豬肉組織中氟喹諾酮類藥物殘留檢測

張漫 李娜 高木珍 張寧 劉曉輝 王輝

摘要：隨機選取本實驗室內(nèi)的8名化驗員，分別測定豬肉組織中氟喹諾酮類藥物殘留量，通過對結(jié)果數(shù)據(jù)的分析，得出本實驗室測定結(jié)果的準確程度。通過磷酸鹽緩沖溶液提取豬肉組織中的氟喹諾酮類藥物殘留，經(jīng)C18柱凈化后，用高效液相色譜法測定含量。環(huán)丙沙星、達氟沙星、恩諾沙星和沙拉沙星的平均回收率（%）分別為：95.6、86.9、89.3和95.6，批內(nèi)變異系數(shù)均≤14%，批間變異系數(shù)均≤6%。結(jié)果數(shù)據(jù)滿足標準要求，證明本實驗室能準確開展此項檢測活動。

關(guān)鍵詞：氟喹諾酮類藥物；達氟沙星；恩諾沙星；環(huán)丙沙星；沙拉沙星；殘留檢測

Determination of Fluoroquinolones Residues in Pork Tissue

Abstract: We selecting 8 technicians in our laboratory randomly, letting they determine fluoroquinolones residues in pork tissues separately. Based on the analysis of the experimental data, we concluded the accuracy of my determination results. The Fluoroquinolones residues are extracted with phosphate buffer solution, cleaned by C18 SPE cartridge, then content was determined by HPLC. The average recoveries of four components were 95.6%, 86.9%, 89.3%, 95.6%.The variation coefficient of inter-assay were below 14%, intra-assay were below 6%. The results meet requirements , so we can carry out the test.

Key word: fluoroquinolones;danofloxacin; enrofloxacin; ciprofloxacin; sarafloxacin; residues determination

氟喹諾酮類藥物屬第3代喹諾酮類抗菌藥，適應于敏感病原菌所致的呼吸道、胃腸道等感染，具有吸收好、組織濃度高、半衰期長、抗菌譜廣等優(yōu)點，已成為獸醫(yī)臨床的常用藥。但隨著臨床用量的不斷增長，因不合理用藥或濫用藥而導致的畜產(chǎn)品質(zhì)量安全問題時有發(fā)生，并越來越引起社會的廣泛關(guān)注。本文在運用“農(nóng)業(yè)部1025號公告-14-2008”標準[1]的基礎(chǔ)上，結(jié)合本實驗室的工作實際，隨機選取8名本實驗室的化驗員，同時并獨立完成豬肉組織中氟喹諾酮類藥物殘留檢測工作，得出檢測回收率，分析和判斷測定結(jié)果的準確性。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

天平，感應0.01 g；分析天平，感應0.000 01 g；Aglient 1 200高效液相色譜儀-配熒光檢測器；振蕩器；組織勻漿機；離心機；Varian BondElut?誖C18柱（100 mg/mL）固相萃取柱；0.45 μm微孔濾膜。

1.2 藥品與試劑

達氟沙星，批號10301，含量93.5%, Dr.Ehrenstorfer Gmbh公司；恩諾沙星，批號H0081206，含量99.9%,中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；環(huán)丙沙星，批號130451-201203，含量84.2%,中國食品藥品檢定研究所；沙拉沙星，批號20629，含量95.0%,Dr.Ehrenstorfer Gmbh公司。磷酸、氫氧化鈉、甲醇、三乙胺、磷酸二氫鉀均為分析純；乙腈為色譜純；超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：C18Analytical，5 μm， 4.6×250 mm；流動相：0.05 mol/L磷酸溶液/三乙胺-乙腈（82+18）V/V，使用前經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾；柱溫：25℃；流速：0.8 mL/min；進樣量：20μL；檢測波長：激發(fā)波長280 nm，發(fā)射波長450 nm。

2.2 樣品制備

2.2.1 空白樣品的制備 取豬肌肉組織200 g絞碎，作為空白樣品。

2.2.2 標準儲備液的制備精密稱取達氟沙星對照品10 mg，置于50 mL容量瓶中，用0.03 mol/L氫氧化鈉溶液溶解并稀釋成濃度為0.2 mg/mL的標準儲備液；分別精密稱取恩諾沙星、環(huán)丙沙星、沙拉沙星對照品各50 mg，依次置于50 mL容量瓶中，用0.03 mol/L氫氧化鈉溶液溶解并稀釋成濃度為1 mg/mL的標準儲備液，置于4℃冰箱中保存[2]。

2.2.3 標準工作液的制備分別精密量取1 mL達氟沙星標準貯備液、0.2 mL恩諾沙星標準貯備液、環(huán)丙沙標準貯備液星和沙拉沙星標準貯備液于同一100 mL容量瓶中，用乙腈稀釋定容，制成濃度依次為2 μg/mL的達氟沙星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星、沙拉沙星標準工作液，備用。

2.2.4 陽性添加樣品的制備8批（人）分別各自稱取空白樣品4個，每個樣品稱取2（±0.05）g，其中一個作為空白樣品，其余三個樣品分別依次添加濃度為2 μg/mL的達氟沙星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星和沙拉沙星混合標準工作液0.2 mL，制成200μg/kg的陽性樣品，用于測定回收率[3]。

2.3 提取凈化方法

將稱取的2（±0.05）g豬肌肉組織樣品置于30 mL勻漿杯中，加磷酸鹽沖溶液10.0 mL，10 000 r/min勻漿1 min。勻漿液轉(zhuǎn)入離心管中，中速振蕩5 min，以10 000r/min離心5 min，取上清液待用。用磷酸鹽緩沖溶液10.0 mL清洗刀頭及勻漿杯，轉(zhuǎn)入離心管中，洗殘渣，混勻，中速振蕩5 min，以10 000r/min離心5 min。合并兩次上清液，混勻，備用。固相萃取柱先依次用甲醇、磷酸鹽緩沖溶液各2 mL預洗。取上清液5.0mL過柱，用水1 mL淋洗，擠干。用流動相1.0 mL洗脫，擠干，收集洗脫液。經(jīng)濾膜過濾后作為試樣溶液，供高效液相色譜測定[4]。

2.4 試驗結(jié)果

2.4.1 標準曲線 在選定的色譜條件下，0.005～0.5 μg/mL的范圍內(nèi)標準曲線及相關(guān)系數(shù)如下，線性良好。配制濃度見表1。

環(huán)丙沙星：y=603.580 19x-0.229 998, r=0.999 39

達氟沙星：y=5 406.704 01x+0.941 808, r=0.999 75

恩諾沙星：y=1 303.249 25x+2.133 35, r=0.999 78

沙拉沙星：y=484.622 58x+0.153 636, r=0.999 93

2.4.2 測定結(jié)果 環(huán)丙沙星、達氟沙星、恩諾沙星和沙拉沙星分離良好，無干擾，定量限為20μg/kg，添加濃度為200 μg/kg，批內(nèi)變異系數(shù)均小于14%，批間變異系數(shù)均小于6%。環(huán)丙沙星、達氟沙星、恩諾沙星和沙拉沙星平均回收率（%）分別為：95.6、86.9、89.3和95.6，總體回收率（%）范圍為77～113。達氟沙星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星和沙拉沙星回收率見表2，色譜圖見圖1～3。

3討論

環(huán)丙沙星和沙拉沙星平均回收率為95%以上；達氟沙星和恩諾沙星平均回收率在85%～90%區(qū)間，總體回收率較好。

批內(nèi)變異系數(shù)的大小和化驗員工作熟練程度及工作經(jīng)驗有直接關(guān)系，熟練的化驗員所測得的回收率批內(nèi)變異系數(shù)較低，工作時間較短的化驗員所測得的回收率批內(nèi)變異系數(shù)較高。

環(huán)丙沙星、達氟沙星、恩諾沙星和沙拉沙星檢測殘留量的批間變異系數(shù)（%）均小于6%，誤差較低。

以上為本實驗室的檢測數(shù)據(jù)，為其它實驗室開展同類檢測提供數(shù)據(jù)支持。■（編輯：狄慧)

參考文獻：

[1] 農(nóng)業(yè)部1025號公告-14-2008. 動物性食品中氟喹諾酮類藥物殘留檢測-高效液相色譜法 [S]．

[2] 郭黎明，朱奎，丁雙陽，等．雞肌肉組織中四環(huán)素類和氟喹諾酮類藥物多殘留檢測[J].中國農(nóng)業(yè)大學學報，2009,05:98-102．

[3] 朱莉萍，朱濤，武娜，等．高效液相色譜法測定豬肉中氟喹諾酮類藥物[J].肉類研究，2011,10:29-31．

[4] 丑亞琴； 唐巍； 盧艷芬，等．高效液相色譜法同時測定水產(chǎn)品中四種氟喹諾酮類藥物殘留前處理條件的優(yōu)化[J].水產(chǎn)養(yǎng)殖，2013,1:25-31．