BIRC5在肝癌中的表達及其表達與臨床病理特征的關系

[摘要] 目的 探討凋亡抑制蛋白BIRC5在肝癌中的表達及其表達與臨床病理牲的關系。方法 免疫組化檢測BIRC5在20例正常肝組織及80例肝癌組織中的表達，分析其表達與臨床病理特征的關系。 結果 BIRC5在肝癌組織中的陽性表達率為66.3%，明顯高于正常肝組織（5%），差異有統計學意義（P<0.05）。此外， BIRC5在低分化肝細胞癌中的表達率（83.3%）明顯高于高-中分化肝細胞癌（55.4%）；淋巴結轉移患者中BIRC5的表達率（85.7%）明顯高于無淋巴結轉移患者（55.9%）；II-III期患者BIRC5的表達率（83.9%）明顯高于I期患者（57.1%），差異有統計學意義（P<0.05）；而BIRC5表達率與年齡、性別、腫瘤最大直徑無明顯相關（P>0.05）。 結論 BIRC5表達與肝癌的發生密切相關，可能成為肝癌診斷的新型標記物。

[關鍵詞] BIRC5；肝癌；臨床病理特征

[中圖分類號] R735.7 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2014）09（c）-0073-02

原發性肝癌是一類常見的惡性腫瘤，對化療藥物敏感性差，病程發展迅速，預后不良[1]。肝癌的進展是多基因、多階段的發展過程，涉及一系列分子事件，導致細胞無限生長并產生惡性表型[2]。目前臨床上致力于尋找肝癌新治療靶點，實現多分子、多通路聯合治療，以期提高治療效果。肝癌細胞高表達生存素（BIRC5），是一個潛在的治療靶點[3]。目前研究表明其表達與多種腫瘤的轉移、復發、臨床分期、病理分級及多藥耐受明顯的相關[4]。該研究2009年10月—2012年12月通過免疫組化的方法，研究該基因在肝癌發病過程中的表達水平，明確其表達是否與其臨床病理特征相關，為肝癌靶向基因治療提供實驗基礎，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

取該院肝癌組織標本80例，肝癌組織遠端相對正常肝組織20例。其中，肝癌患者男47例、女33例，年齡47～67歲之間，平均55.2歲；腫瘤最大直徑≥5cm27例，<5 cm53例；低分化24例，高-中分化56例；發生淋巴轉移轉21例，無淋巴轉移59例，II～III期31例，I期49例。所有患者術前均未接受放化療。

1.2 免疫組化

所有組織標本均采用福爾馬林固定，石蠟包埋，3 μm厚切片，二甲苯及酒精梯度脫水，pH為7.2～7.4的檸檬酸鹽抗原修復液修復，滴加一抗BIRC5（美國santa cruz公司）（稀釋比例為1∶100）后4度過夜，復溫30 min后PBS漏光，滴加生物素標記二抗（武漢博士德公司）工作液，37 ℃孵育30 min，DAB（北京中杉金橋生物公司）顯色，蘇木精復染、酒精梯度脫水及中性樹膠封片。

1.3 結果判定

隨機選取10個高倍視野（物鏡40×）進行觀察，根據細胞顯色強度及陽性細胞百分率綜合評價。其中，陽性細胞數記分為：<5%為0分，5%～15%為1分，16%～25%為2分，>25%為3分。著色強度記分為：無色為0分，淺黃色和黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；以陽性細胞數得分乘以著色強度得分為免疫組化總分，范圍：0～9分，≥4分定義為陽性表達，其余為陰性表達。

1.4 統計方法

應用SPSS17.0統計學軟件對研究數據進行分析，兩樣本率計數資料的比較采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 BIRC5在不同肝組織中的表達

免疫組化染色結果顯示，BIRC5在正常肝組織中以低表達為主，20例肝癌組織遠端相對正常肝組織中有1例（5%）出現BIRC5弱陽性信號，陽性信號散在分布于組織細胞的胞核及胞漿中；在肝癌組織中以高表達為主，80例肝癌組織標本中有53例（66.3%）出現BIRC5強陽性信號，陽性信號位于組織細胞的細胞核內。BI4RC5在肝癌組織中的表達顯著高于正常肝組織，兩組比較差異有統計學意義（χ2=21.76，P=0.000）。

2.2 BIRC5在肝癌中的表達與其臨床病理特征的關系

BIRC5在肝癌組織中的表達與分化程度、淋巴結轉移及分期相關，其中，BIRC5在低分化肝細胞癌中的表達率為83.3%，明顯高于高-中分化肝細胞癌中的表達（55.4%）；淋巴結轉移患者中BIRC5的表達率為85.7%，明顯高于無淋巴結轉移患者（55.9%）；II-III期患者BIRC5的表達率為83.9%，明顯高于I期患者（57.1%），差異有統計學意義（P<0.05）；而與年齡、性別、腫瘤最大直徑無明顯相關（P>0.05），見表1。

表1 BIRC5在肝癌中的表達與其臨床病理特征的關系[n（%）]

■

3 討論

該研究通過觀察凋亡抑制蛋白BIRC5在肝癌中的表達及其表達與臨床病理牲的關系，評價了BIRC5表達與肝癌發生的關系。該研究結果顯示，IRC5在肝癌組織中的陽性表達率明顯高于正常肝組織，提示BIRC5可能作為一癌基因參與肝癌的發生。此外，BIRC5在肝癌中的表達與患者的臨床病理特征具有密切聯系，其中BIRC5在低分化肝細胞癌患者中的表達明顯高于高-中分化肝細胞癌組織，提示BIRC5的表達與肝癌細胞的分化有關，高BIRC5表達可能促進肝癌細胞的低分化，促使肝癌細胞的惡性程度增加。此外，BIRC5表達與淋巴結轉移及分期密切相關，淋巴結轉移患者中的表達明顯高于無淋巴結轉移患者，II-III期患者中的表達明顯高于I期患者。由于淋巴結轉移往往影響患者的臨床分期及預后，為此我們推測BIRC5的異常表達也參與了肝癌的發展過程，高BIRC5表達患者可能預后不良。該研究提示BIRC5在肝癌中的表達水平與腫瘤惡性、進展程度呈正比，未來臨床上可將其作為肝癌診斷新型標記物，提高肝癌診療水平。

BIRC5是凋亡抑制蛋白家族IAPs（inhibitor of apoptosis proteins）中結構最簡單、抗凋亡作用最強的蛋白分子。目前，BIRC5在多種惡性腫瘤研究中均有報道，梁紅玲等[5]報道稱 BIRC5在肺癌組織中普遍存在高表達，主要在胞核中表達，少部分可表達于細胞質中，為廣譜的分子靶點之一。該研究還提示BIRC5在肺癌男性患者中表達高于女性患者，而該研究中BIRC5與患者性別并未見相關性，可能與肺癌男性患者患者吸煙率較高有關，需要進一步研究。楊瑞、Seth等[6-7] 報道了BIRC5所編碼的Survivin在膀胱腫瘤細胞中起到促細胞增殖及調整細胞的生存時間、抑制細胞凋亡的作用，抑制BIRC5基因或下游產物表達，可能會促進膀胱腫瘤細胞凋亡，從而阻止腫瘤生長。儲兵等報道稱BIRC5參與了鼻咽癌發病過程，在鼻咽癌細胞中表達明顯上調[8]。張小麗等[9]研究表明BIRC5參與了大腸癌發病過程，并與淋巴結轉移相關。賀榮芳等[10]研究表明BIRC5在惡性淋巴瘤異常呈高表達，并與患者的臨床分期相關。BIRC5在細胞凋亡過程中也發揮著重要作用。凋亡失衡的理論貫串于腫瘤發生發展過程中[11]，選擇性地干預細胞凋亡信號傳導、誘導細胞凋亡程序啟動正成為治療惡性腫瘤的有效療法。該研究發現在肝癌樣本BIRC5表達水平升高，提示對肝癌患者采用針對BIRC5靶點的干預可能是治療肝癌癌的策略之一。然而，BIRC5在肝癌中的具體作用機理尚不清楚，有待于深入研究。

綜上所述，BIRC5在肝癌細胞中呈高表達，其表達水平與腫瘤預后有相關性，因此，BIRC5可作為一個潛在的診斷和治療靶點應用于肝癌臨床診療中，未來對BIRC5在腫瘤中的研究應進一步將基礎實驗和臨床實驗聯系起來，致力于相關抗癌靶向藥物的研發。

[參考文獻]

[1] 胡還章，江藝，蘇長青，等.腺病毒介導的BIRC5-shRNA增強索拉非尼誘導肝癌細胞凋亡的研究[J]. 2011， 16（10）：865-869.

[2] whittaker S，Marais R，Zhu AX. The role of signaling pathways in the development and treatment of hepatocellular carcinoma[J]. Oncogene，2010，29（36）：4989-5005.

[3] Khan Z，Khan N，Varma AK，et al. Oxaliplatin-mediated inhibition of survivin increases sensitivity of head and neck squamous cell carcinoma cell lines to paclitaxel[J]. Curr Cancer Drug Targets，2010，10（7）：660-669.

[4] Park E，Gang EJ，Hsieh YT，et aI.Targeting survivin over-comes drug resistance in acute lymphoblastic leukemia[J].Blood，2011，118（8）：219l-2199.

[5] 梁紅玲，黃健清，李洪勝，等.BIRC5在小細胞肺癌中的表達及與Tp53的關系[J]. 2013， 21（7）：1496-1499.

[6] 楊銳，王巖，李一夫，等. BIRC5基因沉默對人膀胱癌細胞系T24增殖抑制的研究[J].哈爾濱醫科大學學報，2012，46（2）：115-117.

[7] Seth S，Matsui Y，Fosnaugh K，et al. RNAi-based therapeutics targeting survivin and PLK1 for treatment of bladder cancer[J]. Mol Ther，2011，19（5）：928-935.

[8] 儲兵，方唯意. BIRC5表達上調在鼻咽癌發病過程的研究[J].中國熱帶醫學，2008，8（7）：1091-1093.

[9] 張小麗，陳棟梁，李靜，等. BIRC5的表達與大腸癌淋巴結轉移的關系[J]. 中國全科醫學，2008，11（11）：2033-2034.

[10] 賀榮芳，謝黎明，趙強，等.惡性淋巴瘤中 E2F1 與 BIRC5 蛋白表達的相關性研究[J].中南醫學科學雜志，2012，40（1）：20-23.

[11] Douglas Hanahan，Robert A.Weinberg，Hallmarks of cancer：Thenext Generation[J].Cell，2011，144（5）：646-674.

（收稿日期：2014-06-25）