非小細胞肺癌組織中GPC5和TNFR10的表達關系及意義

摘要：目的 通過對非小細胞肺癌組織中GPC5和TNFR10的表達關系及意義，旨在為NSCLC的診斷、惡性程度的判定及治療提供有效的理論依據。方法 取我院2011年1月～2012年6月手術切除的NSCLC標本96例，采用RT-PCR法檢測GPC5和TNFR10的mRNA水平。結果 實驗中內參GADPH在各檢測樣本中均持續陽性表達，提示樣本質量良好。結論 提高了實驗數據的可靠性，為臨床選擇更合適的治療方案提供依據。

關鍵詞：磷脂酰肌醇蛋白聚糖5；腫瘤壞死因子受體10；肺腺癌

1資料與方法

1.1一般資料 取我院2011年1月～2012年6月手術切除的NSCLC標本96例，其中男56例，女40例；年齡在24～73歲，>60歲58例，<38歲30例；腺癌61例，非腺癌35例；有淋巴結轉移者58例，無淋巴結轉移者38例；有吸煙史37例，無吸煙史61例；高、中、低分化癌分別為19例、32例和45例；臨床分期：I期16例，Ⅱ期42例，Ⅲ期30例，Ⅳ期8例。所有病例術前均未進行放療和化療。另取18例手術切除的良性病變肺組織作為對照，全部標本收集后立即于-80°C冰箱保存，全部標本均有病理確診。

1.2引物的設計與合成 由大連寶生物公司設計合成，見表1。

1.3方法

1.3.1總RNA的提取及cDNA的合成 按Trizol裂解抽提法進行總RNA的提取。通過測A260值檢測RNA濃度，測A260/280值檢測其純度。1%瓊脂糖凝膠電泳分析其完整性。按逆轉錄試劑盒提供的方法合成cDNA存放-20℃冰箱備用。

1.3.2 RT-PCR擴增 25ul體系 PCR reaction mixture12.5 uL，上、下游引物（10 pmol/uL）各1 uL，cDNA模板1 uL，ddH2O 25uL。反應條件：95℃預變性3 min，95℃ 45 s，58℃ 30 s，72℃ 45 s，共30個循環；72℃終延伸5 min。

1.3.3數據收集處理和分析 統計結果用灰度值表示，以GADPH灰度值為參照，標化計算各樣本數據進行半定量分析，從而獲得各目的基因的相對模板數，即：目的基因/GADPH。

1.4統計學方法 采用SPSS 13.0軟件進行統計分析。……