PAI-1在慢性化膿性中耳炎的表達狀況

摘要：目的觀察PAI-1在慢性化膿性中耳炎肉芽組織的表達，并探討其與中耳炎發生發展的關系。方法利用免疫組化法測定24例中耳炎肉芽組織中PAI-1的表達情況。結果24例中耳肉芽組織中的PAI-1表達陽性率為69.30%。結論PAI-1在慢性化膿性中耳炎肉芽組織的表達明顯上調，可能為非手術治療慢性化膿性中耳炎開辟一條新思路。

關鍵詞：肉芽組織；中耳炎慢性化膿性中耳炎（CSOM）是耳鼻咽喉科臨床上一種常見病多發病，其病理過程是一系列的炎癥病理級聯反應，主要表現為纖維母細胞、血管內皮細胞的增生，并伴有淋巴細胞、漿細胞和巨噬細胞等慢性炎性細胞的浸潤，致使局部粘膜組織發生過度增生進而形成肉芽組織。人們已發現尿激酶性纖溶酶原激活物（uPA）系統在多種慢性炎癥中存在高表達，尤其是尿激酶性纖溶酶原激活物抑制劑-1（PAI-1）與各種炎癥的關系研究較多。但uPA系統與CSOM病理特征之間的關系的研究卻鮮有報道。本文通過檢測24例CSOM肉芽組織中的PAI-1的表達情況，探討PAI-1在中耳炎肉芽組織發生發展過程中的作用。

1資料與方法

1.1一般資料 收集2011年9月~2012年3月就診于我院須行手術治療的慢性化膿性中耳炎患者24例，男8例，女16例，年齡分布為17~59歲，術前均行顳骨CT檢查，聽力學全套檢查；術中自中耳腔內取出肉芽組織作為標本，行HE染色及免疫組化。

1.2試劑和儀器 一抗兔抗人PAI-1多克隆抗體以及SP免疫組化試劑盒和DAB顯色劑均為武漢博士德公司產品。主要儀器有蠟塊包埋機、石蠟切片機、電熱恒溫培養箱、顯微鏡。

1.3方法 標本一經取下立即用4%甲醛固定，常規石蠟包埋。石蠟標本切片4 μm。分別行HE染色及免疫組化。免疫組化步驟按產品說明書進行，顯微鏡觀察、計數并攝像。

1.4結果判定標準 結合HE染色切片，根據蘇木素復染后的細胞形態，鑒別肉芽組織中的不同細胞類型及組織結構；肉芽組織中細胞膜或細胞質中出現棕黃色顆粒為陽性細胞，未見棕黃色顆粒為陰性細胞，根據陽性細胞占全部細胞的比例判斷，（-）為陽性細胞數占全部細胞<10%或無陽性細胞；（+）為陽性細胞數占全部細胞的10%～30%；（++）為陽性細胞數占40%～69%；（+++）為陽性細胞數>70%，對同一標本取5個不同視野，取平均值。

2結果

2.1 HE染色 中耳肉芽組織內可見不同程度炎細胞浸潤包括淋巴細胞、成纖維細胞，巨噬細胞、血管內皮細胞等，以淋巴細胞為主，并可見增生的毛細血管，血管周圍可見淋巴細胞和纖維增生包繞，見圖1。

2.2 PAI-1在肉芽組織中的表達 肉芽組織中PAI-1陽性表達主要定位于細胞質，形如戒指狀、環狀或星狀，呈現黃色或棕黃色顆粒，主要分布于淋巴細胞，單核巨噬細胞，血管內皮細胞、成纖維細胞，見圖2。PAI-1表達總陽性率為69.30%，其中（+）5例，（++）10例，（+++）2例，（-）的7例。

3討論

uPA系統是纖溶系統的一部分，它是廣泛存在于機體內的一種絲氨酸蛋白分解酶，包括uPA、uPA受體（uPAR）及其抑制劑（PAI-1），對防止血栓形成和保持血流通暢有著重要意義。已有大量研究表明，細胞外基質的降解是腫瘤組織侵潤和轉移的必要條件，uPA系統介導的纖維蛋白溶解和腫瘤的侵潤轉移有著密切關系。uPA系統不僅作用于腫瘤細胞，對非腫瘤細胞也有廣泛活性，尤其是對炎癥性疾病的發展和轉歸有著重要意義，當慢性炎癥發生時，uPA促使炎性細胞遷移和組織修復，并介導細胞外基質蛋白的降解，uPAR與uPA高度特異結合，而PAI-1的作用則是抑制uPA活性，有學者發現在uPA、uPAR及PAI-1三因子中PAI-1與炎癥發生發展的關系更密切，作用更為突出[1]，PAI-1在多種炎癥中呈現上調狀態，可推測其在炎癥中上調是一種普遍的現象。

本研究發現PAI-1在肉芽組織中呈現高表達狀態。在COPD臨床試驗[5]及大鼠COPD模型[2]試驗中結果顯示PAI-1在肺炎性組織中表達明顯高于健康對照組；在小鼠感染炭疽桿菌后6 h，即可見肝內PAI-1mRNA和蛋白均顯著增加[3]，這提示我們PAI-1在多種炎癥性疾病中的促進炎癥細胞趨化和影響炎癥因子表達的非纖溶功能，同樣在CSOM也發揮著重要作用。

本實驗還發現PAI-1在肉芽組織中表達明顯增強部位主要集中在肉芽組織中新生毛細血管周圍，并主要集中在血管內皮細胞、巨噬細胞、淋巴細胞的胞質與胞膜上。PAI-1對細胞的遷移具有雙重作用，①抑制細胞遷移作用主要是通過阻斷uPA趨化運動和阻止玻連蛋白與uPAR、整合素的結合來減弱細胞粘附，從而抑制uPA對ECM降解作用；②通過增加細胞活動力、誘導細胞分離、直接或間接調節其他趨化因子的水平來維持趨化梯度(如IL-2、8)[4]。再加上缺氧及酸性環境的存在使炎癥進一步加重，刺激血管新生，形成肉芽。

由于存在倫理道德問題，本實驗未能取正常人的耳內組織作為對照組，是本實驗設計中的一大遺憾。根據各種文獻記載，不同部位的正常組織內PAI-1表達均為陰性，故推測正常中耳腔內組織的PAI-1的表達可能是陰性，但這也僅僅是一種猜測，需要科學的試驗進行進一步的驗證。

總結以上幾點，我們認為在肉芽組織的形成中PAI-1起著不可或缺的作用。使通過干擾PAI-1表達，從而下調炎癥因子的表達，減少炎癥細胞的募集，減少肉芽組織的形成與發展成為可能，為保守治療慢性中耳炎開辟一條新途徑。

參考文獻：

[1]許霞.PAI-1在肺泡上皮細胞炎癥因子表達和炎癥細胞趨化中作用的研究[D].山東學.2009.

[2]王洪超.吸煙致大鼠COPD模型肺組織中uPA/uPAR/PAI-1系統狀態的研究[D].山東大學，2005.

[3]Arndt PG，Young SK，Worthen GS.Regulation of lipopolysaccharide-induced lung Inflammation by plasminogen activator inhibitor-l through a jnk-mediated pathway[J].J Immunol，2005，175:4049-4059 .

[4]Degryse B，Sier CF，Resnati M，et al.Pai-1 inhibits urokinase-induced chemo-Taxis by internalizing the urokinase receptor[J].FEBS Lett，2001，505:249-254.

編輯/肖慧