EphA4在乳腺癌組織中的表達及臨床意義

摘要：目的 檢測EphA4mRNA在乳腺癌組織及正常乳腺組織中的表達，并分析其生物學特性及臨床意義。方法 應用real-time RT-PCR法檢測60例乳腺癌和10例乳腺良性病變中EphA4mRNA的相對含量，并分析其與乳腺癌臨床病理特征的相關性。結果 乳腺癌組織中EphA4mRNA表達水平明顯高于乳腺良性病變（P<0.05），其表達水平與乳腺癌組織學分級，腋窩淋巴結轉移和臨床分期有關，而與患者的年齡、腫瘤體積、病理組織學類型無顯著相關（P>0.05）。結論 EphA4可能促進乳腺癌的進展和轉移，有助于幫助評估乳腺癌的生物學行為，指導臨床用藥。

關鍵詞：EphA4mRNA；乳腺癌；RT-PCR

中圖分類號：R737.9 文獻標志碼：A

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，且轉移及復發率很高，尋找更好的與預后有關的分子標志物及治療靶點進行干預是治療乳腺癌的新思路。Eph受體酪氨酸激酶（erythropoietin producing hepatoma cell line）和它們的ephrin配體形成獨特的細胞-細胞接觸介導的雙向信號機制來調節細胞的定位和組織構成。有研究資料顯示Eph家族蛋白與腫瘤的發生和腫瘤血管的形成有關[1-2]。本研究采用RT-PCR法檢測EphA4mRNA在乳腺腫瘤中的表達，并進一步分析其與乳腺癌的生物學行為之間的關系，為臨床治療乳腺癌提供更有效的方案。

1資料與方法

1.1一般資料 收集我院2010年1月～2012年12月行乳腺癌改良根治術的新鮮手術切除標本60例，置于裝有Trizol的離心管內，液氮中保存。患者均為女性，年齡32～65歲，中位年齡52.5歲。其中導管內癌6例，浸潤性導管癌46例，浸潤性小葉癌8例。腋窩淋巴結轉移41例，無淋巴結轉移19例。臨床分期：Ⅰ期10例、Ⅱ期33例、Ⅲ期11例、Ⅳ期6例。以10例乳腺良性病變（乳腺纖維腺瘤及乳腺腺病）作為對照組。

1.2 EphA4mRNA的檢測 Real-time RT-PCR法檢測乳腺癌中EphA4mRNA的表達，EphA4/GAPDH灰度比值代表目的基因EphA4mRNA的表達水平。Trizol試劑及RT-PCR試劑盒均購于美國Invitrogen公司，PCR引物和探針由上海生工生物工程有限公司合成。EphA4基因上游引物序列為5，-CCTGGTGAACAGCAACTT-3，，下游引物序列為5，-CACTTCCCACATAACGATT-3，，產物長度196bp，熒光探針5，-（FAM）CCTCAAGCACTCGGGACATGCCAA（Eclipse）-3，；GAPDH基因上游引物序列為5，-CCAGGTGGTCTCCTCTGACTT-3，，下游引物序列為5，-GTTGCTGTAGCCAAATTCGTTGT-3，，產物長度130bp，熒光探針5，-（FAM）AACAGCGACACCCACTCCTCCACC（Eclipse）-3，。將各例乳腺癌及乳腺良性病變組織在分別在液氮中研碎，加入Trizol試劑勻漿器中勻漿30 s，按照說明書步驟提取組織RNA，分光光度儀測定A值260 nm/280 nm，記錄其濃度，單位為ng/μl。根據說明書配制成20 μL反應體系，反應在7900HT Fast Real-time PCR System儀上進行，設定每個PCR循環包括：95℃ 30 s，55℃（EphA4）或58℃（GAPDH）退火30 s，72℃延伸60 s，共40個循環。

1.3結果判定 EphA4mRNA在60例乳腺癌中表達的相對含量與10例乳腺良性病變含量的均值相比較，比值<1.5記為\"-\"，在1.5～2記為\"+\"，>2記為\"++\"。

1.4統計學方法 采用SPSS 19.0統計軟件進行分析，EphA4mRNA的表達與乳腺癌臨床病理特征的關系采用Pearson χ2檢驗，檢驗標準取P<0.05具有統計學意義。

2結果

EphA4mRNA經RT-PCR擴增后在60例乳腺癌標本中均檢測出表達，其相對含量平均比值為（0.83±0.12），在乳腺良性病變中的相對含量平均比值為（0.21±0.09），兩者比較差異有統計學意義（P<0.01）。EphA4mRNA的表達與乳腺癌臨床病理特征的關系，見表1。EphA4mRNA的表達與腫瘤的分化程度、臨床分期、淋巴結轉移相關（P<0.05），而與年齡、腫瘤大小及病理類型無關（P>0.05）。

3討論

酪氨酸激酶途徑是一條重要的細胞內信號轉導通路，可有效地將外界刺激信息傳遞至細胞核。在對人類多種腫瘤的研究中發現，酪氨酸激酶及其受體與腫瘤的增殖、凋亡、黏附、遷移和血管生成相關[3]。EphA4/ephrin作用體系，通常以較低的水平表達于成人各種上皮細胞中，能夠潛在激活雙向信號傳導通路和細胞效應，參與調節細胞的增生、遷移、變形和粘附等，影響腫瘤的進展和轉移，而且還可能與腫瘤的血管生成有關[4]。以往的研究發現在前列腺癌和胰腺癌組織中，有EphA4受體的高表達[5]，并與胃癌的進展和轉移相關[6-9]。本研究檢測EphA4基因在乳腺腫瘤中的表達，結果顯示EphA4mRNA在乳腺癌中的表達明顯高于乳腺良性病變（P<0.01）。EphA4mRNA的表達與乳腺癌的不同組織學分級，臨床分期及腋窩淋巴結轉移有關（P<0.05），有腋窩淋巴結轉移者陽性表達率顯著高于腋窩淋巴結陰性者，臨床分期晚者陽性表達率顯著高于臨床分期較早者。EphA4mRNA的表達隨著乳腺癌的組織學分級、臨床分期的增高及淋巴結轉移的出現而增高，提示EphA4在腫瘤中的高表達可能與乳腺癌浸潤和轉移密切相關。

綜上所述，EphA4在乳腺癌的發生發展中發揮著重要的作用。進一步研究EphA4在乳腺癌中的作用機制，為乳腺癌的早期診斷、臨床治療和預后提供理論依據。

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