，數據以均數±標準差)表示。K－S法檢驗數據正態分布。兩組間均數比較采用t檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義。采用Pearson相關分析法分析變量之間的相關性。

2 結果

2.1 HIV早期感染者T細胞活化水平分析

與未感染者相比較，HIV早期感染者HLA-DR+CD4+T細胞，CD38+HLA-DR+CD4+T細胞的比例顯著增加(P=0.001)，而CD38+CD4+T細胞的比例無明顯變化(P=0.806)。然而，與未感染者相比較，CD8+T細胞表面 CD38+CD8+T細胞、HLA-DR+CD8+T細胞和CD38+HLA-DR+CD8+T細胞的比例均顯著增加(P=0.026，P=0.000，P ＜0.000)，詳見表2。

表1 未感染者和HIV早期感染者基本資料Tab.1 Characteristics of uninfected and early HIV-infected individuals

表2 HIV未感染者和HIV早期感染者T細胞活化水平的分析Tab.2 Analysis of the levels of activation on T cells in uninfected and early HIV-infected individuals

2.2 感染時間不同的HIV早期感染者T細胞活化水平的比較

以90 d(感染時間)為界，將HIV早期感染者分為兩組，比較感染時間不同的2組HIV早期感染者CD4+T細胞、CD8+T細胞活化水平的差異。研究結果顯示，與HIV未感染者相比較，感染時間＜90 d的HIV早期感染者HLA-DR+CD4+T細胞、CD38+HLADR+CD4+T細胞、CD38+CD8+T細胞、HLA-DR+CD8+T細胞和CD38+HLA-DR+CD8+T細胞的比例均顯著增加，感染時間＞90 d的 HIV早期感染者HLA-DR+CD8+T細胞和CD38+HLA-DR+CD8+T細胞的比例均顯著增加。

然而，感染時間＜90 d和感染時間＞90 d的兩組HIV早期感染者之間CD4+T細胞、CD8+T細胞表面活化標志 CD38、HLA-DR的表達差異無統計學意義(表3)。

表3 感染時間不同的HIV早期感染者T細胞表面活化標志CD38和HLA-DR的表達Tab.3 The expression of activation marker CD38 and HLA-DR on Tcells in early HIV-infected individuals with different infection time

2.3 HIV早期感染者T細胞活化水平與CD4細胞數、血漿病毒載量的相關性分析

為闡明HIV早期感染者T細胞活化與疾病進展的關系，我們對CD4+T細胞、CD8+T細胞的活化水平與CD4細胞數486.9±196.1、血漿病毒載量4.850±1.097的相關性進行分析。結果顯示，CD38+CD4+T細胞的比例與CD4細胞數呈顯著負相關(R=－0.533，P=0.006)，與血漿病毒載量呈顯著正相關(R=0.515，P=0.010)。CD38+HLA-DR+CD4+T 細胞的比例與CD4細胞數無相關性，而與血漿病毒載量呈顯著正相關(R=0.491，P=0.015)。

CD38+CD8+T細胞、CD38+HLA-DR+CD8+T細胞的比例與CD4細胞數呈顯著負相關(R=－0.560，P=0.004;R= －0.433，P=0.031)，與血漿病毒載量呈顯著正相關(R=0.536，P=0.007;R=0.570，P=0.004)。然而，HLA-DR+CD8+T細胞的比例與CD4細胞數無相關性，但與血漿病毒載量呈顯著正相關(R=0.551，P=0.005)，詳見表4。

表4 HIV早期感染者T細胞活化水平與CD4細胞數和血漿病毒載量相關性的分析Tab.4 Correlations between T cell activation and CD4 cell count or plasma viral load in HIV-infected individuals(n=24)

3 討論

慢性免疫活化是HIV感染的主要特點，也是HIV致病的主要原因［8-9］，早期免疫活化與AIDS疾病進展明顯相關［10］。本研究通過對MSM人群HIV早期感染者T細胞活化水平的研究，發現HIV早期感染者CD4+T細胞、CD8+T細胞表面活化標志CD38和HLA-DR的表達量均顯著增加，表明HIV早期感染時T細胞已經處于高度活化狀態。而且這種高水平的活化與感染時間無關，我們發現感染時間＜90 d的感染者和感染時間＞90 d的感染者兩組之間相比，CD4+T細胞、CD8+T細胞活化水平的差異無統計學意義。這一結果提示，T細胞的高度免疫活化可能在HIV感染及疾病進展過程中長期持續存在。然而，我們的研究結果顯示，HIV早期感染者CD8+T細胞的活化高于CD4+T細胞的活化，這可能是由于CD4+T細胞和CD8+T細胞的活化途徑不同所導致的［11］。此外，與CD4+T細胞的活化相比較，CD38+CD8+T細胞、CD38+HLA-DR+CD8+T細胞的比例與CD4細胞數量和血漿病毒載量的相關性更強。因而筆者推測CD38+CD8+T細胞、CD38+HLA-DR+CD8+T細胞的比例可能作為HIV早期感染者疾病進展的預測指標。

研究［12-15］表明，持續的ART治療能夠降低HIV的病毒載量，但即使抗病毒治療成功，慢性免疫活化也不能完全恢復。目前，國內外在積極倡導早期抗病毒治療，HIV早期感染者CD8+T細胞的免疫活化能否作為早期抗病毒治療效果的評價指標，還需要深入研究。而本研究的結果顯示CD38+CD8+T細胞、CD38+HLA-DR+CD8+T細胞的比例有可能作為HIV早期感染疾病進展的預測指標，這也為將CD8+T細胞免疫活化作為早期抗病毒療效評價的指標提供了理論依據。然而，由于本研究的樣本量較少，這一結果還需要更多、更深入的研究來證實。

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