HPLC法測(cè)定新生化顆粒中羥基紅花黃色素A的含量

摘要：

目的：建立新生化顆粒中羥基紅花黃色素A含量測(cè)定的方法。方法：色譜柱為Agilent Eclipse XDB C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；以甲醇-乙腈-0.7%的磷酸溶液（26：2：72）為流動(dòng)相；流速1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)403nm；柱溫30℃。結(jié)果：羥基紅花黃色素A質(zhì)量濃度在8.3～132.8μg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系（r=0.9996），加樣回收率為99.11%，RSD為0.96%（n=6）；結(jié)論：本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于新生化顆粒中羥基紅花黃色素A的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：羥基紅花黃色素A；新生化顆粒；高效液相色譜法

【中圖分類號(hào)】

R453 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1002-3763（2014）08-0048-01

新生化顆粒由當(dāng)歸、川芎、桃仁、益母草、紅花、炙甘草、干姜7味中藥組成，具有活血、去淤、止痛的功效。本方中的紅花是活血通經(jīng)、去淤止痛的主藥，而羥基紅花黃色素A是紅花的主要功效成分。筆者采用高效液相色譜法測(cè)定該成分的含量[1-3]，以為進(jìn)一步完善該制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1260高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫科技有限公司）；Sartorius-ME235S電子天平；CQ250超聲清洗器。羥基紅花黃色素A對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)111637-201207，供含量測(cè)定用，含量100.0%）；新生化顆粒（云南白藥集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)分別為ZLB1304， ZLB1201，，ZLB1308）。乙腈為色譜純（經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾），水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：

色譜柱：Agilent Eclipse XDB C18；流動(dòng)相：甲醇-乙腈-0.7%的磷酸溶液（26：2：72）；進(jìn)樣量：10μL；流速1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)403nm；柱溫30℃。

2.2 溶液制備：

供試品溶液制備：取本品，研細(xì)，精密稱取約2.0g，置錐形瓶中，精密加入25%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理（功率300W，頻率50kHz）40分鐘，放冷，再稱定重量，用25%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。對(duì)照品溶液制備：取羥基紅花黃色素A對(duì)照品適量，精密稱定，加25%甲醇制成每1ml含0.13mg的溶液，即得。陰性對(duì)照溶液制備：按新生化顆粒劑制備工藝，制備缺紅花的陰性樣品，照供品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.3 方法學(xué)考察：

專屬性試驗(yàn) 分別精密吸取2.2項(xiàng)下3種溶液各10μL，按擬定的色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，在此條件下，理論塔板數(shù)以羥基紅花黃色素A峰計(jì)算大于3000。見(jiàn)圖1。可見(jiàn)，在對(duì)照品溶液色譜主峰處，供試品溶液色譜相同保留時(shí)間的色譜峰，陰性對(duì)照溶液無(wú)此色譜峰，說(shuō)明處方中其他成分對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

圖1 高效液相色譜圖 （1）陰性對(duì)照溶液 （2）對(duì)照品溶液 （3）供試品溶液

線性關(guān)系考察 密稱取羥基紅花黃色素A對(duì)照品16.60mg，25%的甲醇溶液定容于100 mL容量瓶中，得質(zhì)量濃度為166μg/ml作為母液，分別精密吸取母液0.5；1.0；2.0；4.0；8.0ml；分別定容于10ml的容量瓶中，得質(zhì)量濃度分別為8.3；16.6；33.2；66.4；132.8μg/ml羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液，分別取上述溶液10μl注入液相色譜儀，以質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)，峰面積（y）為縱坐標(biāo)，得回歸方程為：y=242.90x+128.71，r=0.9996，表明羥基紅花黃色素A質(zhì)量濃度在8.3～132.8μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對(duì)照品溶液10μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，結(jié)果RSD為0.98%（n=6）。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，于制備后0，2，4，8，12，24小時(shí)分別進(jìn)樣10μL，記錄峰面積，結(jié)果RSD為0.54%、（n=6）。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批號(hào)樣品（批號(hào)為ZLB1304），依法平行制備6份供試品溶液，依法測(cè)定含量，結(jié)果RSD為1.13%、（n=6）。

加樣回收試驗(yàn)：取樣品（批號(hào)ZLB1304）6份，精密加入羥基紅花黃色素A對(duì)照品（濃度為0.1328mg/ml）適量，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果羥基紅花黃色素A平均回收率為 99.11%，RSD為0.96%；結(jié)果見(jiàn)表1.

表1 羥基紅花黃色素A加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.4 樣品測(cè)定：

取樣品3批，按擬定色譜條件操作，測(cè)定含量，結(jié)果批號(hào)為ZLB1304，ZLB1201，ZLB1308的3批樣品中羥基紅花黃色素A的含量分別為1.846，2.035，1.948mg/g。

3 討論

曾試用水、25%甲醇、甲醇、乙醇提取，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用25%甲醇作為提取溶劑效果最優(yōu)。實(shí)驗(yàn)中考察了超聲5、l0、20、40、60、100分鐘不同提取時(shí)間對(duì)提取效率的影響，結(jié)果表明超聲40分鐘后供試品中羥基紅花黃色素A的含量基本穩(wěn)定不變，故將提取時(shí)間定為超聲40分鐘。

參考文獻(xiàn)

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）（第141-142頁(yè)）[M].中國(guó)醫(yī)藥科技出版，2010.

[2]何珊珊，萬(wàn)軍，譚睿，高效液相色譜法測(cè)定肺熱普清散中羥基紅花黃色素A含量，[J]中國(guó)藥業(yè)，2013，22（19）：29-30

[3]劉進(jìn)懷，張晴，薛彬，等.HPLC測(cè)定降糖明目顆粒中羥基紅花黃色素A的含量，[J]中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16（11）：48