多參數(shù)流式細胞術(shù)檢測急性髓系白血病微小殘留病的研究

摘要：目的 探討多參數(shù)流式細胞術(shù)檢測急性髓系白血病微小殘留病的研究進展。方法 采用多參數(shù)流式細胞術(shù)檢測微小殘留病，其優(yōu)勢在于MFC通過對白血病相關(guān)免疫表型檢測，比RQ-PCR技術(shù)更廣泛、直觀地對殘留白血病細胞進行準(zhǔn)確定量。目前MRD已經(jīng)可用于大于90%以上的急性髓系白血病的免疫表型檢測。結(jié)果 MFC在急性髓系白血病MRD的檢測中是最有前景的一種方法。結(jié)論 MFC檢測MRD對急性髓系白血病的治療具有重要的指導(dǎo)意義。但目前MRD的檢測由于不同的實驗室所采用的化療方案不統(tǒng)一，故在抗體組合方案、閾值的界定、檢測時間點的有所不同，故建立MFC檢測MRD的標(biāo)準(zhǔn)化是今后發(fā)展方向。

關(guān)鍵詞：急性白血病；多參數(shù)流式細胞術(shù)；微小殘留病；研究進展

急性白血病一種進展迅速的血液系統(tǒng)惡性腫瘤，近年來隨著新的化療藥物的出現(xiàn)、造血干細胞移植技術(shù)的進步，急性白血病在治療方面取得進展。急性髓系白血病在誘導(dǎo)緩解治療后有60～80%的患者可以達到完全緩解（CR），但仍有部分患者達到完全緩解后復(fù)發(fā)，從而影響患者的長期生存率。目前大多數(shù)研究認為其主要原因是來自患者體內(nèi)的殘留白血病細胞。微小殘留病（MRD）是白血病患者經(jīng)誘導(dǎo)化療或骨髓移植治療后達到臨床和血液學(xué)完全緩解后體內(nèi)仍殘存微量白血病細胞的一種狀態(tài)，MRD逐漸成為急性白血病評價預(yù)后的獨立指標(biāo)。我院對此進行了研究，現(xiàn)將其進展報告如下：

1多參數(shù)流式細胞術(shù)（MFC）檢測MRD的優(yōu)勢

MFC是對處于快速直線流動狀態(tài)中的單個細胞進行形態(tài)、大小及熒光特征的識別，從而區(qū)分白血病細胞和正常細胞的一種技術(shù)方法，其每秒可檢測成千甚至上萬個細胞，并對檢測的細胞進行快速多參數(shù)定量分析，靈敏度達10-4～10-5。MFC通過對白血病相關(guān)免疫表型檢測，比RQ-PCR技術(shù)更廣泛、直觀地對殘留白血病細胞進行準(zhǔn)確定量，目前MRD已經(jīng)可用于大于90%以上的急性髓系白血病的免疫表型檢測[1～3]。故MFC在急性髓系白血病MRD的檢測中最有前景的一種方法。

2 MFC檢測MRD的策略

①通過多色方案鑒別患者特異性的白血病相關(guān)免疫表型（LAIPs）；②在完全緩解時和緩解后治療中用患者特異性的LAIPs追蹤MRD；③將MRD與患者的復(fù)發(fā)，長期無復(fù)發(fā)/無病生存，總生存等預(yù)后和治療關(guān)聯(lián)，以更好地指導(dǎo)治療。

3 MFC檢測MRD的臨床意義

3.1危險度分層 實踐提示，根據(jù)MRD水平對患者危險度分層就十分必要。San Miguel JF[4]等根據(jù)MFC檢測的MRD水平對誘導(dǎo)緩解后的患者進行危險度分層，分別是極低風(fēng)險組（<10-4），低風(fēng)險組（10-4～10-3），中度風(fēng)險組（10-3～10-3）和高風(fēng)險組（>10-2），3年復(fù)發(fā)率分別為0%、14%、50%和84%，因此早期對急性白血病進行危險度分層具有重要的臨床指導(dǎo)意義。

3.2判斷預(yù)后及復(fù)發(fā) 急性白血病患者在初次診斷是體內(nèi)的白血病細胞數(shù)大約有1012個，經(jīng)過誘導(dǎo)緩解達完全緩解時體內(nèi)的白血病細胞仍殘留108-109個。體內(nèi)殘留白血病細胞數(shù)的不同提示預(yù)后不同。路萍[5]的研究結(jié)果提示MRD預(yù)測白血病復(fù)發(fā)是早于形態(tài)學(xué)檢查的，是判斷預(yù)后和預(yù)測復(fù)發(fā)的一個敏感指標(biāo)，高水平的MRD是預(yù)后不良的一個獨立危險因素。

3.3指導(dǎo)個體化治療 治療期間動態(tài)監(jiān)測患者白血病細胞的MRD水平直接反映體內(nèi)白血病細胞的負荷量，根據(jù)體內(nèi)白血病細胞的負荷決定下一步的治療方案。對于MRD為低水平的患者可以選擇化療強度弱的方案，避免過度治療。對于MRD為高水平的患者，則應(yīng)給予化療強度大的化療方案或造血干細胞移植，這樣可以做到有的放矢，以延長患者的生存期，提高生活質(zhì)量。

3.4在造血干細胞移植中的應(yīng)用 造血干細胞移植明顯改善了急性白血病患者的預(yù)后，然而移植后復(fù)發(fā)仍是治療失敗的主要原因。施曉蘭等[6]研究結(jié)果提示：根據(jù)AL患者HSCT移植前后的MRD水平，采取及時適當(dāng)?shù)母深A(yù)治療，可降低移植后復(fù)發(fā)率，這對臨床的治療有很大的指導(dǎo)意義。

4 MFC檢測MRD研究方向

4.1抗體組合方案的標(biāo)準(zhǔn)化 常規(guī)的MRD監(jiān)測方法是在初發(fā)時確定急性白血病類型，篩選出LAIPs，并在緩解后以該LAIPs監(jiān)測殘留的白血病細胞。然而由于AML細胞異常抗原表達特異性較差，化療后相當(dāng)一部分患者抗原會有丟失或獲得，還有更多抗原表達強度發(fā)生改變，尤其是復(fù)發(fā)病例。San Miguel JF[4]等篩查了89個診斷AML的患者并最終確定53位適合做MRD追蹤。結(jié)果發(fā)現(xiàn)44例（83%）病例中出現(xiàn)不同步抗原表達；16例（30%）中出現(xiàn)跨系抗原表達；5例（9%）中有抗原的過度表達；18例（34%）中存在異常的SSC信號。不同實驗室之間由于抗體組合應(yīng)用的不同所得到的MRD種類、頻率不同，能否找到特異性高的殘留白血病細胞的敏感度也是有差別的。這就使得抗體組合的標(biāo)準(zhǔn)化變得越來越重要。

4.2閾值的界定 由于不同的實驗室界定MRD陰陽性的閾值不同，因此很難對不同實驗室的研究結(jié)果做比較。MRD閾值的界定是今后的研究方向。

4.3檢測時間點的選擇 在MRD的檢測治療中一些特定的時間點是判斷療效和預(yù)后的獨立危險因素，可指導(dǎo)下一步治療。但由于不同的研究組的治療方案不同，因此各自確立的檢測時間一點也不相同。盡管檢測時間點的選擇有待進一步研究，但治療早期MRD的高水平不僅反映了藥物清除白血病的效果不佳，也與復(fù)發(fā)風(fēng)險密切相關(guān)，所以治療早期是重要的檢測時機。

5結(jié)論

MFC檢測MRD對急性髓系白血病的治療具有重要的指導(dǎo)意義。根據(jù)初次誘導(dǎo)緩解治療后MRD值的水平可以對急性髓系白血病患者進行危險度分層、預(yù)后評估、指導(dǎo)個體化治療，以使患者能從中受益，延長患者的生存期，提高生活質(zhì)量。目前MRD的檢測由于不同的實驗室所采用的化療方案不統(tǒng)一，故在抗體組合方案、閾值的界定、檢測時間點的有所不同，故建立MFC檢測MRD的標(biāo)準(zhǔn)化是今后發(fā)展方向。

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[6]施曉蘭，唐曉文，吳德沛等.流式細胞術(shù)檢測微小殘留病變在急性白血病造血干細胞移植中得應(yīng)用[J].蘇州大學(xué)學(xué)報，2010，30（3）：517-520.

編輯/王海靜