犬細小病毒特異性免疫球蛋白的臨床應用效果觀察

2021-09-27 09:03:42陳念慈王思瑩柴鑫妍楊萬蓮孫艷爭呂艷麗

畜牧獸醫學報 2021年9期

陳念慈,王思瑩,柴鑫妍，3,趙永，4,楊萬蓮，,孫艷爭，,呂艷麗，*

(1.中國農業大學動物醫學院，北京 100193；2.中國農業大學動物醫院，北京 100193；3.北京寵頤生動物醫院，北京 100021；4.北京世紀好未來科技教育有限公司，北京 100192)

犬細小病毒(canine parvovirus，CPV)是臨床上引起犬發病的重要病原體，最早于1977年從患出血性腸炎的犬糞便中分離得到[1]。大多數的犬科動物均有可能感染CPV，6周齡至6月齡的犬發病率較高。大多數CPV患犬會出現胃腸道癥狀，表現為嘔吐、腹瀉、脫水和胃腸道出血等，少數病例會出現心肌炎癥狀[2]。除此之外，CPV會抑制骨髓，造成白細胞的減少。細小病毒病的治療通常包括抗病毒治療、對癥治療、防止繼發感染和支持療法。其中抗病毒治療除了使用干擾素、球蛋白等廣譜抗病毒藥物外，還包括針對CPV進行特異性治療。國內目前廣泛使用CPV單克隆抗體進行特異性抗病毒治療，而關于CPV特異性免疫球蛋白的臨床應用情況報道較少。本研究收集了中國農業大學動物醫院2016年1月—2019年11月接收的CPV病患犬病例治療信息，旨在探究CPV特異性免疫球蛋白在臨床的應用效果。

1 材料與方法

1.1 病例選擇

選取2016年1月—2019年11月在中國農業大學動物醫院就診、經安捷CPV抗原檢測試紙條(Anigen Rapid CPV Ag Test Kit?)檢測結果陽性的患犬作為研究對象，跟蹤回訪其治療情況。研究對象不包含同時感染犬瘟熱致死的病例。

1.2 特異性抗病毒藥物

犬細小病毒特異性免疫球蛋白注射液來自于北京博萊得利生物技術有限責任公司。本品主要含有犬細小病毒特異性免疫球蛋白，純度≥96%，犬細小病毒中和抗體效價≥1∶640，HI效價≥1∶1 280。

犬細小病毒單克隆抗體注射液來自哈爾濱元亨生物藥業有限公司。本品主要含有犬細小病毒單克隆抗體，HI效價≥1∶1 280。

1.3 方法

通過臨床跟診、病歷查閱和電話回訪等方式詳細記錄CPV患犬的基本信息、免疫史和病史，觀察和詢問動物主人治療過程中病犬精神飲食情況、嘔吐情況、糞便性狀、體溫等臨床癥狀。以患犬首次出現食欲下降、精神不振或嘔吐、腹瀉等CPV相關臨床癥狀作為發病的首日，以嘔吐和腹瀉癥狀消失、精神食欲恢復正常作為痊愈判定標準計算病程。以拜奧高犬三聯抗體檢測試劑盒(Canine VacciCheck?)檢測結果作為抗體HI效價檢測依據。

將收集的病例數據錄入Microsoft Excel軟件中整理，并采用SPSS軟件對數據進行分析。

2 結果

2.1 總體治愈率比較

在收集的具有詳細病程及轉歸情況記錄的CPV病例中，使用CPV特異性免疫球蛋白治療的病例共97例，其中痊愈77例，死亡20例，治愈率為79.38%。在同一時期使用CPV單抗治療的病例共計143例，其中痊愈116例，死亡27例，治愈率為81.12%。數據經SPSS軟件進行卡方檢驗，CPV特異性免疫球蛋白與CPV單抗的治愈率無顯著差異(P>0.05)。

2.2 不同初始抗體水平的治愈率比較

在完整記錄初始抗體水平的病例中，使用CPV特異性免疫球蛋白進行治療的共69例，使用CPV單抗的共78例。按照初始CPV抗體效價0～1∶40、1∶80～1∶160、≥1∶320進行劃分，各抗體水平的治愈率結果見表1。

表1 不同初始抗體水平CPV患犬的治愈率比較

初始抗體效價為0～1∶40時，CPV特異性免疫球蛋白治愈率為71.43%，CPV單抗治愈率為74.36%；初始抗體效價為1∶80～1∶160時，CPV特異性免疫球蛋白治愈率為91.30%，CPV單抗治愈率為88.00%；初始抗體效價≥1∶320時，CPV特異性免疫球蛋白治愈率為90.91%。CPV單抗治愈率為78.57%。數據經SPSS軟件卡方檢驗，CPV特異性免疫球蛋白和CPV單抗在各初始抗體水平下的治愈率均無顯著性差異(P>0.05)。另外，約50%的CPV患犬的初始抗體水平小于1∶80，該組治愈率低于更高抗體水平組，但無統計學差異。

2.3 不同月齡的治愈率比較

按照0～3、4～6以及≥7月齡對病例進行劃分。使用CPV特異性免疫球蛋白進行治療的共97例，使用CPV單抗的共143例，各月齡段病例的治愈率結果見表2。

表2 不同月齡CPV患犬的治愈率比較

0～3月齡的病例中，CPV特異性免疫球蛋白治愈率為67.24%，CPV單抗治愈率為68.42%；4～6月齡的病例中，CPV特異性免疫球蛋白治愈率為95.24%，CPV單抗治愈率為91.30%；，7月齡及以上的病例中，CPV特異性免疫球蛋白與CPV單抗的治愈率均為100.00%。數據經SPSS軟件卡方檢驗，在相同月齡段下，CPV特異性免疫球蛋白和CPV單抗的治愈率均無顯著差異(P>0.05)。0～3月齡患犬占總數的50%～60%，該月齡段的治愈率均顯著低于更高月齡段(P<0.05)。

2.4 痊愈病例的病程比較

CPV特異性免疫球蛋白與CPV單抗治療的痊愈病例病程分布見圖1。由圖可見CPV患犬的痊愈病程主要集中于4～9 d。使用CPV特異性免疫球蛋白后痊愈的病例共77例，其中病程為4～9 d的病例為65例，占84.42%。使用CPV單抗痊愈的病例116例，其中病程為4～9 d的病例為101例，占87.07%。經SPSS軟件檢驗，兩組病程數據均符合正態分布。使用獨立樣本T檢驗方法分析，使用CPV特異性免球蛋白治療的病例痊愈時間為(6.00±2.01)d，使用CPV單抗治療的病例痊愈時間為(6.95±2.06)d，特異性球蛋白組的治愈時間顯著少于單抗組(P=0.02<0.05)。

圖1 不同藥物治療的CPV患犬的痊愈病程分布

3 討論

犬細小病毒單克隆抗體是通過體外人工培養高效表達CPV特異性抗體的雜交瘤細胞株而獲得的生物制品，其效價高且特異性強，在治療犬細小病毒病方面發揮了重要作用。犬細小病毒特異性免疫球蛋白是通過對健康犬進行多次CPV免疫，從中篩選含有高效價CPV中和抗體的犬血清進行免疫球蛋白的提取和純化而獲得的血液制品。多種疾病中，高免血清的治療效果已經被證實[3-4]。CPV特異性免疫球蛋白制劑與普通高免血清相比具有更高的安全性，在臨床使用中未見明顯不良反應。周靈等[5]使用與本研究相同的CPV特異性免疫球蛋白產品，結果顯示其病毒中和效果優于CPV多克隆抗體，中和抗體效價達1∶873，HI效價達1∶211。姜旭等[6]、李六金等[7]證實了CPV免疫球蛋白對犬細小病毒病具有良好的治療效果。

在本研究中，CPV特異性免疫球蛋白與臨床較常使用的CPV單抗相比可以顯著縮短痊愈病例的病程，原因可能在于以下兩個方面。首先，CPV特異性免疫球蛋白來源于疫苗免疫的健康犬血清，經過蛋白提純與滅活處理后，可以通過靜脈注射直接進入血液循環，患犬吸收效率更高，起效更快。其次，與單克隆抗體比較，CPV特異性免疫球蛋白除了含有CPV特異性多克隆抗體外，還含有與生活環境和疫苗接種等相關的多種抗體和球蛋白，不僅可以中和病毒，還可以通過活化補體以及結合Fc受體產生抗體依賴性細胞毒性作用和調理吞噬作用，激活機體免疫細胞，清除細胞內的病毒，縮短治療周期。

兩種藥物對相同月齡段患犬的治愈率并無差異，但0～3月齡病例的治愈率要顯著低于更高月齡，這可能與3月齡以下幼犬免疫功能不完全和處于免疫窗口期有關。初始抗體效價達到1∶80以上的病例治愈率較高，這與Gooding和Robinson[8]的研究結果相同。部分高抗體水平的病例仍然出現死亡，首先可能是因為動物存在基礎病或并發癥。其次，部分患犬發病后數日首次測得的抗體滴度并不能完全代表其感染CPV時機體實際的抗體水平。另外，毒株變異可能導致致病性增強或抗原性改變，多篇報道指出接受完全免疫的犬暴發新亞型病毒的感染[9-11]。但疫苗免疫效果受多種因素影響，更多學者普遍認為目前CPV疫苗對各個亞型病毒均具有保護作用[12-14]。

犬細小病毒病作為寵物臨床中死亡率較高的傳染病，對養犬業帶來了巨大的損失。尋找犬細小病毒病的有效治療方法具有重要的臨床意義，但防治犬細小病毒病更重要的是對幼犬進行免疫接種。世界小動物獸醫協會(WSAVA)免疫小組研究指出，以正確程序接受核心疫苗的犬對疾病保護率達到98%以上[14]。在購買寵物犬時，要從正規渠道購買免疫完全的犬，盡可能保證動物健康。