p21基因啟動子甲基化對血管平滑肌細胞向泡沫細胞轉化的影響

摘要：目的 觀察氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）對血管平滑肌細胞（VSMC）p21基因啟動子甲基化及對VSMC向泡沫細胞轉化的影響。方法 采用組織貼塊法培養人臍血管平滑肌細胞，給予不同濃度氧化低密度脂蛋白ox-LDL（0，10mg/L，20mg/L，40mg/L）孵育24h，甲基化特異PCR（MS-PCR）檢測p21基因啟動子區CpG島甲基化程度，MTT比色法測定VSMC增殖活性，油紅O染色鏡下觀察計數泡沫細胞比率。結果 ox-LDL呈濃度依賴性促進p21啟動子甲基化，同時平滑細胞增殖活性增高，向泡沫細胞轉化增加。結論 ox-LDL 可以通過p21基因甲基化促進VSMC向泡沫細胞轉化，p21基因甲基化可能在動脈粥樣硬化發生中起到一定作用。

關鍵詞：p21基因；甲基化；動脈粥樣硬化

動脈中膜血管平滑肌細胞（VSMC）發生增殖和遷移并轉化為泡沫細胞是動脈粥樣硬化（AS）形成過程中的核心事件。細胞周期是各種因素刺激細胞增殖的最后信號通路，p21是體內最重要的細胞周期蛋白，可與幾乎每一個Cyclin-CDK復合物結合并使其失活，從而阻礙細胞進入增殖期。p21等在高膽固醇等促AS因子作用下表達下調，導致動脈平滑肌細胞增殖和遷移， 但在此過程中沒有發現p21基因的突變，從而使傳統遺傳學理論對此無法解釋。表觀遺傳學理論，尤其是DNA甲基化為解決AS等多基因遺傳疾病提供了新的思路。DNA甲基化不改變基因編碼序列，但啟動子區高甲基化將導致基因表達抑制和基因沉默。本課題觀察p21基因甲基化對泡沫細胞形成的影響，為闡明AS發病機制提供理論依據。

1資料與方法

1.1一般資料 Gp Genome DNA修飾試劑盒購自Chmicon，PCR試劑盒購自賽百盛公司，四甲基偶氮唑鹽和二甲基壓砜購自Sigma公司，細胞培養基、小牛血清等購自Gibico。……