HPLC—ELSD法測定腦絡通膠囊中黃芪甲苷的含量

摘要：

目的：建立腦絡通膠囊中黃芪甲苷含量測定的方法。方法：色譜柱為Agilent Eclipse XDB C18（250mm×4.6mm，5μm）；以乙腈-水（32：68）為流動相；流速1.0mL/min；柱溫30℃。ELSD檢測條件：（漂移管溫度：40℃，增益：4）。結果：黃芪甲苷進樣量在1.23～6.15μg范圍內呈良好的線性關系（r=0.9994），加樣回收率為99.67%，RSD為0.33%（n=6）；結論：本方法簡單、準確、重復性好，可用于腦絡通膠囊中黃芪甲苷的含量測定。

關鍵詞：黃芪甲苷；腦絡通膠囊；高效液相-蒸發光散射檢測法

【中圖分類號】

R453 【文獻標識碼】B 【文章編號】1002-3763（2014）08-0062-01

腦絡通膠囊由丹參浸膏、鹽酸托哌酮、川芎浸膏、甲基橙皮苷、黃芪浸膏、維生素B6組成，具有補氣活血，通經活絡的功效。本方中的黃芪是補氣虛的主藥，而黃芪甲苷是黃芪的主要成分。原標準（《中藥成方制劑第19冊》）未作黃芪甲苷的含量測定，筆者建立了測定腦絡通膠囊中黃芪甲苷含量的高效液相-蒸發光散射檢測法[1-3]。以為進一步完善該制劑的質量控制標準提供依據。

1 儀器和試藥

LC-20A高效液相色譜儀（日本島津公司）；島津ELSD-LT II蒸發光散射檢測器；Sartorius-ME235S電子天平；黃芪甲苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為110781-200613，供含量測定用，含量100.0%）；腦絡通膠囊（廣西歡寶藥業有限公司，批號分別為20130701，20130703，20130801）。乙腈為色譜純（經0.45μm濾膜過濾），其余試劑均為分析純。

2 方法和結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗：

色譜柱：Agilent Eclipse XDB C18；流動相：乙腈-水（32：68）；流速1.0mL/min；柱溫30℃。ELSD檢測條件：（漂移管溫度：40℃，增益：4）。進樣量：10μL。

2.2 溶液制備：

對照品溶液的制備：精密稱取黃芪甲苷對照品20.46mg，置100mL量瓶中，加甲醇適量，振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。供試品溶液的制備：取本品10粒的內容物，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇100ml，冷浸過夜，加熱回流4小時，提取液回收溶劑并濃縮至干，殘渣加水10ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水5ml使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱（內徑1.5cm，柱高12cm），以水50ml洗脫，棄去水液，再用40%乙醇30ml洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉移至5ml的量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液即得。陰性對照品溶液的制備：按腦絡通膠囊劑制備工藝，制備缺黃芪的陰性樣品，照供品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察：

專屬性試驗 分別精密吸取2.2項下3種溶液各10μL，按擬定的色譜條件進樣。記錄色譜圖，在此條件下，理論塔板數以黃芪甲苷峰計算大于4000。見圖1。可見，在對照品溶液色譜主峰處，供試品溶液色譜相同保留時間的色譜峰，陰性對照品溶液無此色譜峰，說明處方中其他成分對測定無干擾。

線性關系考察 密稱取黃芪甲苷對照品24.60mg，置20mL容量瓶中，得質量濃度為1.23mg/ml作為母液，分別精密吸取母液1、2、3、4、5ml，分別定容于10ml的容量瓶中，得質量濃度分別為0.123、0.246、0.369、0.492、0.615mg/ml的對照品溶液，取上述溶液10μl，注入液相色譜儀，以進樣量的常用對數值（x）為橫坐標，以峰面積的常用對數值（y）為縱坐標，線性回歸得回歸方程為：y=1.1092x+2.7535，r=0.9997，表明進樣量在1.23～6.15μg范圍內線性關系良好。

2.4 樣品測定：

取樣品3批，按擬定色譜條件操作，測定含量，結果批號為20130701，20130703，20130801的3批樣品中黃芪甲苷的含量分別為0.236，0.241，0.238mg/g。

3 討論

供試品溶液的制備時，比較了超聲提取法，加熱回流法，索氏提取法，結果顯示索氏提取法效果最理想。對流動相的組成比例進行了反復試驗，結果顯示以乙腈-水（32：68）為流動相，分離效果較好。蒸發光散射（ELSD）檢測器適用于檢測黃芪甲苷類等無紫外吸收或微弱紫外末端吸收的物質，具有較高的檢測靈敏度，且穩定性和重現性良好。實驗結果表明，本方法簡單、準確、重復性好，可用于腦絡通膠囊中黃芪甲苷的含量測定。

參考文獻

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].中國醫藥科技出版，2010.283.

[2]陳錫琨，HPLC-ELSD法測定玉屏風膠囊中黃芪甲苷的含量，[J]中國醫藥雜指南，2013，8（11）：8-9.

[3]楊曉騰，李井濤，郭美琳，HPLC-ELSD法測定止痛化瘀膠囊中黃芪甲苷的含量，[J]中國藥事，2012，26（7）：751-752.