宮頸上皮內腫瘤及宮頸鱗狀細胞癌組織中HPV16感染與hTERT、ki67表達的關系

摘要：目的 探討宮頸上皮內腫瘤及宮頸鱗狀細胞癌組織中HPV16感染與hTERT、ki67表達的關系。方法 以我院129例宮頸病變患者及30例正?；颊叩膶m頸組織為標本，運用原位雜交、組織芯片及免疫組化等方法技術檢測HPV感染和hTERT、ki67的表達情況。結果 除CINⅠ以外，其他HPV16陽性率均比正常宮頸組織高，差異有統計學意義（P<0.05）。CINⅡ、CINⅢ、原位癌、宮頸浸潤鱗癌的hTERT表達與Ki67表達與正常宮頸組織相比有統計學意義（P<0.05）。浸潤鱗癌的hTERT表達顯著比原位癌高，差異具有顯著統計學意義（P<0.01）。浸潤鱗癌、原位癌的Ki67表達比正常宮頸組織中的檢測值高，差異具有統計學意義（P<0.05）。HPV16感染與hTERT表達呈顯著正相關關系（r=0.335，P<0.01），而與Ki67表達無相關性（r=-0.037，P=0.675>0.05）。hTERT與Ki67表達存在顯著正相關關系（r=0.394，P<0.01）。結論 HPV16感染后組織中hTERT、ki67表達發生改變，導致CIN的發生并逐步發展為SCC。通過hTERT、ki67指標檢測有助于宮頸鱗癌和宮頸癌前病變的診斷。

關鍵詞：宮頸上皮內腫瘤；宮頸鱗狀細胞癌；HPV16；hTERT；ki67

宮頸上皮內腫瘤（CIN）是女性宮頸癌前病變，最終可導致宮頸鱗狀細胞癌（SCC）的發生。目前對CIN到SCC的演變研究較多，對其二者發生、發展過程中伴隨的組織標記物表達的水平研究也取得一定成功。本研究主要探討宮頸上皮內腫瘤及宮頸鱗狀細胞癌組織中HPV16感染與hTERT、ki67表達的關系，以我院病理科提供的159份宮頸組織石蠟標本最為材料，現報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 以我院病理科提供的129份病變宮頸組織及30份正常宮頸組織石蠟標本作為研究材料。129份病理組織中，CINⅠ27份，CINⅡ25份，CINⅢ21份，原位癌7份以及浸潤癌49份。所有病理標本全部經備份HE染色病理學觀察后確診并分級。

1.2方法 組織芯片：所有病理切片HE染色后進行目標組織標記，然后對受體石蠟標本進行微陣列設計和打孔。隨后將目標組織放入受體石蠟陣列中，進行4um切片裱褙在APES處理的破片上。免疫組化：病理切片經脫蠟、水化、抗原修復后加適量雙氧水，然后加入抗體，最后加增強劑和酶標，觀察顯色。原位雜交：經內源性過氧化物酶滅活，標記探針變性后立即冰凍。按探針1：9和雜交液混合后滴加在標本上，經烘烤使RNA變性后分別按SSC2倍、SSC0.5倍、SSC0.2倍進行充分洗滌，然后在37℃下30min后加Strep-AP，30min后NBT/BCIP顯色。

1.3結果判定 高倍鏡下選定每個組織3個野觀察，每視野共計計數200個細胞。HPV感染陽性以所觀察細胞的細胞核出現紫藍色為陽性。hTERT、Ki67陽性以細胞核現棕黃色為標準。其中以大于50.00%為（3+），25.00%～50.00%為（2+），10.00%～25.00%為（1+），小于10.00%為（-）。

1.4統計學方法 將所有觀察數據錄入統計學分析軟件SPSS19.0進行數據處理與分析。計數資料的比較差異χ2檢驗，以P<0.05為差異具有統計學意義。相關性分析采用Speaman等級相關分析，以P<0.05為具有相關性。

2 結果

經統計學分析發現，除CINⅠ以外，其他HPV16陽性率均比正常宮頸組織高，差異有統計學意義（P<0.05）。hTERT表達與Ki67表達情況分析發現，CINⅡ、CINⅢ、原位癌、宮頸浸潤鱗癌上述兩種標記物檢查均與正常宮頸組織有統計學意義（P<0.05）。此外，浸潤鱗癌的hTERT表達顯著比原位癌高，差異具有顯著統計學意義（P<0.01）。還有浸潤鱗癌、原位癌的Ki67表達也比正常宮頸組織中的檢測值高，差異具有統計學意義（P<0.05），見表1。

HPV16感染與Ki67、hTERT表達的相關性分析結果發現，HPV16感染與hTERT表達呈顯著正相關關系（r=0.335，P<0.01），而與Ki67表達無相關性（r=-0.037，P=0.675>0.05），見表2。而hTERT與Ki67表達的關系分析結果顯示，二者之間有顯著統計學意義（χ2=33.743，P<0.01），相關性分析結果顯示二者之間存在顯著正相關關系（r=0.394，P<0.01）。

3 討論

HPV感染可能與CIN的發生有著密切的關聯性[1]。其中HPV16感染可能與SCC的發生關系最為密切。目前，對HPV感染后組織中Ki67、hTERT表達情況的研究較多。主要認為，HPV編碼的蛋白產物E6蛋白，通過myc與Sp1 cis 元件激活端粒酶[2]，而端粒酶激活與宮頸癌變早期有密切關系，且后期端粒酶表達更強，因而預示著CIN與SCC的病變過程與端粒酶的激活有關系。同時，hTERT的表達與端粒酶最終在組織中的活性相關。因此可以認為，端粒酶的激活與誘導宮頸組織細胞發生變化有聯系。而Ki67作為衡量細胞增生程度的可靠指標，通過Ki67表達水平的檢測，能有效判斷細胞的癌變進展情況。

本研究結果顯示，CIN和SCC組織與HPV16陽性率比較普片高于正常宮頸組織，CINⅡ、CINⅢ、原位癌、宮頸浸潤鱗癌Ki67、hTERT表達水平也與正常宮頸組織有統計學差異。說明通過Ki67、hTERT表達水平的檢測有助于判斷患者HPV16感染后宮頸細胞的變化，對宮頸組織從CIN到SCC的演變也有一定的推斷意義和價值。

參考文獻：

[1]Wolf JK， Ramirez PT. The molecular biology of cervical cancer[J].Cancer Invest igation，2001，19 （6）：621-629.

[2]Oh ST， Kyo S， Laimins LA. Telomerase activation by human papillomavirus type 16 E6 prot ein： induction of human telomerase reverse transcriptase expression through Myc and GC-rich Sp1 binding sites[J].J Virol，2001，75：5559-5566.編輯/王敏