試管法和卡式微柱凝膠法檢測孕婦血清IgG抗AB效價的比較分析

摘要：目的 探討試管抗人球蛋白法和卡式微柱凝膠法檢測孕婦IgG抗A（B）效價比較。方法 選擇163例丈夫?yàn)锳型或B型 的O型孕婦血清經(jīng)巰基乙醇（2-Me）中和后，分別用試管抗人球蛋白法（試管法）和卡式微柱凝集法（卡式法）檢測IgG抗A（B）效價。結(jié)果 試管法和卡式法檢測孕婦IgG抗A（B）效價結(jié)果比較，差異有顯著性意義（P<0.05），163 例O型孕婦中，卡式法檢測的IgG 抗A（B）≥1∶64為69.9%，顯著高于試管法檢測的結(jié)果35.5%。結(jié)論 卡式法檢測孕婦抗體效價簡單、快捷，其靈敏度遠(yuǎn)高于試管法，應(yīng)根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)方法確定相應(yīng)的參考值。

關(guān)鍵詞：新生兒ABO溶血；抗體效價；卡式微柱疑膠

新生兒溶血病（HDN）系指母、子血型不合，母體由于免疫刺激產(chǎn)生了抗胎兒紅細(xì)胞抗原的抗體，致使胎兒紅細(xì)胞壽命縮短或破壞的疾病。有報道ABO溶血病占新生兒溶血的85.3%，Rh溶血病占14.6%，MN溶血病0.1%。ABO血型不合中約1/5發(fā)病，Rh血型不合者約1/20發(fā)病[1]。ABO溶血主要發(fā)生在第一胎，胎兒從父親遺傳基因繼承了A或B抗原而母親不含有相應(yīng)的抗原者，由于O型孕婦IgG類抗體效價比其它血型高，因此O型孕婦和非O型胎兒更容易發(fā)生新生兒溶血病，臨床主要表現(xiàn)為黃疸、貧血或伴心力衰竭。由于只有IgG類抗體才能通過胎盤進(jìn)入胎兒血液循環(huán)，引起新生兒溶血病，因此孕婦血清IgG抗A（B）效價檢測可為HDN預(yù)防、診斷以及治療提供有價值的依據(jù)。當(dāng)孕婦血清中IgG抗A（B）效價≥64時，胎兒有可能發(fā)生HDN，當(dāng)測定效價≥128時，胎兒發(fā)生HDN的可能性更大。由于血清中同時存在IgM類天然抗體及IgG類免疫性抗體，因此需用二巰基乙醇（2-Me）中和掉IgM抗體后，再檢測IgG抗體的效價。本文主要用二巰基乙醇（2-Me）中和掉IgM抗體后，分別用試管法和卡式法檢測IgG抗A（B）效價，并進(jìn)行比較，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料 2008～2012年在本院產(chǎn)科門診做產(chǎn)前檢查孕婦163例，丈夫?yàn)锳型或B型，孕婦為O型，所有受檢者均無輸血史。

1.2儀器及試劑 2-Me、抗人球蛋白試劑由上海市血液中心提供；微柱凝膠卡由瑞士達(dá)亞美公司提供；日本久保田KA2200血庫專用離心機(jī)和達(dá)亞美專用離心機(jī)；A、B、O型各十人份獻(xiàn)血員紅細(xì)胞混合并洗滌分別配制成3～5%的A型、B型、O型懸浮紅細(xì)胞。

1.3方法 檢測丈夫血型為A型或B型，孕婦為O型后，將抽取的不抗凝孕婦血液標(biāo)本37℃孵育30 min，待血清析出后用久保田KA2200離心機(jī)以3000 g離心力離心5 min，分離出血清備用。取分離出的300 μL血清與300 μL二巰基乙醇于小試管內(nèi)混合并輕輕震蕩搖勻，加塞靜置室溫30 min。中和完成后的血清用生理鹽水倍比稀釋，每管300 μL，稀釋至第10管（中和后的血清未倍比稀釋時稀釋度為1∶2）。然后根據(jù)實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程分別檢測殘留的IgM抗體效價、試管法IgG抗體效價以及卡式法IgG抗體效價。

1.4結(jié)果判斷 IgG抗體效價>IgM效價二管（4倍）或以上時，結(jié)果有效。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件，對兩種方法檢測結(jié)果采用配對t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

試管法與卡式法檢測IgG抗體效價的比較，見表1。

3討論

HDN是因母體內(nèi)存在與其胎兒血型不合的IgG類免疫性抗體引起的新生兒或胎兒溶血的同種免疫性疾病，是新生兒病理性黃疸最常見的原因之一。對夫婦ABO血型不合且血清中IgG類抗A（B）效價≥64的孕婦，胎兒出生后應(yīng)盡早進(jìn)行ABO抗體游離及放散實(shí)驗(yàn)檢查，確認(rèn)新生兒是否存在ABO溶血，為臨床醫(yī)生盡早治療提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。IgG抗體是唯一能夠通過胎盤并致新生兒溶血的抗體，因此孕婦ABO抗體效價指的是IgG抗A（B）效價，而孕婦血清中的抗A（B）抗體同時含有IgM及IgG抗體，因此要單獨(dú)測定IgG抗A（B）必須先去除IgM抗A（B）的干擾。IgM分子由5個軸射狀排列的亞單基組成，亞基間以二硫鍵相連，亞基間的二硫鍵比亞基內(nèi)鏈間與鏈內(nèi)二硫鍵容易被巰基試劑破壞，經(jīng)巰基試劑處理后，IgM失去原來的血清學(xué)性質(zhì)[2]。使用0.2mol/L的2-Me 37℃水浴10 min處理血清結(jié)果較理想，既能有效滅活I(lǐng)gM，又能保持IgG較高效價，有利于IgG抗A（B）的檢出，并且有效地縮短了操作時間[3]。妊娠期間動態(tài)監(jiān)測孕婦血清中IgG抗A（B）效價的變化，有異常者配以中西醫(yī)治療，可以有效地預(yù)防和減少HDN的發(fā)生[4]。試管抗人球蛋白法作為一種經(jīng)典的IgG抗體檢測技術(shù)，為免疫性抗體的檢測技術(shù)的發(fā)展奠定了堅實(shí)基礎(chǔ)，但該實(shí)驗(yàn)要求操作人員有豐富的臨床實(shí)驗(yàn)操作經(jīng)驗(yàn)且實(shí)驗(yàn)操作步驟煩瑣，目前不完全抗體的檢測技術(shù)也取得了重大突破，卡式微柱凝膠法抗體檢測技術(shù)以靈敏度高、特異性強(qiáng)、影響因素小、可重復(fù)性強(qiáng)、操作簡便以及結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一，在臨床免疫性抗體檢測中廣泛使用。

卡式微柱凝膠檢測技術(shù)把凝膠技術(shù)同免疫血清技術(shù)很好地結(jié)合起來， 凝膠間隙僅允許單個紅細(xì)胞通過，利用IgG 致敏紅細(xì)胞和微柱內(nèi)的抗人球蛋白結(jié)合，離心后致敏的紅細(xì)胞不能穿過凝膠間隙到達(dá)微柱底部；而未被IgG致敏的紅細(xì)胞不與抗人球蛋白結(jié)合而從凝膠微粒間隙通過， 最后被離心到微柱底部。由于離心時只有紅細(xì)胞與微柱內(nèi)的抗人球蛋白接觸而未結(jié)合紅細(xì)胞的抗體不會與其接觸， 故微柱凝膠法離心前不需洗滌去除游離抗體。本次實(shí)驗(yàn)采用試管抗人球蛋白法和卡式微柱凝膠體法檢測IgG抗A（B）效價并進(jìn)行比較，結(jié)果差異有顯著性意義（P<0.05），163 例O型孕婦中，試管法檢測的IgG抗A（B）≥1∶64占35.0%，卡式微柱凝膠法檢測的IgG 抗A（B）≥1∶64占69.9%，顯著高于試管抗法檢測的結(jié)果，說明卡式法檢測的靈敏度顯著高于試管法，因此卡式法檢測IgG抗A（B）效價應(yīng)該設(shè)立新的參考值，防止醫(yī)生過高估計新生兒溶血病的嚴(yán)重程度，對新生兒ABO溶血的預(yù)防及治療具有重要的指導(dǎo)意義。

參考文獻(xiàn)：

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編輯/張燕