中藥制劑復(fù)方前列安顆粒中淫羊藿苷的含量分析

摘要：

目的：建立用高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方前列安顆粒中淫羊藿苷含量的方法。方法：采用C18色譜柱（200mm*4.6mm， 5um三津特納）；流動(dòng)相：乙腈—水（30：70）；檢測(cè)波長(zhǎng)：270nm，結(jié)果：淫羊藿苷在4～36ug/ml（r=0.9998）范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。平均回收率為100.70%，RSD為2.55%。結(jié)論：本方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏度高，可有效地用于復(fù)方前列安顆粒的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：復(fù)方前列安顆粒；淫羊藿苷；高效液相色譜法

【中圖分類號(hào)】

R195 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1002-3763（2014）08-0268-01

慢性前列腺炎是成年男性生殖系統(tǒng)的常見病、多發(fā)病，復(fù)方前列安顆粒已廣泛應(yīng)用于我院臨床患者的治療，取得較好療效。該制劑由川萆解、益智仁、淫羊霍、澤瀉、黃柏、虎杖、丹參、琥珀、王不留行、延胡索、苦參、黃芪、菟絲子、烏藥、甘草等中藥材組成，具有清熱泄?jié)?、活血祛瘀、補(bǔ)腎利尿的作用。該制劑中藥材成分復(fù)雜，為了保證該制劑的安全性與有效性，較好地控制本制劑的內(nèi)在質(zhì)量，保證臨床用藥效果，淫羊藿苷作為制劑中的主要成分之一，本文參考文獻(xiàn)[1-7]采用高效液相色譜法測(cè)定制劑中淫羊藿苷的含量，作為該制劑生產(chǎn)質(zhì)量的控制標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：

LC-10AT高效液相色譜儀，SPD-10Avp紫外可見分光光度檢測(cè)器、CR-6A色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)（日本島津），MILLIPOKE Smiplicity 185純水器，Sartorius BP211D 分析天平。

1.2 試藥：

淫羊藿苷對(duì)照品（批號(hào)0737-9910）購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所。復(fù)方前列安藍(lán)顆粒由本醫(yī)院藥劑科提供的中藥制劑，所用藥材均為生產(chǎn)用同批藥材。

試劑：乙腈、甲醇為進(jìn)口色譜純，水為雙蒸水，其它試劑均為分析純。

2 含量測(cè)定

2.1 色譜條件：

C18色譜柱（200mm*4.6mm， 5um三津特納）；流動(dòng)相：乙腈—水（30：70）；流速：l.0ml/min；柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：270nm；檢測(cè)靈敏度：0.1AUFS[1-4]

2.2 溶液的制備： ①將10mg淫羊藿苷對(duì)照品精密稱取放置于100ml容量瓶中，然后再加入一定量的甲醇，搖勻稀釋，另外再取5ml淫羊藿苷對(duì)照品制成對(duì)照品溶液。

②在蒸餾瓶中放置3g本品，加入25ml稀乙醇稱重、密塞，放冷稱重，減失的重量用稀乙醇補(bǔ)足，取續(xù)濾液，搖勻作為供試品溶液。

③將不含淫羊藿的陰性對(duì)照品溶液也用同法來進(jìn)行制備。

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)：

分別取10ul陰性對(duì)照溶液、供試品溶液、對(duì)照品溶液注入色譜儀，然后對(duì)色譜圖進(jìn)行記錄，系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)證明：淫羊藿苷保留時(shí)間約為9min，其它雜質(zhì)峰與淫羊藿苷峰能夠較好地進(jìn)行分離。沒有其它干擾峰出現(xiàn)在淫羊藿苷峰位置處。

2.4 線性關(guān)系考察：

在100ml容量瓶中精密稱取10mg淫羊藿苷對(duì)照品，溶解劑加入甲醇，然后再進(jìn)行稀釋，加甲醇至刻度。分別取10 ul上述溶液來進(jìn)行測(cè)定，橫坐標(biāo)為相應(yīng)濃度，縱坐標(biāo)為峰面積，線性回歸方程為：Y=1.4409*104 X +0.02983*105，r=0.9998，結(jié)果證明：在4～36ug/ml范圍內(nèi)，淫羊藿苷的線性關(guān)系明顯處于良好。

2.5 精密度試驗(yàn)：

精密吸取同一批號(hào)（20130713）的淫羊藿苷對(duì)照品溶液20ul，連續(xù)進(jìn)樣6次，依法測(cè)定，RSD為0.70%（n=6）。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)：

取批號(hào)為20130713的同一批樣品進(jìn)行6次平行試驗(yàn)，依法測(cè)定之后再對(duì)淫羊藿苷的含量進(jìn)行計(jì)算，RSD為1.17%（n=6）。

2.7 回收率試驗(yàn)：

在2ml甲醇溶液（已經(jīng)加入淫羊藿苷對(duì)照品）中分別加入5份已測(cè)知含量的同一樣品，然后再依法測(cè)定，接下來是對(duì)回收率進(jìn)行計(jì)算，RSD為2.55%，平均回收率為100.7%（n=5）。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)：

在室溫下放置供試品溶液，然后分別在不同的時(shí)間段選取供試品溶液進(jìn)樣，對(duì)含量進(jìn)行測(cè)定，淫羊藿苷峰面積的RSD結(jié)果為1.02%，這充分說明在24h內(nèi)供試品溶液是處于較為穩(wěn)定的狀態(tài)。

2.9 樣品測(cè)定：

將供試品溶液和對(duì)照品溶液按上述方法進(jìn)行制備，分別取10ul供試品溶液和10ul對(duì)照品溶液進(jìn)樣，測(cè)定時(shí)要基于上述色譜條件。樣品測(cè)定結(jié)果見表1。

表1 樣品中淫羊藿苷的含量測(cè)定結(jié)果

3 小結(jié)與討論

3.1 中藥制劑中的成分比較復(fù)雜，淫羊藿苷為本制劑主要成分之一，黃酮醇苷類化合物是其較為主要的成分，很容易在水、甲醇、乙醇等溶劑中溶解。分別采用甲醇、乙醇、稀乙醇、水為溶媒來進(jìn)行提取試驗(yàn)，結(jié)果稀乙醇提取所得樣本含量較高，分離效果較好。

3.2 在定量分析的流動(dòng)相系統(tǒng)中，若淫羊藿苷的保留時(shí)間過短，淫羊藿苷的峰形明顯拖尾，本方法選擇在保留時(shí)間約9min時(shí)，峰形對(duì)稱，且陰性樣品無其它成分存在，線性考察、精密度、重現(xiàn)性及回收率試驗(yàn)均符合制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。

3.3 淫羊藿苷為本制劑主要成分之一，故選擇作為定量分析的參考標(biāo)準(zhǔn)。但由于淫羊藿藥材的品種、產(chǎn)地和采摘時(shí)間的不同，其淫羊藿苷含量差異比較大，因此在制劑生產(chǎn)中應(yīng)注意淫羊藿藥材的來源及時(shí)調(diào)整制劑的生產(chǎn)工藝療程。

參考文獻(xiàn)

[1]中華人民共和國(guó)藥典（一部）[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.36～37.

[2]衛(wèi)瑩芳主編.中藥鑒定學(xué)（高等醫(yī)藥院校教材），上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2010.260～261.

[3]高學(xué)敏主編.中藥學(xué)（高等醫(yī)藥院校教材），北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2007.442～443.

[4]于洋，李倚云，張厚寶等.補(bǔ)腎強(qiáng)身膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2003.9（1）：9.

[5]朱炳輝.安神補(bǔ)腦液中淫羊藿甙含量測(cè)定[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，1995.5（6）：8.

[6]張仁斌.高效液相色譜在醫(yī)藥研究中的應(yīng)用[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1983.121.

[7]柯銘清編.中草藥有效成分理化與藥理特性[M].長(zhǎng)沙：湖南科學(xué)技術(shù)出版社，1982.11.