實驗性腦出血后血NSE\\S-100B和MBP濃度動態變化的研究

摘要：目的 探究急性腦出血后血清神經稀醇化酶（NSE）、S-100B蛋白和髓鞘堿性蛋白(MBP)含量的變化和臨床意義。方法 選取16只小體型豬，隨機分成實驗組（即腦出血模型組）10只以及對照組（即假手術組）6只。使用ELISA法測定血清術后6h、1d、2d、3d、5d、7d NSE、S-100B、MBP濃度。結果 血清S-100B濃度在6h就開始升高，而NSE、MBP濃度在1d時開始升高，三者均在3d達高峰、之后開始下降，實驗組1~7d血清NSE、S-100B、MBP濃度和對照組比較具有顯著差異(P<0.01)。結論 血清NSE、S-100B、MBP濃度聯合檢測能更全面的反映出腦組織的受損情況，為判斷病情和預后提供了依據，為全腦保護治療和血腫清除術（包括微創血腫清除術）提供了理論支持。

關鍵詞：血清髓鞘堿性蛋白；神經元特異性稀醇化酶；S-100B蛋白1資料與方法

1.1實驗動物及其分組本試驗選取臨床健康的小體型豬16只，由華中農業大學實驗動物中心所提供，雌雄不限，體重（7．3±1．5）kg，在相同的飼養條件下開始試驗研究。采取隨機方法分成實驗組(10只)及對照組(6只)。

1.2主要的儀器設備和試劑離心機、酶標儀（華中科技大學同濟醫學院免疫教研室提供），MATRX MODEL 3000型密閉式吸入麻醉機，美國Hallowell儀器有限公司生產；異氟烷及氯胺酮，麻醉誘導以及維持用藥，分別是英國雅培制藥與福建古田藥業有限公司生產；手術器械；NSE試劑盒、MBP試劑盒、S-100B試劑盒均由美國ADL公司所提供。

1.3實驗方法與步驟

1.3.1模型制作本實驗組參照由孟祥武、陳興泳等報道的豬基底節腦出血模型的制作方法[1]，使用氯胺酮復合異氟烷面罩吸入麻醉，等到氣囊擴張后，自體血2次注入法建立起豬腦基底節出血模型。對照組：完成解剖定位、尾動脈抽血以及小兒導尿管插入基底，但不進行氣囊擴張與注血。

1.3.2采集標本實驗組和對照組都在6h、1d、2d、3d、5d、7d各采集尾動脈血1.5ml，使用離心機進行離心處理，10min后取出血清裝在EP管內，封口。盡快保存于－70℃冰箱內。

1.3.3 P濃度測定1個月內嚴格按照說明書ELISA法測定出血清MBP、NSE、S－100B濃度。

1.4統計學方法采用SPSS13.0統計軟件包進行統計數學處理，組間及組內比較采用重復測量數據方差分析。

2結果

血清NSE、S-100B、MBP濃度變化。

2.1實驗組腦出血后1~7d血清NSE、S-100B、MBP濃度和對照組同時間點比較均有顯著性差異(P<0．01)，均在第3d達到高峰，實驗組內第3d與第1d的濃度比較有顯著性差異(P<0．01)，其后濃度下降。

2.2實驗組腦出血后血清S-100B蛋白濃度在發病6h內開始明顯升高，血清NSE、MBP蛋白在發病24h開始明顯升高，血清S-100B的濃度先與NSE、MBP濃度升高。見表1、表2、表3。動態變化曲線見圖1、圖2、圖3。

3討論

NSE、S-100B和MBP被認為對中樞神經系統損傷具有高度的特異性，目前在腦外傷及缺血性腦中風的研究中應用得比較多，對預后評估具有十分重大的意義，從而受到高度重視[2]。腦內生理S-100B主要是由活化的星形膠質細胞所產生;NSE特異地存在于腦神經細胞和神經內分泌細胞;MBP在CNS是由少突膠質細胞（OLs）合成，是腦白質的重要組成部分，它是功能上很重要的髓鞘結構蛋白。

在中樞神經系統中，星形膠質細胞的數量遠遠超過了神經元，星形膠質細胞不僅為神經元提供代謝和營養支持，而且在調節突觸功能、保護神經元存活、神經修復以及神經再生中起著十分重要的作用。其終足包繞著毛細血管，所以，腦損傷后后星形膠質細胞最先開始遭受到打擊[3]。在缺血性損傷下，星形膠質細胞通常情況下會出現細胞腫脹，過度肥大增生以及增殖反應，并還會出現反應性星形膠質細胞化[4]。在反應性星形膠質細胞化之后，出現明顯的星形膠質細胞死亡，且垂死的星形膠質細胞還可能會進一步殺死相鄰的細胞[5]。雖然在大量離體實驗中，星形膠質細胞較神經元更能承受缺血打擊，但是在體情況下發生腦缺血后星形膠質細胞可能會比神經元更容易受損，因此S-100B的濃度更早于NSE、MBP的濃度升高。本實驗結果與上述結論一致。少突膠質細胞(OLs)形成的髓鞘是腦白質的重要組成部分。腦出血后血清MBP濃度明顯升高，說明腦白質明顯受損，因此臨床上我們要重視全腦保護治療，既要重視神經元的保護治療，又要重視膠質細胞的保護治療。

本文資料顯示，腦出血早期時血清S-100B（6h）、MBP與NSE（1d）已開始明顯升高，3d時就達到高峰，5d后又開始回落，但仍比對照組高。說明早期腦出血時本身已對腦組織造成了損傷，神經元、神經膠質細胞以及神經髓鞘均遭到破壞。以后血清S-100B、NSE和MBP在幾天內仍維持在一個較高水平，由于腦組織缺氧、缺血、水腫及壞死等繼發性損傷導致，尤其是第3d的血清S-100B、NSE和MBP濃度比第1d明顯升高，說明這時腦組織受到原發性及繼發性損害。3d后血清S-100B、NSE和MBP濃度漸漸下降，可能由于受損神經細胞與血腦屏障功能逐漸恢復和腦水腫逐漸消退。所以若腦出血后第1d血清NSE、S-100B水平升高就反映出神經組織的原發性損傷。若發病第3d血清NSE、S-100B、MBP濃度達峰值，后期維持在較高水平，這就反映了繼發性神經組織損傷。Marchi也贊同這個觀點。如對有手術指征的患者盡早進行手術清除血腫的壓迫，則可將神經組織的繼發性損傷減少。這對于腦出血后有手術指征應盡早地行血腫清除術（包括微創血腫清除術）提供了有力的理論支持。

因此，S-100B，NSE及MBP均是腦出血后腦組織損傷后比較合適的一個生化標記物，可全面反映神經元、膠質細胞、神經髓鞘膜的損害程度。對于判斷預后有著積極地指導意義，并為早期微創治療提供了理論支持。

參考文獻：

[1]孟祥武，陳興泳，程群，等.豬腦基底核出血模型的建立及觀察[J].神經損傷與功能重建，2008，3（1）：17-18.

[2]Qureshi AI.Evaluation of brain injury using a blood test：is there a role in clinlcal practice[J].Crit Care Med，2002，30：2778-2779.

[3]Jiang Z，Zhang Y，Chen XQ，et al.Apoptosis and activation of Erk1/2and Akt in astrocytes postischemia[J].Neurochem Res，2003，28(6):831-837.

[4]Pekny M，Nilsson M.Astrocyte activation and reactive gliosis[J].Glia，2005，50(4):427-434.

[5]Dienel GA，Hertz L.Astrocytic contributions to bioenergetics of cerebral ischemia[J].Glia，2005，50(4):362-388.

編輯/哈濤