bcr/abl融合基因與慢性粒細胞白血病急變

摘要：目的 探討bcr/abl融合基因的表達在CML急變中的意義。方法 采用熒光定量逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)（FQ-PCR）技術(shù)，對9例CML患者急變前后的血或骨髓進行bcr/abl檢測。結(jié)果 CML患者從慢性期到急變期往往伴隨著bcr/ablmRNA水平的明顯升高。結(jié)論 bcr/abl是CML發(fā)病的分子基礎(chǔ)，定量檢測bcr/abl融合基因?qū)τ贑ML急變的診斷，療效觀察及預(yù)后有重要意義。

關(guān)鍵詞：bcr/abl融合基因；PCR；CML；急變

慢性粒細胞白血病（CML）是一種起源于造血干細胞的血液系統(tǒng)惡性疾病，具有特征性的Ph染色體（philadelphia chromosome），形成的bcr/abl融合基因編碼的具有異常的酪氨酸激酶活性的P210bcr/abl融合蛋白與CML的發(fā)病有關(guān)。根據(jù)其臨床病程可分為慢性期（CP）、加速期（AP）、急變期（BP），BP是CML的終末階段，患者除死于其他非本病原因外，最終都會發(fā)展到急變期，以細胞的增殖率增加，分化障礙、對當前治療耐受且伴有克隆演化為特征[1]。現(xiàn)普遍認為，CML的急變涉及多基因多調(diào)控的異常。本實驗采用（FQ-PCR）技術(shù)，對9例CML-BP患者急變前后的bcr/ablmRNA的水平檢測，結(jié)合其他相關(guān)實驗室數(shù)據(jù)分析，以探討bcr/abl融合基因的表達在CML-BP的診斷與預(yù)后判斷中的意義。

1資料與方法

1.1 一般資料 所有9例患者均來自本院血液科2011年6月～2014年6月收治的CML患者，其中男性5例，女性4例，平均年齡45.5歲。確診CML不同時間后出現(xiàn)急性變的臨床表現(xiàn)。通過臨床表現(xiàn)，血象，骨髓象及組織化學(xué)染色確診CML-BP。

1.2 bcr/abl融合基因檢測 采用FQ-PCR方法定量檢測CML-BP患者前后bcr/abl融合基因。標本采集為新鮮骨髓3ml或靜脈血5ml，以EDTA抗凝。

1.3 外周血及骨髓圖片鏡檢[2]

1.4 結(jié)果處理 CML患者前后細胞形態(tài)學(xué)改變及bcr/ablmRNA的水平比較

2結(jié)果

2.1 外周血涂片結(jié)果 CML-CP：白細胞數(shù)增高，主要為中性中、晚幼和桿狀核粒細胞，原始細胞（I型+Ⅱ型）≤5%～10%，嗜酸、嗜堿粒細胞增多，可有少量有核紅細胞。

CML-BP：原始粒細胞（I型+Ⅱ型）（或原淋+幼淋、或原單+幼單）在外周血≥20%；外周血中原始粒+早幼粒細胞≥30%。

2.2 骨髓涂片結(jié)果 CML-CP：增生明顯--極度活躍，以粒系增生為主，中、晚幼粒和桿狀核粒細胞增多，原始細胞（1型+Ⅱ型）≤10%。

CML-BP：原始粒細胞（I型+Ⅱ型）（或原淋+幼淋、或原單+幼單）在骨髓中≥20%；骨髓中原始粒+早幼粒細胞≥50%。

2.3 bcr/ablmRNA檢測結(jié)果 CML-CP：（2～4）*106拷貝/ml，平均2.85*106拷貝/ml；

CML-BP：（6～20）*106拷貝/ml，平均10.66*106拷貝/ml。

3討論

慢性粒細胞白血病（CML）呈現(xiàn)典型的費城（Ph'）染色體，即9q34的C-ABL原癌基因與22q11的BCR基因融合而成t（9；22），轉(zhuǎn)錄并翻譯成具有高酪氨酸激酶活性的bcr/abl融合蛋白（P210）。CML的發(fā)生與該P210蛋白的高酪氨酸蛋白激酶活性密切相關(guān)。CML急變通常有三種情況：急性髓樣變、急性淋巴細胞變、急性巨噬細胞變。

本實驗表明bcr/abl基因表達水平與CML的急變有關(guān)。CML患者從慢性期發(fā)展到急性期，往往伴隨著bcr/ablmRNA水平的明顯升高，bcr/abl基因的表達狀況和CML細胞的成熟度呈負相關(guān)，而且這一分子生物學(xué)改變可發(fā)生于細胞形態(tài)學(xué)變化之前[3]。另有實驗表明：bcr/abl是一種抑制凋亡的基因，能通過抑制細胞凋亡，而使細胞數(shù)量增加[4]，基因組的內(nèi)在不穩(wěn)定性也隨之增加，這樣細胞就容易發(fā)生第二次突變，從而使CML想急性期發(fā)展。

另外，p53、Rb、p16這些抑癌基因的分子改變在CML分別向不同的急變方式進展是起著重要作用，而且每一種抑癌基因單獨發(fā)生突變時可驅(qū)使CML向各自定系細胞發(fā)生急變[5]。

另外大量研究表明，DNA的修復(fù)損傷與細胞生物學(xué)改變（凋亡受阻、分化障礙、耐藥發(fā)生等）在CML急變中都起著重要作用。

綜上所述：CML是一種異質(zhì)性疾病，其急變涉及多方面的改變。在分子水平，涉及癌基因、抑癌基因以及DNA修復(fù)功能等的異常；在細胞水平，涉及惡性白血病細胞的凋亡受阻、分化障礙以及耐藥發(fā)生等。而bcr/abl融合基因的大量表達和由此引起的繼發(fā)性基因突變在CML急變中起主要作用，加強bcr/ablmRNA的檢測可為CML-BP早期診斷和治療提供有力證據(jù)。

參考文獻：

[1]Thevle J，Kvasnicka HM，Schmiu-Graeff A，et al.Bone Marrow Hiotopathology Predicting Blast Cnsis in Chronic Myeloid Leukemia[J].Acia Hacmatol，2001，105（1）：241-246.

[2]陸道培，童春容.慢性粒細胞白血病的診斷和療效標準.張之南主編<<血液病診斷及療效標準>>.科學(xué)出版社，1998；219-227.

[3]bcr2abl chimeric mRNA expression in tumor cells of patients with chronic myeloid leukemia precedes disease progression[J].Blood，1995 ，86 ：2371-2378.

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[5]Serra A et al[J].Br J Haematol，1995，91（3）：625-629.編輯/許言