PCNA與MMP—9的表達(dá)與宮頸鱗癌放療敏感性的關(guān)系

摘要：目的 檢測(cè)增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（Matrix metalloproteinase-9，MMP-9）在宮頸鱗癌組織、正常組織中的表達(dá)水平，研究?jī)烧吲c宮頸鱗癌放療敏感性的關(guān)系。方法收集38例宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者放療前、放療中鱗癌組織樣本和放療后正常宮頸粘膜組織樣本，采用免疫組化SP法檢測(cè)樣本中和PCNA、MMP-9的表達(dá)水平，對(duì)其結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析。結(jié)果 PCNA、MMP-9在宮頸鱗癌組織的陽(yáng)性表達(dá)高于正常宮頸粘膜組織（P<0.05），且隨著放療劑量的增加，宮頸鱗癌組織中的PCNA、MMP-9的表達(dá)水平較放療開(kāi)始前明顯下降（P<0.05）。結(jié)論 宮頸鱗癌組織中PCNA、MMP-9的高表達(dá)提示腫瘤惡性程度高，對(duì)放射治療敏感。

關(guān)鍵詞：宮頸鱗狀細(xì)胞癌；增殖細(xì)胞核抗原；基質(zhì)金屬蛋白酶-9；放療＼

宮頸癌是中國(guó)女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，宮頸鱗癌大多數(shù)對(duì)放射治療敏感。早期宮頸鱗癌以手術(shù)為主，中晚期患者以放療為主，這是近年來(lái)大多數(shù)專家學(xué)者所達(dá)成的共識(shí)。要實(shí)現(xiàn)依據(jù)患者癌組織對(duì)放療敏感性的不同而制定不同的個(gè)體化治療方案，首先要找到一些指標(biāo)預(yù)測(cè)不同個(gè)體宮頸鱗癌患者對(duì)放療的敏感性。本研究應(yīng)用SP免疫組化技術(shù)研究對(duì)比宮頸鱗癌患者放療前、中的癌組織標(biāo)本及放療后正常宮頸粘膜標(biāo)本中PCNA、MMP-9表達(dá)的檢測(cè)，來(lái)探討其作為宮頸鱗癌放療敏感性預(yù)測(cè)分子標(biāo)志物的可能性，從而為實(shí)現(xiàn)早期準(zhǔn)確預(yù)測(cè)宮頸鱗癌患者的放療預(yù)后提供依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料 選擇2013年6月～2014年6月在我院接受根治性放射治療的39例宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者，年齡34～77歲，平均57.49歲。根據(jù)FIGO（1995）分期，IB期3例，IIA期5例，IIB期23例，III期8例。所有患者在放療前均未接受其他任何抗腫瘤治療。

1.2方法

1.2.1放療設(shè)備 美國(guó)瓦里安公司，計(jì)劃系統(tǒng)Eclipse，加速器Varian 23EX，北京科霖眾后裝放療機(jī)。

1.2.2放療方法 盆腔外照射50 Gy/25 fr，后裝放療600 cGy/次×5次，宮頸A點(diǎn)劑量達(dá)80 Gy。

1.2.3取材方法 每例患者放療前鉗取宮頸鱗癌組織標(biāo)本，在放療中A點(diǎn)劑量達(dá)40 Gy時(shí)再次鉗取宮頸殘留腫瘤組織，在放療結(jié)束后鉗取部分原腫瘤組織處的宮頸粘膜組織。

1.2.4免疫組化方法 鼠抗人MMP-9單克隆抗體、兔抗人PCNA單克隆抗體、免疫組化檢測(cè)S-P試劑盒購(gòu)于福州邁新公司，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.2.5結(jié)果判定 PCNA是腫瘤細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性，陰性（-）：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞或陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<10%；陽(yáng)性（+）：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)11%～24%；陽(yáng)性（++）：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)25%～50%；陽(yáng)性（+++）：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>50%。MMP-9在腫瘤細(xì)胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性，陰性（-）：無(wú)明顯陽(yáng)性細(xì)胞；陽(yáng)性（+）：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<25%；陽(yáng)性（++）：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)25%～74%：陽(yáng)性（+++）：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>75%。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 12.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，MMP-9、PCNA為計(jì)數(shù)資料，其差異性比較采用χ2檢驗(yàn)，兩指標(biāo)問(wèn)的相關(guān)性研究采用相關(guān)分析，各檢驗(yàn)方法皆以P<0.05為差異顯著標(biāo)準(zhǔn)。

2結(jié)果

PCNA與MMP-9在組織樣本的表達(dá)卡方檢驗(yàn)結(jié)果顯示：PCNA在放療前宮頸鱗癌組織樣本、放療中宮頸鱗癌組織、放療后宮頸粘膜組織的陽(yáng)性表達(dá)率為74.36%、58.97%、23.08%，三者間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表1，同樣MMP-9在這三種不同組織樣本中的陽(yáng)性表達(dá)率為79.49%、58.97%、28.21%，差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表1。

PCNA和MMP-9均陽(yáng)性者19例，PCNA（+）/MMP-9（-）者4例，PCNA（-）/MMP-9（+）者12例，PCNA和MMP-9均陰性者4例。PCNA與MMP-9在宮頸鱗癌組織樣本中表達(dá)的相關(guān)性Spearman相關(guān)分析結(jié)果表明，二者在宮頸鱗癌組織樣本中表達(dá)呈顯著正相關(guān)（r=0.847，P<0.05），見(jiàn)表2。

3討論

PCNA在增殖細(xì)胞DNA的合成中發(fā)揮重要作用，是判斷腫瘤增殖能力和惡性程度的一項(xiàng)重要指標(biāo)。Maeda[1]等對(duì)胃癌組織研究發(fā)現(xiàn)，PCNA表達(dá)以癌組織浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血管浸潤(rùn)、肝轉(zhuǎn)移及腹膜轉(zhuǎn)移等有顯著相關(guān)性。孫淑娥[2]等也在研究中證實(shí)PCNA在良性、交界性、惡性卵巢上皮性腫瘤中均有不同程度的表達(dá)，其陽(yáng)性率呈上升趨勢(shì)，低分化組表達(dá)高于高分化組，PCNA能參與調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖活性，影響腫瘤的分化，進(jìn)而影響腫瘤生物學(xué)行為。本文發(fā)現(xiàn)隨著放療劑量的增加，腫瘤細(xì)胞中PCNA的表達(dá)逐漸下降，這也和文獻(xiàn)報(bào)道相符，這也說(shuō)明PCNA的表達(dá)與宮頸鱗癌的放療敏感性呈正相關(guān)，即PCNA高表達(dá)的宮頸鱗癌細(xì)胞放射敏感性好。

近年研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞外基質(zhì)的降解是腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟之一，在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）常過(guò)渡表達(dá)，在腫瘤轉(zhuǎn)移中產(chǎn)生多種作用，包括降解細(xì)胞外基質(zhì)、參與基底膜的降解，促進(jìn)腫瘤血管新生以及調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞問(wèn)及宿主細(xì)胞間黏附等[3-4]。本研究發(fā)現(xiàn)，MMP-9在放療前的癌組織中表達(dá)最高，放療后呈逐漸下降趨勢(shì)，在正常宮頸粘膜中鮮有表達(dá)，這也反面驗(yàn)證了侵襲性強(qiáng)的腫瘤細(xì)胞放療更為敏感，這為早期宮頸鱗癌選擇放療或手術(shù)的方式提供一定的依據(jù)。

許多學(xué)者[2，5-6]在研究中發(fā)現(xiàn)，PCNA和MMP-9在卵巢癌、結(jié)直腸癌癌、骨肉瘤中的表達(dá)呈正相關(guān)，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。我們發(fā)現(xiàn)PCNA和MMP-9在宮頸鱗癌中的表達(dá)亦呈正相關(guān)（P<0.05），說(shuō)明二者可能在宮頸鱗癌的細(xì)胞增殖、新生血管網(wǎng)形成、侵襲和轉(zhuǎn)移中起著協(xié)同作用。

參考文獻(xiàn)：

[1]Maehara Y，Kabashima A，Koga T，et al.Vascularinvasion and potential for tumor angiogenesis and metastasis in gastric carcinoma[J].Surgery，2000，128（3）：408-416.

[2]孫淑娥，田立糧，于紅麗.MMP-9、PCNA在卵巢上皮性腫瘤中的表達(dá)及臨床意義[J].中國(guó)婦幼保健，2008，23：975-977.

[3]Edwards DR，Murphy G Protases-invasion and more[J].Nature，1998：394-527.

編輯/肖慧