云南新平縣蚊蟲調查及乙型腦炎病毒帶毒率和抗體調查分析

摘要：目的 了解云南省新平縣流行性乙型腦炎流行狀況及其特征，為云南省乙腦的防治提供科學依據。方法 在觀察點采集蚊蟲進行乙腦病毒分離和鑒定。對觀察點正常人群采用酶聯免疫吸附試驗（ ELISA）檢測乙型腦炎IgG抗體。結果 三帶喙庫蚊屬于當地優勢蚊種，占蚊蟲捕獲總數的71.59%；共分離到2株乙腦病毒；正常人血清乙腦病毒抗體陽性率為74.7%，其中>16歲年齡組的陽性率最高，達到了95%，0歲～5歲年齡組與其他組人群乙腦病毒抗體水平差異具有統計學意義。結論 三帶喙庫蚊屬為當地優勢蚊屬，三帶喙庫蚊和中華按蚊均為攜帶和傳播乙型腦炎病毒的媒介，當地健康人群中存在較高的乙型腦炎病毒隱性感染現象。

關鍵詞：蚊類；流行性乙型腦炎；病毒的鑒定；血清學

流行性乙型腦炎（Japanese Encephalitis，JE），是由乙型腦炎病毒（Japanese Encephalitis virus，JEV）引起的一種人畜共患自然疫源性疾病，主要分布在亞洲，也是我國重要的傳染病之一，嚴重威脅人類特別是兒童的身體健康。該疾病多發生于蚊蟲較多的夏秋季節，其中三帶庫蚊為其主要傳播媒介。流行性乙型腦炎疫苗是預防和控制該病流行的最有效手段，通過監測環境中蚊蟲JEV帶毒情況和監測健康人群中JEV抗體水平的高低，能夠對當地JE發病和流行情況進行預警。新平縣位于云南省元江紅河流域中部，歷史上屬于云南省乙型腦炎流行地區，以往對該縣有關JE調查較少，2012～2013年，我們在該縣開展了蚊蟲、乙腦病毒檢測及健康人群乙腦抗體水平調查，現將調查分析結果報告如下。

1資料與方法

1.1現場調查點的選擇與蚊蟲采集 北緯24°～25°、東經105.5°～102°和海拔513m～1221m選擇2個自然村作為現場調查點。參照以往調查方法，在自然村的東西南北各選擇1戶人房和畜圈，自2012年10月～2013年8月間，每月連續2個夜晚（19：30～07：30）采用誘蚊燈通宵捕蚊，次日鑒定、登記。鑒定后的部分蚊蟲裝入1.8ml凍存管凍存于液氮罐中，帶回實驗室。

1.2蚊蟲乙型腦炎病毒檢測 參照乙型腦炎病毒檢測方法，從液氮罐中取出裝有三帶喙蚊和中華按蚊的凍存管，每組50～100只，將蚊蟲標本倒入預冷的無菌陶瓷研磨器中， 加維持液1.5ml， 研磨， 至無組織碎片； 分別按200 U/ml 和200 μg/ml 加入青霉素和鏈霉素， 混勻， 將全部液體移入Ep管中，然后放-80 ℃冰箱。參照以往的乙型腦炎病毒檢測方法，提取RNA，合成cDNA，進行病毒核酸RT-半套式PCR檢測等。

1.3健康人群乙型腦炎IgG抗體檢測 采用隨機抽樣的方法在兩個現場調查點按不同年齡和不同性別對健康人群采集靜脈血，其中，年齡組分為0～5歲、6～10歲、11～16歲、>16歲4個年齡組，每個年齡組40人，分離血清低溫保存，帶回實驗室進行JEV檢測。參照以往的方法，使用酶聯免疫吸附試驗（ ELISA）檢測JEV-IgG抗體水平。

1.4數據分析 實驗數據采用SPSS 20.0軟件進行χ2檢驗，當P<0.05時差異具有統計學意義。

2結果

2.1蚊蟲組成 共捕獲蚊類5屬21種，共6628只。經過鑒定，庫蚊屬（Culex）5種，按蚊屬（Anopheles）12種，伊蚊屬（Aedes）2種，阿蚊屬（Armigeres）和小蚊屬（Mimomyia）和各1種（表1）。從捕獲的蚊蟲種類和數量上看，三帶喙庫蚊和中華按蚊分別占此次調查捕獲蚊類總數的71.59%、17.56%，屬該縣優勢蚊種。

2.2蚊蟲JEV分離與鑒定 共對標本中的2屬2種24批2011只雌性成蚊進行了病毒分離，每批50～100只。結果從三帶喙庫蚊和中華按蚊中各分離到一株乙型腦炎病毒，蚊蟲標本總陽性率為8.33%，蚊體帶毒率0.10%。其中三帶喙庫蚊帶毒率為0.02%，中華按蚊帶毒率為0.09%。

2.3健康人群JEV-IgG抗體水平 共采集現場健康人群血清標本160份，11歲～16歲組血清標本因運輸途中保存不當丟失10份。如表2所示，共檢測健康人群血清標本150份，JEV-IgG抗體陽性112份，陽性率74%。其中各年齡組中陽性率最高的為6歲～10歲組和>16歲組，陽性率均超過90%，其次為11歲～16歲組。運用行成列表卡方檢驗，各年齡組之間陽性率差異具有統計學意義（χ2=58.188，P<0.01）。6歲～10歲組與>16歲組（χ2=0.721，P>0.05），無顯著統計學差異。將6歲～10歲組與>16歲組合并后與11～16歲組進行檢驗，（χ2=0.898，P>0.05），無顯著統計學差異，與0～5歲組進行檢驗，差異具有統計學意義（χ2=51.300，P<0.01）。

3討論

新平縣海拔低，氣溫較高，濕度大，雨量多，這些都有利于蚊蟲的生存和常年大量繁殖。本次調查也發現，該縣蚊蟲種類較多，且三帶喙庫蚊和中華按蚊的種群數量高，為當地優勢蚊蟲種群。這與云南其他縣市以往調查結果相似。

從蚊蟲JEV帶毒率調查結果來看，此次從新平縣采集的2011只三帶喙庫蚊和中華按蚊標本中檢測分離出了2株JEV，說明JEV能在該兩種蚊蟲中增殖發育。特別是三帶喙庫蚊，以往我國南方或云南從三帶喙庫蚊中分離到了大量的JEV。結合該蚊在云南分布廣、種群數量高等生物學習性，該蚊屬于我國南方和云南省JE主要媒介。對于中華按蚊與JE疾病關系，雖然該蚊在我國和云南屬于優勢蚊蟲種群，但有實驗認為該蚊JE感染閾高，病毒較難經唾液腺感染人體，是否是JEV媒介仍有待于進一步證實。

綜上所述，三帶喙庫蚊屬于新平縣JEV主要媒介，當地處于0歲～5歲年齡組人群的JE抗體水平較低， 提示應加強該類人群JE疫苗的接種， 保護兒童免受JE感染。

參考文獻：

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編輯/申磊