烏魯木齊地區牛口蹄疫O型Asia—Ⅰ型雙價滅活疫苗免疫效果的檢測與分析

排合爾丁·穆太力甫 李建玲 馬正海

摘要 [目的]研究烏魯木齊地區?？谔阋逴型AsiaΙ型雙價滅活疫苗的免疫效果。[方法] 應用液相阻斷ELISA法檢測492份口蹄疫O型AsiaΙ型雙價滅活疫苗的免疫效果。[結果] 免疫牛群對?？谔阋逴型的平均免疫合格率為97.6%，對AsiaΙ型的平均免疫合格率為97.7%。[結論] ?？谔阋逴型AsiaΙ型雙價滅活疫苗可以使免疫牛產生有效的免疫保護。

關鍵詞 口蹄疫病毒；O型；AsiaΙ型；雙價滅活疫苗；免疫保護

中圖分類號 S857.65 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2014）27-09400-02

Immune Effect Detection of Bivalent Inactivated Vaccine of Otype AsiaⅠof Cattle Footandmouth Disease in Urumqi Area

Paiheerding Mutailifu¹，LI Jianling2*， MA Zhenghai¹

（1.College of Life Science and Technology， Xinjiang University， Urumqi， Xinjiang 830046； 2.Urumqi Animal Disease Control and Diagnostic Center， Urumqi， Xinjiang 830063）

Abstract [Objective] The research aimed to study the immune effect of bivalent inactivated vaccine of Otype Asia Ι of cattle footandmouth disease in Urumqi region. [Method] The immune effect of 492 bivalent inactivated vaccines of Otype Asia Ι of footandmouth disease was detected by using liquidphase blocking ELISA. [Result] The average immune qualified rate of the immunized cattle to Otype footandmouth disease was 97.6%， and the average immune qualified rate to Asia Ι type was 97.7%. [Conclusion] The effective immune protection of immunized cattle could be obtained by using bivalent inactivated vaccine of Otype AsiaΙ of cattle footandmouth disease.

Key words FMDV；Otype；AsiaI type；Bivalent inactivated vaccine； Immune protection

口蹄疫（Foot and mouth disease，FMD）是由口蹄疫病毒（FMDV）引起的偶蹄類動物感染的一種急性、接觸性傳染病，主要危害豬、牛、羊等70種家畜和野生動物，人類也易感，對畜牧業造成巨大的危害^[1]。自然感染口蹄疫的潛伏期一般較短，2～8 d，有時可能為1～14 d，這取決于病毒感染量、病毒毒株和傳染方式等。牛口蹄疫的早期癥狀很可能包括牛的產奶量減少，并伴隨有厭食、精神沮喪和發熱。此后1 d左右口腔及周圍、蹄部和乳房（尤其是乳頭）可見水泡^[2-3]。FMDV屬于小RNA病毒科，病毒粒子外形呈二十面體，由4種結構蛋白（VP1、VP2、VP3、VP4）各60個拷貝組成，其共有7個血清型（O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3、AsiaI型）。據國際口蹄疫參考實驗室對疫情通報統計，O型在世界范圍流行最廣，其次為AsiaI和A型，C型和南非三型非常罕見，通常只在特定區域流行。目前，我國正面臨以O型和AsiaI型為主要的口蹄疫病的大流行^[4-6]。

快速診斷FMDV感染的家畜并對非疫區的動物實施疫苗接種是控制口蹄疫暴發的主要策略。FMDV 7個血清型之間無交叉免疫保護，即使同一血清型不同毒株的抗原性也有較大變化，對FMDV主要抗原位點、細胞受體及其引起侵入機體的免疫學反應等的深入研究對研制安全、高效的口蹄疫疫苗至關重要。目前，包括亞單位疫苗、載體疫苗、基因缺失疫苗、合成肽疫苗、核酸疫苗、植物反應器可飼疫苗和多表位疫苗等在內的新型口蹄疫疫苗均見報道^[7-9]，這些新型疫苗的研究取得了一些成果，但在免疫效果和生產成本等方面尚無法與常規疫苗競爭，加上FMDV弱毒活疫苗有返強并使免疫動物發病的危險，已被世界上大多數國家所摒棄，因此目前口蹄疫預防和控制主要依靠口蹄疫滅活疫苗。

口蹄疫滅活疫苗是利用常規技術制造的以滅活病毒為抗原的一類疫苗，滅活疫苗因其安全有效而被廣泛應用于易感家畜免疫接種。疫苗的免疫效果直接關系到口蹄疫的防控效果。為了掌握烏魯木齊市牲畜牛在接種口蹄疫O型AsiaI型雙價滅活疫苗后產生的免疫效果，筆者用口蹄疫液相阻斷ELISA 抗體檢測試劑盒對烏魯木齊市不同地區該疫苗免疫牛血清中粒子抗原抗體水平及免疫保護力進行研究，以期為口蹄疫的預防與控制提供參考。

1 材料與方法

1.1 疫苗效果檢測的樣品來源及數量

樣品來自于新疆維吾爾自治區烏魯木齊市7個區（天山區、米東區、頭區、水區、烏縣、大阪城、新市區）向烏魯木齊市動物疾病控制與診斷中心送檢免疫牛血清492份。采血牛是按照國家強制性免疫接種要求（牲畜口蹄疫疫苗的免疫注射密度應達到99%以上）給犢牛（奶牛）90日齡進行初免，間隔1個月進行1次強化免疫，以后每隔4個月免疫1次的免疫程序免疫的，牛、羊O型AsiaI型雙價口蹄疫滅活疫苗均為金宇保靈生物藥品有限公司產品。

1.2 檢測診斷試劑

口蹄疫液相阻斷ELISA抗體檢測試劑盒購于中國農業科學院蘭州獸醫研究所。

1.3 檢測方法

應用口蹄疫O型、亞Ⅰ型抗體液相阻斷ELISA檢測試劑盒對免疫牛血進行O型、AsaiI型口蹄疫免疫抗體水平檢測，檢測方法參照試劑盒說明書。

1.4 結果判定

每塊板設置4孔病毒抗原對照，直接用PBST稀釋至工作濃度，與血清/病毒抗原復合物同步加入酶標板孔，50 μl/孔。以病毒抗原對照平均OD492 nm值的50%為臨界值，被檢血清OD492 nm值大于臨界值的孔為陰性孔，小于等于臨界值的孔為陽性孔。某份血清系列稀釋中，陽性孔的最高稀釋倍數為被檢血清是抗體效價。定性檢測中，2個重復孔只要有1孔為陽性孔，則抗體滴度判定為1∶64，2孔均為陽性孔，則判定為抗體滴度>1∶64；當血清抗體滴度≥1∶64時，判定抗口蹄疫抗體效價合格；存欄家畜免疫抗體合格率達70%時，判定為疫苗免疫合格。

2 結果與分析

采用ELISA法檢測了492份口蹄疫O型AsiaΙ型雙價滅活疫苗免疫牛血清的免疫抗體水平、O型和AsiaΙ型口蹄疫抗體檢測的合格率。由表1可知，492份免疫牛血樣中，口蹄疫O型測定值抗體滴度達到1∶64以上的共有480份，平均免疫合格率為97.6%；口蹄疫AsiaΙ型共有482份，平均合格率為97.7%，完全符合國家疫苗免疫要求（存欄家畜免疫抗體合格率達70%時判定合格）。

3 討論

梁宏志等^[10]報道哈爾濱地區牛、羊進行O型和Asia Ι 型雙價口蹄疫滅活疫苗合格率檢測免疫合格率均為72.3%。鄭慶維等^[11]報道云南省龍陵縣牛O型AsiaI型雙價滅活疫苗免疫合格率分別為74%和76%。該試驗檢測出的?？谔阋逴型和AsiaΙ型雙價滅活疫苗的免疫合格率較高，說明口蹄疫O型AsiaΙ型雙價滅活疫苗可以使免疫牛產生有效的免疫保護。

參考文獻

[1] 丁耀忠，張杰，馬麗娜，等.口蹄疫及檢測技術進展[J].中國農學通報，2009，25（9）：6-10.

[2] ESTEBAN DOMINGO，ERIC BARANOWSKI，CRISTINA ESCARMIS，et al.Footandmouth disease virus[J].Immun.Comparative Immunology，Microbiology & Infectious Diseases，2002，25：297-308.

[3] 弗朗西斯科·索布林那，埃斯特班·多明戈.口蹄疫現狀與未來[M].北京：中國農業科學技術出版社，2009.

[4] JOERN KLEIN，UNAL PARLAK，FUAT OZYRK.Understanding the molecular epidemiology of footandmouthdisease virus[J].Infection，Genetics and Evolution，2009，9：153-161.

[5] GARABED R B，JOHNSON W O，THURMOND M C，et al.Analytical epidemiology of genomic variation among Pan Asia strains of footandmouth disease virus[J].Transbound Emerg Dis，2009，56：142-156.

[6] ABILA R C.Foot and mouth disease in Southeast Asia current status and control strategies[C]//Proceedings of the Foot and Mouth Disease International Symposium and Workshop.Melbourne Australian，2010.

[7] BACKER J A，HAGENAARS T J，NODELJIK G，et al.Vaccination against footandmouth disease[J].Epidemiological consequence[J].Prev Vet Med，2012，170：27-40.

[8] HALASA A D，MCCARL B A，CARPENTER T E，et al.Metaanalysis on the efficacy of footandmouth disease emergency vaccination[J].Prev Vet Med，2013，98：1-9.

[9] 史蘭廣，鄒興啟，朱元源，等.影響口蹄疫疫苗效力的因素[J].中國獸醫雜志，2013，499（11）：89-91.

[10] 梁宏志，付志發.哈爾濱地區牛、羊O型和亞洲Ⅰ型口蹄疫免疫效果檢測報告[J].畜牧獸醫科技信息，2010，36（4）：593-596.

[11] 鄭慶維，匡繼才，蔣照彩，等.牛口蹄疫O型AsiaI型雙價（濃縮）滅活疫苗免疫效果觀察[J].中國獸醫雜志，2009，45（8）：51.