ALISEI全自動酶標儀性能評價

摘要：目的 對ALISEI酶標儀的性能進行評價。方法 參考NCCLS EP5文件[1]，以重鉻酸鉀為測試物，于波長450 nm處，分別通過零點漂移實驗、加樣精度實驗、孔間差實驗、通道差實驗、精密度實驗、線性實驗、交叉污染實驗及洗板殘液量實驗對酶標儀的加樣系統、讀板系統和洗板系統進行評價。結果 ALISEI全自動酶標儀零點漂移為±0.001；加樣精度變異系數為0.43%，<1%，符合儀器標準；孔間差為±0.0032；通道差為0.009；高、中、低值樣本的批內不密度分別為0.31%、0.24%、0.63%；批間不精密度分別為0.85%、0.49%、0.62%；日間不精密度分別為1.03%、0.49%、0.63%；總不精密度分別為1.105%、0.613%、0.701%；線性實驗得到回歸方程為Y=0.004+0.836X，相關系數r=0.9991；交叉污染率為0.86%；洗板殘液量平均每孔為0.0125～0.25 uL。結論 ALISEI全自動酶標儀加樣系統、讀板系統、洗板系統性能優良，且操作簡便，較適合臨床實驗室ELISA試驗的自動化。

關鍵詞：全自動酶標儀；性能評價

隨著免疫學檢測新技術的不斷發展，臨床免疫檢驗手段逐漸從手工操作向全自動檢測過渡，酶標儀在臨床實驗室中的應用越來越普及，使得ELISA法整個操作過程更加標準化、規范化、自動化，減少了操作過程中認為因素的誤差。筆者對意大利SEAC公司的ALISEI全自動酶標儀從加樣系統、讀板系統、洗板系統及交叉污染等方面進行了評價，現報告如下。

1資料與方法

1.1儀器 ALISEI全自動酶標儀，意大利SEAC公司生產；TG328B電光分析天平，上海天平儀器廠生產，感量0.1mg。

1.2主要材料 U型酶標微孔板條（北京萬泰公司）；重鉻酸鉀（分析純，天津化學試劑廠）；自配0.2 mol/L硫酸；用硫酸配置濃度為0.015%、0.030%、0.060%、0.075%、0.090%共5個濃度的重鉻酸鉀溶液待用。

1.3評價指標及方法

1.3.1零點漂移實驗 取8只微孔杯分別置于8個通道的相應位置，分別加入200 uL蒸餾水，調至零點，于450 nm處測定1次/30 min，連續測定4 h，其偏于零點的差值即為零點漂移。

1.3.2加樣精度實驗 分離單個板孔，于酶標儀上只進行加樣操作，每孔加入蒸餾水100 uL，用分析天平稱量加樣前后板孔的重量，純水稱重法計算實際加樣量，并計算 、S、CV%，同時分析儀器的加樣精度。

1.3.3孔間差實驗[2] 選擇同一批號酶標微孔板條（8×12，共96孔），分離單個板孔，分別加入濃度為0.075%的重鉻酸鉀溶液，依次置于同一通道，以蒸餾水調零，于450nm處檢測，其誤差大小用±1.96S表示。

1.3.4通道差實驗[2] 酶標儀的測量通道有8、12、96之分，ALISEI酶標儀為8通道。分離一個微孔杯，加入200 uL濃度為0.075%的重鉻酸鉀溶液，先后置于8個通道的相應位置，以蒸餾水調零，于450 nm處進行測定，各通道間的差用極差（最大值-最小值）來表示。

1.3.5精密度實驗[3] 分離單個板孔，每個通道放置3只微孔杯，分別加入高、中、低3種濃度的重鉻酸鉀溶液，蒸餾水調零，于450 nm處做雙份平行測定，每天做2批，批間相隔時間≥2 h，連續測定20 d，分別計算批內、批間、日間和總不精密度（CV%）。

1.3.6線性實驗 于450 nm處，以蒸餾水調零，分別測定5個系列濃度的重鉻酸鉀溶液，每個濃度測定4次，且必須在當日內完成，計算回歸方程及相關系數。

1.3.7交叉污染實驗 采用Bioughton法測定，即用高低2個濃度的血清，先測定高值樣本3次（H1、H2、H3），再測定低值樣本3次（L1、L2、L3），計算污染率=（L1-L3）/（H3-H1）×100%。

1.3.8洗板殘液量實驗 取8孔微孔板條12條，放置于洗板機上，用蒸餾水洗板，用分析天平測量洗板前后板條的重量，用純水稱重法計算平均每孔的洗板殘液量。

2結果

2.1零點漂移 8個通道的零點漂移值均在±0.001內。

2.2加樣精度實驗 加樣100 uL前后單個板孔的比較，x=98.79，s=0.4291，CV=0.43%，符合儀器標準。

2.3孔間差實驗 孔間差為±0.0032。

2.4通道差實驗 一束光在各個通道均能給出同樣的吸光度為理想狀態，該儀器通道差很小，僅為0.009，可以保證各個通道結果的準確性。

3討論

通過對ALISEI酶標儀的加樣系統、讀板系統、洗板系統各的測評，各指標評價結果皆符合儀器的設計性能，結果比較滿意。筆者僅僅對于450 nm這個ELISA法常用的波長下各指標進行了評價，其它波長，如490 nm應該用甲基橙溶液來測試，620 nm應該用伊文思藍溶液來測試，測試方法相同。

ALISEI作為第三代酶標儀，同手工方法相比有了很大程度的提高，其標本加注量為7～300 uL（步進1ul），試劑加注量10～300 uL（步進1 uL），且有其獨特的三波長讀板模式，吸光度最大達9.0，有效的去除了雜散光及微孔板劃痕的干擾，并解決了部分高濃度樣本的\"前帶現象\"；溫育系統有6個獨立的孵育位置，溫度獨立控制，可單獨孵育，并且無需機械抓板系統，在原加樣位置孵育，減少了機械磨損及交叉污染率。

綜上所述，ALISEI酶標儀各系統性能優良，較適合臨床實驗室使用，是ELISA試驗自動化操作的較理想的全自動儀器。

參考文獻：

[1]楊昌國，許葉，張抗.精密度評價和方法比較中NCCLS評價方案的應用[J].臨床檢驗雜志，1999，17（1）：47-50.

[2]成軍，孫關忠，鄭懷競，等.酶標儀性能評價與鑒定的基本方法及其初步應用[J].中華醫學檢驗雜志，1998，21（1）：50-51.

[3]馮仁豐.臨床檢驗質量管理技術基礎[M].上海：上海科學技術出版社出版，2003：32-50.

編輯/張燕