通痹合劑對(duì)完全佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠抗炎消腫、降低血清中IL—6、NO作用的實(shí)驗(yàn)研究

摘要：

目的：探討通痹合劑治療風(fēng)濕及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的機(jī)理。方法：用完全佐劑造成大鼠關(guān)節(jié)炎模型，經(jīng)通痹合劑治療后，檢測(cè)關(guān)節(jié)炎大鼠的足跖關(guān)節(jié)腫脹度，觀察病變關(guān)節(jié)組織的炎癥病理變化和血清中IL-6、NO含量的影響。結(jié)果：與正常對(duì)照組大鼠相比，RA模型大鼠關(guān)節(jié)組織中出現(xiàn)炎癥病變，血清中IL-6、NO含量顯著升高（P<0.05）， 與RA模型組相比通痹合劑高、低劑量組大鼠病變關(guān)節(jié)組織的炎癥受到抑制關(guān)節(jié)腫脹度和血清中IL-6、NO含量和顯著降低（P<0.05），但顯著高于正常組（P<0.01），與陽(yáng)性藥正清風(fēng)痛靈組無(wú)差異。結(jié)論：通痹合劑對(duì)完全佐劑造成的大鼠關(guān)節(jié)炎有抗炎消腫、改善病變關(guān)節(jié)組織的炎癥狀況、降低血清中IL-6、NO作用。

關(guān)鍵詞：通痹合劑；抗炎消腫；IL-6；NO；完全佐劑；風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎

【中圖分類號(hào)】

R917 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1002-3763（2014）08-0010-01

通痹合劑是以治療風(fēng)濕及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎為主的中藥制劑，屬通痹靈系列劑型之一。此藥已在我院臨床使用多年，療效較佳。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)通痹合劑舒筋活血、通絡(luò)止痛等主要功效，觀察其對(duì)完全佐劑造成的關(guān)節(jié)炎大鼠的病變關(guān)節(jié)組織的抗炎消腫和關(guān)節(jié)炎癥組織形態(tài)的病理改善，及降低血清中IL-6、NO作用，了解通痹合劑治療風(fēng)濕及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)理的實(shí)驗(yàn)研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物：清潔級(jí)SD大鼠，雄性、動(dòng)物合格證號(hào)： 2001A046。動(dòng)物購(gòu)自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.1.2 藥物與試劑：（1）藥物^[1]。通痹合劑，批號(hào)020715，提供單位：廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院。2.正清風(fēng)痛靈腸溶片，批號(hào)0009103，提供單位：湖南正清制藥集團(tuán)股份有限公司。（2）試劑與儀器：弗氏完全佐劑（adjuvant complete freund，美國(guó)Difco產(chǎn)品。）；一氧化氮試劑盒，購(gòu)自南京建成生物工程研究所；IL-1放免試劑盒，購(gòu)自北京東亞生物技術(shù)研究所。顯微鏡， 6010型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（惠普上分），BX40型顯微鏡日本 奧林巴斯公司。酶標(biāo)儀 （BIO-RAD）model 550。

1.2 方法

1.2.1 AA大鼠模型的建立于大鼠右后足跖皮內(nèi)注射完全弗氏佐劑0.1mL，誘發(fā)佐劑性關(guān)節(jié)炎^[1]。

1.2.2 血清中白細(xì)胞介素IL-1 的檢測(cè)：采用放免法：按試劑盒說(shuō)明書(shū)上的方法測(cè)試。

1.2.3 血清中NO測(cè)定：比色分析法：按試劑盒說(shuō)明書(shū)上的方法530nm處比色，測(cè)光密度。

1.2.4 實(shí)驗(yàn)分組及給藥：大鼠試驗(yàn)前大鼠飼養(yǎng)三天后隨機(jī)分為五組（1）正常組（2）正清風(fēng)痛靈腸溶片組（48mg/kg/體重/日）（3）RA模型組（4）通痹合劑高劑量組（100%通痹靈合劑20g/kg/體重/日（5）通痹合劑低劑量組（50%通痹靈合劑20ml/kg/體重/日）。除正常組外，其余四組復(fù)制佐劑性大鼠關(guān)節(jié)炎模型，造模14天后測(cè)量大鼠右后肢體積（灌胃前），作為腫脹的初始體積指標(biāo)。第15天后每組鼠分別按劑量灌胃連續(xù)給藥8天，正常組和RA模型組給予等體積生理鹽水。在造模后的第21天處死大鼠，測(cè)量各組大鼠致炎肢腫脹度（V灌胃后-V灌胃前），取血清檢測(cè)IL-6、NO，然后做后肢關(guān)節(jié)病理切片檢查。

1.5 血清中IL-6、NO檢測(cè)：按試劑盒中說(shuō)明書(shū)的方法進(jìn)行檢測(cè)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS軟件統(tǒng)計(jì)，比較組間差異。

2 結(jié)果

2.1 一般外觀觀察：與正常組相比造模后的大鼠均出現(xiàn)程度不同的異常現(xiàn)象，如食量減少，毛色暗無(wú)光澤，自發(fā)活動(dòng)減少，疲乏，消瘦等， RA模型組尤其嚴(yán)重。

2.2 通痹合劑對(duì)弗氏佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠血清中IL-6、NO的影響（x±s）

通痹靈合劑能顯著降低弗氏佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠血清中IL-6、NO，其作用強(qiáng)度隨劑量增大而增強(qiáng)（表1）。

4 病理觀察

以上各組大鼠處死后剪后肢，剝皮，經(jīng)甲醛固定，常規(guī)脫水，脫鈣，做關(guān)節(jié)切片，染色后光鏡下觀察。結(jié)果如下：

與正常組相比：RA模型組軟組織炎癥嚴(yán)重，關(guān)節(jié)滑膜呈絨毛狀增生， 絨毛間質(zhì)內(nèi)小血管增生明顯，大量淋巴細(xì)胞及漿細(xì)胞浸潤(rùn)，局部見(jiàn)淋巴小結(jié)。通痹合劑高劑量組：滑膜病變和軟組織炎癥減輕，散見(jiàn)小血管增生及淋巴細(xì)胞及漿細(xì)胞浸潤(rùn)，未見(jiàn)淋巴小結(jié).且個(gè)別治療鼠表現(xiàn)為滑膜正常，軟組織正常。 通痹合劑低劑量組，使滑膜病變和軟組織炎癥減輕。但治療效果明顯遜于通痹合劑高劑量組.正清風(fēng)痛靈腸溶片治療效果與通痹合劑高劑量組相比無(wú)明顯差異.結(jié)果顯示：，通痹合劑使佐劑造成關(guān)節(jié)炎大鼠的病變關(guān)節(jié)組織的炎癥受到抑制，，使鼠關(guān)節(jié)病變組織趨于正常， 其療效與正清風(fēng)痛靈相比無(wú)差異。并對(duì)劑量存在依賴性.

5 討論

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）是一種以關(guān)節(jié)滑膜慢性炎癥為特征的自身免疫性疾病。多發(fā)于中老年人的慢性、進(jìn)行性關(guān)節(jié)病，以關(guān)節(jié)滑膜呈絨毛狀增生，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)為主要病理特征^[2]，而AA大鼠模型可表現(xiàn)出與RA極為相似的滑膜炎^[3] 。近年來(lái)，有關(guān)細(xì)胞因子與滑膜病變的關(guān)系越來(lái)越引人注目， 在風(fēng)濕及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要作用的白介素 1（IL 1β），作為最早發(fā)現(xiàn)的炎癥因子而日益受到重視^[5]。正常數(shù)量的NO作為一種神經(jīng)遞質(zhì)對(duì)于維持血管張力，抗血小板凝血的起著重要作用，過(guò)量的NO卻造成細(xì)胞和組織的損害。在RA發(fā)病過(guò)程中，異常升高的NO則成為一種重要炎癥介質(zhì)直接參與關(guān)節(jié)損傷和炎癥產(chǎn)生的過(guò)程，表現(xiàn)為血管過(guò)度擴(kuò)張，滲出增加，并促進(jìn)PGE2、TNF-A、IL-1A等炎癥介質(zhì)釋放，加重炎癥反應(yīng)。降低NO，能減少其免疫損害和細(xì)胞毒性，起到抗炎免疫作用，有利于炎性腫脹的緩解。

風(fēng)濕及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的病理變化主要為滑膜的破壞與變性，以及繼發(fā)的滑膜與滑液炎癥性改變，是滑膜分解與合成代謝失衡的結(jié)果。RA治療的主要方向是延緩關(guān)節(jié)滑膜的退變改善滑膜與滑液炎癥狀況。通痹靈系列劑型之一的通痹合劑作為重要的祛風(fēng)濕藥長(zhǎng)期以來(lái)廣泛地應(yīng)用于風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎等痹癥的治療，有“去眾風(fēng)，通十二經(jīng)脈”的功效。通痹合劑可通過(guò)調(diào)節(jié)RA發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵性炎癥因子IL 1水平產(chǎn)生對(duì)RA的防治作用以延緩關(guān)節(jié)滑膜的退變，改善病變關(guān)節(jié)組織的炎癥狀況。

病理學(xué)檢查表明：消腫止痛，改善晨僵，抑制病情發(fā)展，促進(jìn)關(guān)節(jié)功能恢復(fù)，對(duì)RA各期均有一定療效， 能減輕關(guān)節(jié)滑膜的充血水腫、炎細(xì)胞浸潤(rùn)、滑膜細(xì)胞增生、組織增厚等滲出性變RA是一種免疫介導(dǎo)的炎癥性疾病，其早期病變?cè)诠?jié)滑膜。AA大鼠模型可表現(xiàn)出與RA極為相似的關(guān)滑膜炎。現(xiàn)已了解，炎癥細(xì)胞因子IL-1和NO在RA發(fā)病中相當(dāng)重要。滑膜細(xì)胞合成的IL-1、NO等細(xì)胞因子釋放入滑膜液和血液中，能促進(jìn)滑膜成纖維胞的增殖和滑膜微血管的新生，是導(dǎo)致關(guān)節(jié)破壞的重因素。因此，減少I(mǎi)L-1、NO的含量是治療RA的環(huán)節(jié)之一。

本實(shí)驗(yàn)表明：通痹合劑能能減AA大鼠“關(guān)節(jié)的炎癥腫脹，降低IL-1、NO水平，減輕炎癥反應(yīng)，其作用機(jī)理可能是通過(guò)抑制滑膜炎、抑制IL-1，NO異常過(guò)量分泌，起到了抗炎消腫抑炎的作用，病理學(xué)觀察證實(shí)，灸治能減輕關(guān)節(jié)滑膜的充血水腫、炎細(xì)胞浸潤(rùn)、滑膜細(xì)胞增生、組織增厚等滲出性變。現(xiàn)已了解，炎癥細(xì)胞因子IL-1和NO在RA發(fā)病中相當(dāng)重要。滑膜細(xì)胞合成的IL-1、NO等細(xì)胞因子釋放入滑膜液和血液中，能促進(jìn)滑膜成纖維胞的增殖和滑膜微血管的新生，是導(dǎo)致關(guān)節(jié)破壞的重因素。因此，減少I(mǎi)L-1、NO的含量是治療RA的重要環(huán)節(jié)之一。也是通痹合劑治療RA的機(jī)理之一，它通過(guò)下調(diào)滑膜細(xì)胞異常升高的分泌細(xì)胞因子的功能，從而使關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜細(xì)胞的過(guò)度增殖恢復(fù)正常，抑制滑膜炎癥的產(chǎn)生與發(fā)展，達(dá)到治療與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎目的

參考文獻(xiàn)

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