探討HBV—DNA和AFP血清濃度的變化與HBV感染者轉歸的關系

[摘要] 目的 探討乙肝病毒感染者血清中HBV-DNA拷貝數與AFP濃度的變化對其轉歸的影響。方法 收集2012年1月—2013年1月來該院就診的400例乙肝病毒感染者血清，參照乙型肝炎和原發性肝癌的診斷標準進行如下分組：慢性乙型肝炎組200例，肝炎肝硬化組150例，肝癌組50例。對收集的標本采用實時熒光定量的方法檢測出HBV-DNA水平，化學發光法檢測AFP的濃度，然后對結果進行統計分析。結果 在所有病例中，慢性乙型肝炎組HBV-DNA拷貝數為（5.38±1.66），在3組中最高，而肝癌組HBV-DNA拷貝數為（4.41±1.43）在3組中最低。慢性乙型肝炎組與其他兩組比較，P<0.01，差異有統計學意義；3組間AFP濃度的變化進行比較，差異有統計學意義（P<0.05）。3組中HBV-DNA拷貝數及AFP濃度變化和組別之間有明顯的相關性，其中HBV-DNA的變化與病程呈反相關，而AFP的變化則呈正相關。 結論 乙肝病毒感染者應定期定量檢測血清中HBV-DNA的含量，判斷病毒的復制情況，并同時檢測AFP濃度，以期盡早發現肝組織的損害程度及病情的演變過程，對乙肝病毒感染者病程轉歸的監測和預后判斷具有重要的意義。

[關鍵詞] HBV-DNA；AFP；慢性乙型肝炎；肝炎肝硬化；肝癌；病程轉歸

[中圖分類號] R512.6 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2014）09（c）-0066-03

乙型肝炎病毒（HBV）攜帶者廣泛分布于世界各個地區，其主要的病原體是HBV，該病毒能夠對肝臟造成持續的損傷，是一種嚴重危害人類健康的致病因子。已有研究表明[1，2]，慢性乙型肝炎患者發展到肝硬化、肝癌的危險性和血清中HBV-DNA水平呈顯著的相關性，并且和病情的療效和結局有著明顯的關系。AFP是目前診斷原發性肝癌的敏感而可靠的生化指標，但在肝炎、肝硬化患者中AFP也會升高。因此，該研究就乙肝病毒感染者血清中HBV-DNA水平和AFP的濃度變化探討慢性乙肝病人轉歸的過程，動態監測乙肝病人病程發展變化，為臨床診斷提供有價值的實驗室依據，盡早發現肝組織的損害程度及病程發展，為乙肝病毒感染者的治療、病情的監控發揮重要的臨床指導作用，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

從梅州市人民醫院肝病科、消化科、介入科和腫瘤外科收集乙肝病毒感染者血清400例，其中慢性乙型肝炎200例，肝炎肝硬化組150例，肝癌組50例。[男性300例，女性100例，平均年齡（46.5±16.3）歲]。所有病例組均排除自身免疫性疾病及各類腸道病毒感染性疾病，并且排除大量飲酒史和吸煙史的患者，肝癌組病例排除轉移性肝癌，其他非HBV感染導致的肝癌及伴有其他惡性腫瘤病史的患者，所入選的病例HBV-DNA定量結果均在103 copies/mL以上，3組之間差異有統計學意義。乙型肝炎診斷標準依據中華醫學會傳染病與寄生蟲病學分會和肝病分會2005年制定的“慢性乙型肝炎防治指南”，肝癌診斷標準依據中國抗癌協會肝癌專業委員會2001年制定的“原發性肝癌的臨床診斷與分期標準”。獲得患者知情同意后，取靜脈血5 mL離心，血清置-20 ℃凍存備用。

1.2 試劑、儀器和檢測方法

1.2.1 試劑和儀器 HBV-DNA提取試劑盒由中山大學達安基因股份有限公司提供，采用羅氏Lightcycler型實時熒光定量PCR檢測儀；AFP檢測試劑是貝克曼配套試劑盒，運用美國貝克曼Accss2全自動化學發光儀。

1.2.2 檢測方法 采用磁珠法提取血清HBV DNA，取適量標本至毛細管中，每次試驗設立4種HBV DNA 標準品，濃度分別為每毫升107、106、105、104 copies，并設立空白管、陰性、臨界陽性、強陽性對照，上機進行實時熒光定量PCR擴增，檢測出血清中HBV DNA濃度；AFP檢測采用化學發光法將收集的血清標本直接上機檢測。檢測參考范圍是：HBV DNA<500 copies/mL為正常，AFP≤10 ng/L為正常 。質量控由衛生部臨床檢驗中心提供。

1.3 統計方法

應用SPSS13.0統計軟件對研究數據進行統計分析。該研究數據屬于計量資料，HBV-DNA含量需經過取㏒值的轉化，都以均數±標準差（x±s）表示。3組間的比較采用單因素方差分析，HBV-DNA及AFP在血清中變化與病程的相關分析采用Brivariate分析法。

2 結果

①在所有病例中，慢性乙型肝炎組HBV-DNA拷貝數最高，肝癌組最低。慢性乙型肝炎組分別與肝硬化組、肝癌組比較，P分別為0.003、0.006均<0.01，差異有統計學意義；慢性乙型肝炎組AFP濃度的變化與其他兩組做相同的統計分析，P分別為0.021、0.046均<0.05，差異同樣有統計學意義，見表1、2。

表1 慢性乙肝病毒感染者HBV-DNA、AFP測定（x±s）

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表2 組間單因素方差分析結果

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②以不同的組別作為分析因素進行Brivariate相關分析，3組中HBV-DNA拷貝數及AFP濃度變化和組別之間有明顯的相關性，其中HBV-DNA的變化與病程呈反相關，而AFP的變化與病程則呈正相關，結果見表2。

3 討論

3.1 病毒復制與肝組織損害的相互關系

HBV能夠在肝細胞內持續復制，反復感染，而復制指標就是血清中HBV DNA的拷貝數。HBV對肝臟的長期作用導致其炎癥及纖維化，嚴重者可發展成為肝硬化甚至肝癌。慢性乙型肝炎的病程發展和轉歸是HBV、肝細胞和免疫系統三者之間相互作用的結果，病毒基因整合到宿主細胞的DNA中[3]，造成DNA損傷，并影響受損DNA的修復，從而導致細胞基因組的變異，促使突變細胞不斷累積，最終導致肝細胞癌變。AFP是胚胎干細胞所產生的一種特殊蛋白質，在胚胎期由肝臟實質細胞和卵黃囊細胞合成，成人血液中的AFP主要來源于肝癌細胞，AFP是原發性肝細胞肝癌的特異性腫瘤標志物，其升高反映肝臟受損后新的肝細胞再生和修復，隨著病情的惡化，肝細胞大量增生，AFP在血清中的含量會急劇增加，對高危人群的隨訪中血清AFP增高與肝臟炎癥、纖維化程度有關聯。研究發現肝組織炎癥活動度增高，肝組織內的HBV-DNA載量也明顯升高，炎癥輕、中、重度之間差異有統計學意義[4]。慢性乙型肝炎發展到肝硬化、肝癌很大程度上和病毒復制情況及反復發作惡化的次數有著密切的關系。

3.2 病毒復制量與AFP的關系

該研究通過對400例乙肝病毒感染者HBV-DNA、AFP水平的檢測及統計分析發現血清HBV-DNA濃度在慢性乙肝患者組中最高，肝細胞癌組最低；而AFP濃度的變化則與其相反，二者的變化在3組之間的差異有統計學意義。這與HBV對肝細胞損害的漸進過程密切相關，HBV-DNA在體內的復制不能夠得到很好的控制，病情逐漸加重，使肝臟變形變硬而形成肝硬化，最終突變細胞的不斷累積導致了原發性肝癌的發生[5]。隨著病程的進展 血清中AFP的濃度也隨之發生改變，結果在表1中顯示，并且二者的變化與病情的發展呈明顯的相關性，結果在表2中顯示，這與乙肝病毒感染是肝癌發生的主要危險因素的相關研究[6]具有一致性，該研究表明慢性HBV感染與AFP存在密切關聯，這與HBV慢性感染者肝癌的發生過程中AFP持續升高有關[7]。該研究中發現同一個病例從慢性乙肝階段發展到肝硬化、肝癌的整個病程中，HBV病毒一直處于復制階段，對肝臟造成持續損傷，并逐步造成肝硬化、纖維化甚至肝癌，這與報道[8-9]是相符的，同時血清中AFP的濃度也在高水平范圍內不斷的變化，因此控制HBV病毒的復制將對慢性乙肝病人病程好的轉歸起到極其重要的作用。

大量的研究表明，乙型肝炎病毒感染能夠引起各種急、慢性病毒性肝炎及肝硬化等疾病，與肝癌的發生密切相關。綜合該研究分析可知，對HBV感染者應定期進行HBV-DNA的定量檢測，分析病毒的復制狀況，同時檢測AFP的濃度，以期盡早發現肝組織的損害程度及病程的轉歸，達到早期發現、早期治療的目的。綜上，慢性乙肝病人病程的發展是多因素、多機制共同作用的結果，動態監測HBV-DNA水平、AFP濃度，結合臨床診斷，綜合分析，為病程的控制和預后觀察發揮重要的指導作用。

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（收稿日期：2014-06-27）