生發(fā)酊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

摘要：目的 對生發(fā)酊質(zhì)量控制指標(biāo)進行研究。方法 首先對生發(fā)酊中的補骨脂、何首烏、紅花、黃芪、丹參進行薄層色譜鑒別，同時以補骨脂素，異補骨脂素為指標(biāo)成分，應(yīng)用高效液相色譜法對其進行定量測定。結(jié)果 定性鑒別簡便易行；含量測定方法中同分異構(gòu)體補骨脂素、異補骨脂素分離較好，補骨脂素、異補骨脂素柱效比較理想，其理論塔板數(shù)>5000。此法分離效果好，重現(xiàn)性好、精密度高、加樣回收率令人滿意。結(jié)論 定性定量方法簡便、準(zhǔn)確，專屬性強，重現(xiàn)性好，能有效地控制該制劑的質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：生發(fā)酊，薄層色譜，高效液相色譜

生發(fā)酊為江蘇省中醫(yī)院自制制劑，主要由補骨脂、何首烏、紅花、黃芪、丹參等中藥組成，具有刺激毛發(fā)生長，治療斑禿的功效。經(jīng)我院皮膚科多年使用，療效確切。為了更好地控制其質(zhì)量，我們在原有氣相色譜法測定乙醇含量的基礎(chǔ)上，進一步采用薄層色譜鑒別等手段對其進行定性控制；同時以補骨脂素、異補骨脂素為指標(biāo)成分，應(yīng)用高效液相色譜法對其進行定量測定。

1實驗材料

1.1儀器 Agilent 1100 Series 高效液相色譜儀，G1314A VWD檢測器，G1311A泵，G1316A柱溫箱；美國Agilent公司。Discovery C18柱（美國）。Satarius BP1100十萬分之一電子分析天平（德國）。929薄層制板器（重慶市南岸貝爾德儀器技術(shù)廠）。

1.2樣品與試藥

1.2.1樣品 生發(fā)酊樣品：由江蘇省中醫(yī)院制劑部提供（批號061201，070402，070403）。

1.2.2試藥 對照藥材：補骨脂（121056-200503）、何首烏（120934-200507）、紅花（120907-200609）、黃芪（120974-200609）、丹參（120923-200610）均購于中國藥品生物制品檢定所。對照品：補骨脂素（0739-9907），異補骨脂素（11073-200309）均購于中國藥品生物制品檢定所（供含量測定用）。薄層層析用硅膠G（批號：060518）、薄層層析硅膠 GF254批號：（批號：040811）均由中國青島海洋化工集團公司出品（國家藥典委員會監(jiān)制）。甲醇為色譜純（德國Merck公司），其他試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1定性鑒別

2.1.1補骨脂的鑒別 取生發(fā)酊樣品適量，過濾，取濾液10 mL水浴蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液，同法制得補骨脂陰性樣品溶液；另取補骨脂對照藥材粉末1 g，加乙醇20 mL，超聲提取20 min，過濾，取濾液5 mL水浴蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法[1]試驗，分別吸取供試品溶液、對照藥材溶液，陰性樣品溶液各2～4 μL，點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯（4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%氫氧化鉀甲醇溶液，置紫外燈（365 nm）下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的兩個藍白色熒光斑點，而陰性樣品在相應(yīng)的位置無斑點。

2.1.2何首烏的鑒別 取2.1.1項下供試品溶液，同法制得何首烏陰性樣品溶液；取何首烏對照藥材粉末1g，同法制得對照藥材溶液。照薄層色譜法[1]試驗，分別吸取供試品溶液、對照藥材溶液，陰性樣品溶液各5 μL，點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（2∶3∶4∶0.5∶2）為展開劑展開，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點，而陰性樣品在相應(yīng)的位置無斑點。

2.1.3紅花的鑒別 取2.1.1項下供試品溶液，同法制得紅花陰性樣品溶液；另取本品紅花對照藥材粉末1 g，同法制得對照藥材溶液。照薄層色譜法[1]試驗，分別吸取供試品溶液、對照藥材溶液，陰性樣品溶液各5 μL，點于同一硅膠GF254薄層板上，以苯-冰醋酸-甲醇（35∶1∶4）為展開劑，展開，取出，晾干，噴10%硫酸乙醇溶液，在105℃下烘5 min，供試品色譜中在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上顯相同紫紅色斑點，而陰性樣品在相應(yīng)的位置無斑點。

2.1.4黃芪的鑒別 取生發(fā)酊樣品適量，過濾，取濾液20 mL水浴蒸干，殘渣加水溶解，移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，20 mL/次，合并正丁醇提取液，水浴蒸干，殘渣加正丁醇1 mL，使其溶解，作為供試品溶液；同法制得黃芪陰性樣品溶液；另取黃芪對照藥材粉末2 g，加乙醇20 mL，超聲提取20 min，過濾，濾液蒸干，同法制得對照藥材溶液。照薄層色譜法[1]試驗，分別吸取供試品溶液、對照藥材溶液，陰性樣品溶液各5 μL，點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇（10∶5）為展開劑，展開，取出，晾干，用10%硫酸乙醇顯色，在105℃加熱至斑點顯色清晰，在日光下檢視。供試品色譜中，在與對照品藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同棕褐色斑點斑點， 而陰性樣品在相應(yīng)的位置無斑點。

2.1.5丹參的鑒別 取樣品適量，過濾，取濾液20 mL水浴蒸干，殘渣加水溶解，移至分液漏斗中，用乙醚振搖提取2次，20 mL/次，合并乙醚提取液，水浴蒸干，殘渣加乙酸乙酯1ml，使其溶解，作為供試品溶液；同法制得丹參陰性樣品溶液；另取丹參對照藥材粉末2 g，加乙醇20 mL，超聲提取10 min，過濾，取濾液同法制得對照藥材溶液。照薄層色譜法[1]試驗，分別吸取供試品溶液、對照藥材溶液，陰性樣品溶液各5 μL，點于同一硅膠GF254薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯（19∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，日光下檢視，供試品色譜中，日光下檢視，在與對照品藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同暗紅色的斑點（見圖1E ），紫外燈下（254nm）檢視，在與對照品藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同亮綠色斑點，而陰性樣品在相應(yīng)的位置無斑點。

2.2補骨脂素，異補骨脂素的含量測定

2.2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水（43∶57）為流動相；檢測波長為245 nm。理論塔板數(shù)按補骨脂素，異補骨脂素計均>5000。

2.2.2對照品溶液的制備 分別精密稱取補骨脂素10.09 mg，異補骨脂素適量10.18 mg，至25 mL棕色容量瓶中，加色譜純甲醇稀釋至刻度，制成濃度分別為0.4036，0.4072 mg/mL的補骨脂素，異補骨脂素對照品溶液。

2.2.3供試品溶液的制備 精密吸取生發(fā)酊樣品5 mL，置10 mL棕色容量瓶中，加入色譜純甲醇定容，搖勻，用微孔濾膜過濾，即得供試品溶液。

2.2.4可行性試驗 取按相同制備工藝制成的缺補骨脂的制劑適量，照供試品溶液的制備項下方法制備陰性樣品溶液，分取供試品溶液、對照品溶液和陰性樣品溶液，按色譜條件項下，各進樣10 μL，結(jié)果顯示供試品溶液色譜峰中與相應(yīng)的補骨脂素，異補骨脂素對照品溶液色譜相一致，陰性樣品溶液色譜圖在補骨脂素，異補骨脂素出峰位置上無干擾。

2.2.5線性關(guān)系考察 分別精密吸取補骨脂素和異補骨脂素對照品溶液各20 mL，混勻，制成濃度分別為0.2018，0.2036 mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液儲備液。分別精密吸取儲備液1 mL、2 mL、4 mL、6 mL、8 mL、10～25 mL棕色容量瓶中，加色譜純甲醇定容作為混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別精密吸取10 μL進樣，測定峰面積，以進樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。補骨脂素的回歸方程：y=97.2562x+46.3029，r=0.99998；異補骨脂素的回歸方程：y=98.4403x+48.1403，r=0.99998。結(jié)果表明，補骨脂素在0.08072～0.8072 μg，異補骨脂素在0.08144～0.8144 μg范圍內(nèi)，進樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.2.6精密度試驗 分別吸取同一對照品溶液重復(fù)進樣6次，10 μL/次，進樣測定，測定峰面積，結(jié)果補骨脂素和異補骨脂素的RSD分別為0.55%和0.36%。表明本法精密度較好。

2.2.7穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液分別在0、1、3、5、7、9、12 h進樣測定，測定峰面積，結(jié)果補骨脂素和異補骨脂素的RSD分別為1.51%和1.94%。表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8重現(xiàn)性試驗 分別精密吸取同一批樣品6份，5 mL/份，按\"供試品溶液制備\"項下方法制備供試品溶液，測定峰面積，結(jié)果補骨脂素和異補骨脂素的RSD值分別為0.75%和0.90%。表明本法重現(xiàn)性較好。

2.2.9加樣回收試驗 取已知含量的樣品，分別準(zhǔn)確加入對照品適量（補骨脂素0.095 mg，異補骨脂素0.099mg），按\"供試品溶液制備\"項下方法制備供試品溶液，測定峰面積，計算回收率，結(jié)果補骨脂素和異補骨脂素的平均回收率分別為101.72%和101.16%，相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD%）分別為1.05%和1.06%。

3結(jié)論

3.1鑒別反應(yīng)中的補骨脂、何首烏、紅花、黃芪、丹參的薄層色譜鑒別均獲得了良好分離，這些鑒別反應(yīng)簡便易行，重現(xiàn)性好，可用于生發(fā)酊的質(zhì)量控制。

3.2采用高效液相色譜法對生發(fā)酊補骨脂素，異補骨脂素進行了含量測定，我們對兩種比例的流動相甲醇：水（55∶45）[2]；（43∶57）進行比較，結(jié)果以甲醇：水（43∶57）為流動相，被測組分（補骨脂素，異補骨脂素）與其他組分完全分離，此法分離效果好，重現(xiàn)性好、精密度高、加樣回收率令人滿意，用于生發(fā)酊的質(zhì)量控制，切實可行。

參考文獻：

[1]中國藥典[S].2005I年版.一部.附錄31.

[2]中國藥典[S].2005I年版.一部.129.

編輯/肖慧