宮頸癌盆腔淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移分子檢測及價值分析

摘要：目的 了解宮頸癌盆腔淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移分子（HPV與端粒酶活性）的表達及其臨床意義。方法 回顧性分析我院2011年12月～2013年12月收治的64例宮頸癌患者的臨床資料，采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（FQ-PCR）與聚酶鏈反應(yīng)-酶聯(lián)免疫吸附測定法（PCR-ELISA），分析其盆腔淋巴結(jié)HPV載量、Ⅰa-Ⅱb期宮頸癌組織端粒酶活性表達。結(jié)果 與常規(guī)病理檢查結(jié)果相比較，實驗組端粒酶、宮頸癌淋巴結(jié)HPV16/18陽性率明顯較高（P<0.05），對照組均呈陰性；與病理陰性的端粒酶活性、淋巴結(jié)HPV16/18拷貝數(shù)相比較，病理陽性明顯較高（P<0.05），但較原發(fā)灶低（P<0.05）；端粒酶、淋巴結(jié)HPV16/18表達呈正比例關(guān)系（P<0.05）。結(jié)論 在與端粒酶活性表達檢測中，F(xiàn)Q-PCR、PCR-ELISA技術(shù)的宮頸癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移檢出率較常規(guī)病理組織高，值得臨床應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：宮頸癌；淋巴結(jié)；HPV；端粒酶

本文主要對我院2011年12月～2013年12月收治的64例宮頸癌患者的臨床資料進行回顧性分析，旨在探究宮頸癌盆腔淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移分子表達及其臨床意義，相關(guān)報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 本組選擇我院于2011年12月～2013年12月收治的宮頸癌患者64例為研究對象，均經(jīng)活檢組織病理學(xué)檢查確診后行全子宮與盆腔淋巴結(jié)清掃術(shù)，年齡（22～64）歲，平均年齡在（45.12±7.35）歲；9例Ⅰa期，19例Ⅰb期，29例Ⅱa期，7例Ⅱb期；6例腺癌，63例鱗癌；19例高分化，28例中分化，17例低分化。擇取64例良性女性疾病患者的淋巴結(jié)為陰性對照組，年齡22～65歲，平均年齡在（45.87±8.05）歲。

1.2 方法

1.2.1 HPV16/18亞型檢測方法 收集宮頸癌、淋巴結(jié)組織，1/2送常規(guī)病理檢查，另1/2保存?zhèn)溆谩Ｈ≡噭┖蠬PV16/18陽性標(biāo)準(zhǔn)品，行FQ-PCR反應(yīng)，包括終2LlDNA模板、HPV16/18反應(yīng)混合液等。于60℃30s、95℃5s、94℃min、37℃5min擴增條件下，行40次反應(yīng)循環(huán)。對每一濃度標(biāo)準(zhǔn)品行測3次，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)本HPV檢測需組織勻漿，將裂解液50mlDNA置入其中，提取DNA，行PCR擴增。

1.2.2 端粒酶檢測方法 取勻漿組織50mg，將裂解液冰浴30min，按照12000轉(zhuǎn)離心20min，取上清液2m，以備檢測。接著，施加48ml效應(yīng)體系，涵蓋dNTP、生物素標(biāo)記引物等，于72℃90s、50℃30s、94℃5min、25℃30min條件下循環(huán)30次。擴增產(chǎn)物檢測：取擴增產(chǎn)物5ml、變性液20μI，于10min室溫變性下，施加雜交混合液100ml，在37℃微孔板上雜交持續(xù)3h后施加100ml雜交混合液，持續(xù)半小時后添入底物緩沖液，當(dāng)顯色停止效應(yīng)，測定吸光度值。

1.3觀察指標(biāo) 分析HPV、端粒酶，其中一項陽性則為淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計學(xué)軟件對上述資料進行數(shù)據(jù)分析，計量資料采用（x±s）表示，P<0.05時為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1宮頸癌、淋巴結(jié)組織HPV16/18檢測結(jié)果分析 宮頸癌組織HPV陽性59例，其中54例HPV16陽性，5例HPV18陽性；宮頸癌淋巴結(jié)中12例陽性，21例微轉(zhuǎn)移；對照組淋巴結(jié)HPV均呈陰性，三組差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

注：M與原發(fā)灶組比較，P<0.05；N與病理陰性淋巴結(jié)組比較，P<0.05

2.2 宮頸癌、淋巴結(jié)組織端粒酶活性表達分析 在宮頸癌組織64例中，58例端粒酶表達呈陽性；常規(guī)病檢轉(zhuǎn)移的13例淋巴結(jié)呈陽性；對照組宮頸癌淋巴結(jié)呈陰性，三組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。

注：M與原發(fā)灶組比較，P<0.05；N與病理陰性淋巴結(jié)組比較，P<0.05。

2.3淋巴結(jié)組織中端粒酶活性表達與HPV陽性相關(guān)性分析及宮頸癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移影響因素淋巴結(jié)端粒酶表達與HPV陽性呈正比例關(guān)系，見表3。

3討論

淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移屬于誘發(fā)宮頸癌轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵途徑，已成為宮頸癌預(yù)后與治療判斷的依據(jù)。據(jù)相關(guān)研究資料顯示，常規(guī)病理檢查證實未出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者術(shù)后可能還會誘發(fā)盆腔復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移，可能與癌細胞微轉(zhuǎn)移存在一定的關(guān)聯(lián)性[1]。在本文研究中，從分子水平出發(fā)，檢測宮頸癌淋巴結(jié)HPV與端粒酶，從而對微量癌細胞進行預(yù)測，補充了病理診斷的缺陷。

本文研究發(fā)現(xiàn)，HPV陽性患者轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)HPV全部呈陽性，病理陰性淋巴結(jié)HPV部分呈陽性，表明宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，其HPV亞型與原發(fā)灶一致，提示原發(fā)灶可轉(zhuǎn)移為淋巴結(jié)中癌細胞系，且淋巴結(jié)病理陽性HPV拷貝數(shù)較病理陰性患者高，與相關(guān)文獻報道吻合。究其根源，可能與癌細胞數(shù)量相關(guān)[2]。

有學(xué)者認(rèn)為，常規(guī)病理組織檢查癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)端粒酶表達相對較高[3]。在本研究中，宮頸癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中的端粒酶表達上升，良性女性疾病患者淋巴結(jié)未發(fā)現(xiàn)端粒酶活性，提示端粒酶活性表達可預(yù)測淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。究其根源，其與癌細胞數(shù)量、癌細胞增值程度相關(guān)。此外，端粒酶活性表達與HPV間呈正比例關(guān)系，轉(zhuǎn)移癌細胞中的HPV經(jīng)由癌基因刺激活端粒酶，致使癌細胞增值[4，5]。

綜上所述，宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中存在HPV與端粒酶活性表達，已成為宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的重要參考指標(biāo)，可對淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移進行預(yù)測，為預(yù)后與術(shù)后輔助治療判斷提供了可參考價值。

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