Ki—67、VEGF、Her—2在乳腺癌中的表達及其臨床意義

摘要：目的 研究Ki-67、VEGF-2、Her-2在乳腺癌中的表達情況及臨床意義。方法 運用免疫組化檢測74例乳腺癌和18例乳腺良性病變石蠟包埋切片Ki-67、VEGF 、Her-2的表達，并探尋其與臨床病理參數及其相互的關系。結果 ①Ki-67、VEGF、Her-2在乳腺癌表達率別為：66.2%， 78.4%及27.1%；良性病變中的表達率分別為：11.1%、38.9%、5.5%（P<0.05），分析有統計學差異；②Ki-67和VEGF在乳腺癌中隨著組織學分級的增高其表達率呈增高趨勢，并有統計學差異（P<0.05），Ki-67、VEGF、Her-2的表達與有無腋窩淋巴結轉移有統計學差異（P<0.05）。結論 ①乳腺癌的發生發展有Her-2、Ki-67、VEGF參與；②乳腺癌中腫瘤大小及年齡與Her-2、Ki-67、VEGF的表達無關。

關鍵詞：乳腺癌；細胞增殖抗原；血管內皮生長因子；Her-2；免疫組織化學

乳腺癌在女性人群當中最為常見，發病率在逐年快速上升，由于乳腺癌的發病機理尚不完全清楚，即使早診斷，仍有不少患者死于復發或轉移。本研究Ki-67、VEGF、Her-2在乳腺癌的發生、發展中可能具備重要的作用并具備相互作用的構思，結合搜集到的乳腺癌患者的臨床病理特征臨床資料，得出它們在乳腺癌進展中的作用，以及它們之間的可能存在的聯系，為從腫瘤生物學方向上闡明乳腺癌發生發展、預測患者預后等重要難題提供相應的數據。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集新疆醫科大學第二附醫院2007年1月～2012年12月符合入組標準的74例女性乳腺癌患者。術后石蠟包埋的標本做實驗組，并隨機抽取18例乳腺良性疾病組織的術后石蠟包埋的標本作對照組。年齡29～69歲，平均年齡46歲。其中浸潤性導管癌52例，12例混合型癌，10例為浸潤性小葉癌，共74例。據組織學分級情況：20例Ⅰ級、41例Ⅱ級，13例Ⅲ級。

1.2納入條件 術前未接受過化學藥物治療、增強免疫治療、內分泌治療或放射治療等抗腫瘤治療，經手術病理確診。臨床、病理資料齊備。無其他惡性腫瘤或既往惡性腫瘤病史。

1.3方法 運用免疫組織化學二步法，分別對74例乳腺癌樣本，18例乳腺良性疾病樣本進行Ki-67、VEGF、Her-2檢測，所有石蠟包埋標本均5μm連續切片（每個標本5張），分別做HE染色和免疫組化染色。以PBS代替一抗做陰性對照；以已知的試劑盒提供的Ki-67、VEGF陽性切片做陽性對照。

1.4免疫組化陽性結果判定 Ki-67陽性的癌細胞計數<10%計為1分，≥10%而≤50%計為2分，≥50%而≤75%計為3分，>75%計為4分。按染色強度，無色計為0分，淡黃色計為1分，棕黃色計為2分，棕褐色計為3分。兩項相加≥4分為陽性。

VEGF染色顆粒陽性細胞數以無著色計0分、陽性細胞數小于1/3計1分，1/3～2/3計2分和大于2/3計3分，每張切片以無著色0分、黃色1分、棕黃色2分和棕褐色3分，兩項相加≥4分為陽性。

Her-2無著色為（-），任何比例的浸潤癌細胞呈現微弱、不完整的細胞膜著色為（+），>10%的浸潤癌細胞呈現弱至中等強度、完整但不均勻、不連續的細胞膜棕黃著色或≤30%的浸潤癌細胞呈現強且完整的細胞膜棕褐著色為（++），>30%的浸潤癌細胞呈現強的完整的、連續的細胞膜棕褐著色為（+++）。

1.5統計學處理 運用SPSS17.0軟件進行統計學數據分析，采用χ2檢驗，非參數Spearman等級等相關檢驗進行統計學分析，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1乳腺癌組織與乳腺良性病變組織中Ki-67、VEGF、Her-2蛋白的表達 74例乳腺癌組織中Ki-67有49例（49/74）陽性表達，而在對照組中僅有2例表達（2/18）（χ2=17.79，P<0.01）； VEGF有58例（58/74）陽性表達，而在對照組中僅有7例表達（7/18）（χ2=10.889，P<0.01）， Her-2有20例（20/74）陽性，而在對照組中僅有1例（1/18）（χ2=3.789，P<0.01）。見表1。

2.2 Ki-67、VEGF、Her-2蛋白表達與乳腺癌臨床病理的關系 Ki-67表達Ⅰ級7例（7/20），Ⅱ級19例（19/29），Ⅲ級23例（23/25，Ⅰ級與Ⅱ級之間χ2=4.426（P<0.05），而在Ⅱ級與Ⅲ級之間χ2=5.447（P<0.05）；淋巴結是否轉移分組，陽性組為34例（34/44），陰性組為15例（15/30），χ2=5.931（P<0.05）Ki-67表達與組織學級別、淋巴結轉移密切相關；與年齡大小、腫塊大小無關。VEGF表達在Ⅰ級11例（11/20），Ⅱ級25例（25/29），Ⅲ級22例（22/25），Ⅰ級與Ⅱ級之間χ2=5.910（P<0.05），統計學上有差異，而在Ⅱ級與Ⅲ級之間χ2=0.025（P>0.05）無明顯差異。淋巴結陽性組為38例（38/44），陰性組為20例（20/30），χ2=4.084（P<0.05），說明與淋巴結轉移明顯相關，與年齡大小、腫塊直徑大小無關。Her-2在乳腺癌中的表達與組織學級別、年齡大小、腫塊直徑大小均無相關，而與淋巴結轉移有關，見表2。

3 討論

腫瘤細胞的增殖行為在腫瘤的發展、侵襲和轉移過程中起相當關鍵的作用。細胞增殖是所有正常細胞和腫瘤細胞延續生命存在的行為過程。而兩者增殖的主要區別是前者增殖受調控，后者增殖是失去控制的。Ki-67是Gerdes等[1]發現的是一種增殖細胞的核抗原。研究顯示Ki-67的表達與乳腺癌的病理學分級及臨床分期有一定相關性[2]，同時也與乳腺癌的組織學分型和淋巴結轉移情況密切相關[3]。現在已經成為實驗室檢測腫瘤細胞增殖活性的最可靠指標之一[4]。Ki-67是一個檢測細胞增殖的標記物，能廣泛的在常規病理研究中運用，方法簡單可行，結果可靠。部分國外學者認為它與Her-2并列位于繼組織學級別、ER、PR之后重要的乳腺癌指標。文獻報道，乳腺癌患者Ki-67表達率約為60%～80%[5]。

腫瘤是血管依賴性病變，實體腫瘤很大程度上依靠持續的、不可控制的血管生成而生長、轉移。VEGF參與促內皮細胞增殖、增加血管通透性、促進血管生成、抑制腫瘤細胞的凋亡、免疫抑制等作用。對于當原發灶已經被切除，機體中尚殘留有活性的腫瘤細胞的患者，血清中測得的VEGF濃度，動態觀察這部分患者的VEGF變化和復發轉移的關系，可能獲得更多的信息，這也是以后需要進一步進行的研究[6]。

原癌基因HER-2參與抑制細胞調亡，促進腫瘤細胞存活，上調血管內皮生長因子（VEGF）和金屬蛋白酶，血管通透性因子（VPF），促進腫瘤新生血管生成有關。在乳腺癌中HER-2的高表達是其癌基因擴增的結果，Her-2的高表達常提示腫瘤惡性程度高，常預后差，易復發[7]。

近30年來，除了手術方式的改進，新的化療藥物的應用，及新的檢測手段外，多基因的檢測也成為提高乳腺癌生存率提供必要的手段，而且基因檢測彌補了其他方式不可替代可能，如早期診斷，判斷預后等方面。但仍有許多不足之處，可能與乳腺癌生物學行為是多種因素綜合引起有關。聯合檢測女性乳腺癌中Ki-67、VEGF、Her-2表達情況和內在關聯可能為臨床判斷乳腺癌患者選擇合理化的綜合治療方案，制定隨訪周期，判斷預后提供幫助。

參考文獻：

[1]Gerdes JU， Schwab H， Lemke K， et al. Production of a mouse monoclonal antibody reactive with a human nuclear antigen associated with cell proliferation[J]Cancer，1983.31（1）：13-20.

[2]Urruticoechea A， Smith IE， Dowsett M， et al. Proliferation marker Ki-67 in early breast cancer[J]Clin Oncol，2005，23（28）：7212-7220.

[3]Evandro DA， Fatima C， De CG， et al. Ki-67 as prognostic marker in early breast cancer：a meta-analysis of published studies involving 12155 patients[J]Br J Cancer，2007，96（10）：1504-1513.

[4]Cheang MC， Chia SK， Voduc D， et al. Ki-67 index Her-2 status and prognosis of patientswith Luminal B breast cancer[J]Natl CancerInst，2009，101 （10）：736-750，

[5]朱學強，任剛，胡洪林.乳腺癌組織中VEGF，C-erbB-2，P53，Ki-67的表達及臨床意義[J].西部醫學，2009，21（3）：427-429.

[6]Nichols DW， Wolf DJ， et al. A testing algorithm for detennination Of C-erb-2 status in Patients with breast cancer[J]Ann Clin Lab Sci，2002，（32）：3-11.

[7]Mari P， Ozreti P， Levanat S， et al. Tumor markers in breast cancer evaluation of their clinical usefulness[J]Coll Antropol，2011，35（1）：241-247.

編輯/哈濤