鼠樹突狀細胞體外培養及鑒定

摘要：目的 探尋鼠骨髓來源樹突狀細胞體外培養的方法并進行鑒定。方法 體外誘導鼠骨髓細胞分化為樹突狀細胞，觀察形態學變化，分析細胞特異性標志物，同時進行誘導同種異體混合淋巴細胞發生增值能力的檢測。結果 培養216 h后樹突狀細胞高倍鏡下可見典型的樹突樣特點。成熟樹突樣細胞cd11c、mchII、cd86表達水平較高，可誘導同種異體混合淋巴細胞發生增值。結論 本方法為研究樹突狀細胞的功能以及運用提供材料。

關鍵詞：樹突狀細胞；培養；鑒定

樹突狀細胞（dendritic cell，DC）是目前所知的功能最強的抗原提呈細胞，是由加拿大學者Steinman于1973年發現的，因其成熟時伸出許多樹突樣或偽足樣突起而得名。它能高效地攝取、加工處理和遞呈抗原，未成熟DC具有較強的遷移能力，成熟DC能有效激活初始型T細胞，處于啟動、調控、并維持免疫應答的中心環節。本研究從小鼠骨髓中誘導培養出樹突狀細胞，并對其生物學特性進行分析鑒定，為優化DC的體外培養方法進行積極探索，從而為進一步研究其性能奠定了基礎[1]。

1資料與方法

1.1一般資料 雄性健康6～8 w齡balb/c小鼠、KM小鼠，購自第三軍醫大學實驗動物中心[2]。

1.2主要試劑 重組小鼠白細胞介素4（rmIL-4）和重組小鼠粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子（rmGM-CSF）（購自日本MBL公司）。脂多糖（LPS）（購自SANTA公司），熒光抗體PE-Cy5 anti-mouse CD11c、PE anti-mouse MHCII、PE anti-mouse CD86、CD80、（均購置美國Abcam公司）。RPMI1640培養液、胎牛血清（FBS）（購自美國RD公司）

1.3方法

1.3.1鼠骨髓來源樹突狀細胞的分離培養 將細胞因子rmGM-CSF（10 ng/mL）和rmIL-4（10 ng/mL）與FBS、 RPMI1640培養液充分混合，形成全營養培養液，于4℃環境保存。……