乙肝表面抗體定性和定量兩種檢測方法相關性分析

摘要：目的 通過分析比較兩種檢測方法（ELISA法定性與電化學發光法定量）檢測乙肝表面抗體（抗-HBs）的結果差異，探討測定乙肝表面抗體（抗-HBs）的濃度值與定性檢測結果s/co值之間的關系及對臨床工作的指導意義。方法 用ELISA法定性與電化學發光法定量分別對96份標本進行檢測分析。結果 電化學發光法結果在<10mIU/ ml和大于100mIU/ml的標本ELISA基本能準確判定為陰性或陽性，但在10～100mIU/ml之間的標本，36例僅有26例顯示陽性，有10例則顯陰性，陽性符合率僅達72.2%，96例標本中用電化學發光法檢測陽性率為68.8%，而用ELISA法檢測僅為59.3%，陽性率差異顯著。結論 電化學發光法作為一種高靈敏、高特異、高準確的檢測方法在測定乙肝表面抗體值得大力推廣應用，在指導乙肝疫苗接種工作方面具有重要意義。

關鍵詞：乙肝表面抗體（HBsAb）；酶聯免疫吸附法（ELISA）；電化學發光法

乙肝表面抗體（HBsAb）是對乙肝病毒免疫的保護性抗體。它的陽性表明既往感染過乙肝病毒，但已經排除病毒，或者接種過乙肝疫苗，產生了保護性抗體。血清中乙肝表面抗體滴度越高，保護力越強。我國人口多乙型肝炎病毒感染數量多，人群發病率較高，據統計乙型肝炎病毒的攜帶率可達15%左右[1]。而乙肝疫苗的主動免疫是預防乙肝的最有效途徑。只有HBsAg在血中保持一定的含量，機體才能有能力抵抗乙肝病毒的入侵。酶聯免疫吸附法（ELISA）因其簡便、 快速、費用較低成為目前檢測HBV標志物最常用的方法，但其具有無法定量的缺點[2]。近年來，由于檢驗技術的不斷發展，電化學發光法成為定量檢測乙肝抗體的方法之一，但其具有檢測時間較長、費用較高的缺點。本文分別采用定性和定量兩種方法對乙肝表面抗體進行檢測，并分析其相關性。

1資料與方法

1.1一般資料 96名，均為2013年8月～10月在我院進行體檢的健康人群，所有人均空腹抽取靜脈血并及時分離血清，分別用ELISA法定性和電化學發光法定量檢測乙肝表面抗體。

1.2儀器 ELISA法儀器為KC-100酶標儀（深圳凱特生物醫療電子科技有限公司）；電化學發光儀器為羅氏E601電化學發光分析儀。

1.3試劑 ELISA法試劑為上海科華生物工程有限公司生產。電化學發光法試劑為羅氏公司生產。

1.4方法及操作 ELISA法：每孔加入待測樣本50？滋L，設陰陽對照各2孔，每孔加入陰性對照（或陽性對照）各50？滋L（或1滴），并設空白對照1孔。每孔加入酶結合物50？滋L，充分混勻，封板，置37℃孵育30min。手工洗板：棄去孔內液體，用洗滌液注滿各孔，靜置5s，甩干，重復5次后拍干。每孔加顯色劑A液、顯色劑B液各50？滋L，充分混勻，封板，置37℃孵育15min。每孔加入終止液50？滋L，混勻。用酶標儀讀數，取波長450nm，讀取各孔OD值。

電化學發光法：采用磁性微顆粒兩步法電化學發光分析技術。

1.5結果判定 ELISA法： cut off value（cov）= 陰性對照平均OD值×2.1，樣品OD值小于cov值時，說明該抗體檢測結果為陰性； 樣品OD值大于等于cov值時，說明該抗體檢測結果為陽性。電化學發光法定量檢測HBsAb滴度大于10mIU/ml為陽性，檢測HBsAb滴度大于100mIU/ml為有效免疫。

1.6統計方法 SPSS17.0對2種方法檢測結果進行χ2檢驗。

2結果

兩法陽性率比較ELISA法以s/co≥1.0為陽性， 化學發光法>10mIU/ml判為陽性。 兩種方法對乙肝表面抗體的對比檢測結果分別見表1，表2。

由表1 、表2可以看出，HBsAb濃度值小于10mIU/ml和大于100mIU/ml時，電化學發光法和ELISA法檢測結果相近，用ELISA法基本能準確判定陽性和陰性。但在10～100mIU/ml之間的標本電化學發光法共檢測的36例陽性樣本，ELISA法只有26例是陽性。以10～50mIU/ml區段尤為顯著。整體來看電化學發光法檢出陽性率為68.8%，ELISA法檢測陽性率為59.3%。2種方法檢測差異顯著，有統計學意義（P<0.05）。

3 討論

在我國乙肝的感染率較高，由于HBsAb是一種保護性抗體，一旦人體受到隱性感染或經急性感染乙肝病毒并清除后，會產生HBsAb。若人群接種乙肝疫苗后，機體也可產生HBsAb。人體內的較高濃度的HBsAb可有效清除機體感染的乙肝病毒。同時乙型肝炎又與肝癌的發生有密切的關系，因此，為防止乙肝的蔓延，要想達到控制乙型肝炎的的目的，就應該采用減少易感人群的方式。據相關資料報道，HBsAb含量在10mIU/ml以上的人群并不都具有較強的免疫力。HBsAb含量在10-100mIU/ml之間的人群對乙型肝炎的免疫力相對較弱，甚至不能預防乙肝病毒的感染。相關資料表明只有HBsAb的含量大于100mIU/ml時，才具有抵抗乙肝病毒入侵的能力。但也有研究者認為大于10mIU/ml可以用于個體免疫力強弱的評價[3]。

正是由于乙肝抗體定量檢測的重要性，現在，很多實驗室都開展了該項目的檢測，它不僅能夠判斷是否需要接種乙肝疫苗還能對疫苗接種后的效果進行評估。

目前，測定乙肝表面抗體的方法很多，以ELISA法和電化學發光或化學發光法較為常用[4]。大多數二級以下及基層醫院多使用ELISA法。其檢測方便、成本較低。ELISA法在檢測HBsAb過程中不僅酶標板的孔間存在差異，而且在操作中需要進行游離抗原或抗體的分離，需要反復洗板，導致方法的變異系數增大，增加了檢驗的誤差。同時由于受方法學影響其檢測靈敏度相對較低；極易造成漏檢和假陰假陽性。

電化學發光法標記免疫技術與傳統的ELISA法相比，檢測原理存在差異，前者是液相磁珠包被，后者采用固相微板包被，提高了反應的接觸面積，同時其檢測方法為定量檢測，提高了靈敏度，避免了大量低值樣本的漏檢。同時其具有重復性好、靈敏度高、準確性佳、特異性強、檢測快速、無放射性危害等優點[5]，因此廣泛應用于臨床。雖然電化學發光法成本較高，但其針對一些可疑低值的樣本，電化學發光法大大提高了檢測的準確性，彌補了ELISA方法檢測的不足。

參考文獻：

[1] 陳慧英，張錦鋒，岑小鵬，等.ELISA檢測乙型肝炎HBsAg室內質控血清的試劑和使用[J].上海醫學檢驗雜志，2000（4）：203-205.

[2] 藺乘艷，姜莉.ELISA與TRFIA法檢測乙肝表面抗體的對比分析及應用[J].國際檢驗醫學雜志， 2011，32（2）： 254.

[3] 袁漢堯.臨床檢驗診斷學[M].廣州：廣東科技出版社，2002：245-258.

[4] 劉邦君，吳紅玲.ELISA法與化學發光法檢測乙肝表面抗體的結果比較[J].醫學信息，2013，26（4）：136.

[5] 葉應嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗操作規程[M].第3版.南京：東南大學出版社，2006：619.

編輯/王海靜