結核分枝桿菌MPB64抗原的制備與純化

摘要：根據GenBank結核分枝桿菌基因序列設計引物擴增出MPB64基因，連接至原核表達載體pET32a（+），轉化至大腸桿菌BL21（DE3），經過IPTG誘導后，進行SDS-PAGE和Western-blot分析。結果表明，克隆的MPB64基因同源率為98.36%，重組蛋白以可溶形式在細胞周質中表達，大小為24KDa。采用切膠回收水平電泳洗脫純化出的MPB64具有反應原性。為進一步研究結核快速診斷試劑奠定了基礎。

關鍵詞：牛分枝桿菌；MPB64；原核表達；切膠純化

結核病（Tuberculosis）是由結核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis TB）引起的一種嚴重危害人民健康的慢性傳染病，世界衛生組織（World Health Organization，WHO）2012年的數據顯示，世界總共有880萬的結核病患者，相當于每10萬人中就有138個結核病患者，我國2010年結核病死亡人數54000，新發現結核患者869092，復發人數54216，新患者中出現MDR-TB人數為49000，再次感染的患者出現MDR-TB人數為14000，結核患者中得HIV的人數為145919，HIV患者中出現結核的人數為65412，相對于2006年后呈現逐漸增加的趨勢，每年用于結核的治療費用也從2006年開始遞增，2011年已經花費285百萬美元，預計2012年將花費350百萬美元。

結核菌素試驗作為最古老的免疫學試驗方法之一，仍然在使用，對于牛分枝桿菌的特異性抗原的篩選，仍然是診斷中的重點。MPB64抗原是牛分枝桿菌的分泌性抗原，表現為較強的遲發型超敏反應，并可誘導產生和釋放γ干擾素，且MPB64抗原對活動的牛結核的特異性為100%，敏感性為98.1%[1]，并且發現部分卡介苗菌株缺MPB64基因[2]，若此用其做皮試，可區分已患病、隱性感染未發病和己接種卡介苗的個體，故MPB64可能是最具有潛在應用價值的診斷試劑。

1資料與方法

1.1菌株與質粒 E.coli BL21（DE3）由本實驗室保存，表達載體pET32a（+），以及牛結核分枝桿菌DNA基因組由寧夏大學西部特色生物資源保護與利用教育部重點實驗室提供。……