臭菘提取物對癌細胞的體外抑制作用研究
2014-04-30 10:00:37魏麗
吉林農業·下半月 2014年3期
摘要：為了研究臭菘提取物對癌細胞的體外抑制活性，本文采用MTT法研究臭菘不同極性提取物，針對結腸癌細胞抑制作用，結果顯示其提取物，均不同程度抑制Caco-2活性，且氯仿萃取物在實驗中表現出較強的細胞抑制活性。
關鍵詞：臭菘；提取物；癌細胞；抑制活性
中圖分類號： R979.1 文獻標識碼： A 文章編號： 1674-0432（2014）-06-21-1
臭菘[Symplocarpus foetidus （Linn.） Salisb.]別名又叫黑瞎子白菜，是天南星科臭菘屬草本植物[1]。作為中草藥，其具有解表止咳、化痰平喘等功效 [2]。許多研究表明，天南星科植物大部分具有抗癌作用[3]。本實驗研究臭菘抑制癌細胞活性，為對臭菘臨床等實驗研究，提供有利依據。
1 材料與方法
1.1 實驗材料、設備與試劑
1.1.1 實驗材料 一是提取臭菘不同極性溶劑的提取物；二是人結腸癌細胞株Caco-2（吉林大學動植物實驗室提供）。
1.1.2 試劑與儀器 SW-CJ-2D型超凈工作臺 蘇州技術有限公司；酶標儀 SANRSE1006003938 SECUN公司；406828型細胞培養箱 SETECAT公司；Millex33mm 無菌高溫過濾器MILLIPORE；96孔板 KOATSR公司；XB-T-25血球計數 上海通用儀器廠等。
環磷酰胺 山西藥業有限公司；胰蛋白酶 ISMA公司；MTT M-2128 SIMA公司；DMEM培養液 BICO公司；胎牛血清等。
1.1.3 配置培養基和溶液 MTT溶液：準確稱量MTT1克，然后加入200毫升的PBS緩沖溶液，將其攪拌溶解除菌過濾，得到濃度為0.5毫克/毫升MTT溶液，置于4℃冰箱中。
PBS緩沖溶液：準確稱量0.2克 KCl、8克 NaCl、0.2克 K2PO4、1.15克 Na2PO4，倒入超純水1000毫升， pH值調節至7.4，高壓滅菌之后常溫保存。
胰酶細胞消化液：準確稱量2.5克胰蛋白酶、0.2克 Na2EDTA，除菌溶解于1000毫升PBS溶液中，放入-20℃冰箱中。
DMEM培養液：稱取DMEM粉末溶于700毫升超純水，溶解后進行除菌，再加入10%的胎牛血清和已經配好的1%谷氨酰胺溶液。
1.2 受試的藥品配制
稱取臭菘各極性萃取膏25.6毫克，再加入適量DMSO，溶解后攪拌均勻，加入配制好濃度為0.08、0.32和1.28毫克/毫升超級水。環磷酰胺為陽性對照組藥物，同上述配置四個濃度的梯度。
1.3 實驗方法[4]
1.3.1 復蘇細胞
1.3.2 細胞的傳代培養 首先，取出達到一定生長密度的Caco-2后，去除培養液；然后用PBS緩沖溶液對其反復沖洗3次，再用胰酶細胞消化液對其反復沖洗2次后，將液體再次倒掉，這時再加入幾滴胰酶消化液，進行消化1～2分，放在倒置的顯微鏡下觀察后，當看到細胞呈現圓粒狀的時候，表示已消化完畢；再取出胰酶消化液，再次加入細胞培養液，待細胞充分均勻的分散后進行分裝，然后放入到CO2培養箱內，以上操作都是在嚴格的無菌條件下進行的。
1.4 測定對Caco-2細胞給藥影響
實驗組有5個以上的平行，然后分別設定24小時、48小時、72小時進行培養，培養完成棄上層清液，再洗3次后棄除藥液。再加入0.5毫克/毫升MTT200 升，常溫培養4小時，棄除上清液并洗脫3次，再次加DMSO200升溶解MTT還原成甲臜沉淀，最后用波長492納米來測定吸光度（A）值，并計算癌細胞的抑制率。
A：給藥劑組的吸光值 P：腫瘤細胞的抑制率 ACK：對照組的吸光值
2 結果與分析
比較試驗結果可知，對照組明顯高于給藥組（吸光度A值），表明給藥組對Caco-2細胞有明顯抑制，并隨著時間的延長和濃度的增大，對其抑制趨勢越強。同一濃度下氯仿的提取物，對Caco-2細胞抑制活性明顯高于其他極性提取物組和對照組。
3 結語
李艷鳳等人研究發現白附子乙酸乙酯萃取物對胃癌細胞具有增殖的抑制活性；李桂玲等研究發現掌葉半夏提取物使子宮癌細胞Bcl-2和PCNA蛋白表達量遞減；本實驗采用MTT法，研究臭菘不同極性提取物對Caco-2細胞的抑制作用，結果顯示，各極性提取物均有不同程度對癌細胞的抑制活性，同時隨著濃度增加，抑制率也呈上升趨勢，初步表明臭菘中含有細胞毒性成分，在實驗中氯仿萃取物表現出較強的抑制癌細胞活性。
參考文獻
[1] 中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志（第十三卷第二分冊）[M].北京：科學出版社，1979，（9）：1-12.
[2] 伊廷雙，李德銖.天南星科分類系統的沿革[J].武漢植物學研究，2002，20（1）：49-61.
[3] 喬恒，隋希英.吉林省重點保護野生植物名錄[J].吉林林業科技，2009，38（2）：24-41.
[4] 程鑫穎，包海鷹，丁燕.瓦寧木層孔菌中5個化合物的抗腫瘤活性篩選[J].菌物研究，2011，9（3）：175-180.
作者簡介：魏麗，吉林農業大學中藥材學院，研究生，研究方向：植物藥。
網絡出版時間：2014-4-8 13：17：49
網絡出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/22.1186.S.20140408.1317.002.html
摘要：為了研究臭菘提取物對癌細胞的體外抑制活性，本文采用MTT法研究臭菘不同極性提取物，針對結腸癌細胞抑制作用，結果顯示其提取物，均不同程度抑制Caco-2活性，且氯仿萃取物在實驗中表現出較強的細胞抑制活性。
關鍵詞：臭菘；提取物；癌細胞；抑制活性
中圖分類號： R979.1 文獻標識碼： A 文章編號： 1674-0432（2014）-06-21-1
臭菘[Symplocarpus foetidus （Linn.） Salisb.]別名又叫黑瞎子白菜，是天南星科臭菘屬草本植物[1]。作為中草藥，其具有解表止咳、化痰平喘等功效 [2]。許多研究表明，天南星科植物大部分具有抗癌作用[3]。本實驗研究臭菘抑制癌細胞活性，為對臭菘臨床等實驗研究，提供有利依據。
1 材料與方法
1.1 實驗材料、設備與試劑
1.1.1 實驗材料 一是提取臭菘不同極性溶劑的提取物；二是人結腸癌細胞株Caco-2（吉林大學動植物實驗室提供）。
1.1.2 試劑與儀器 SW-CJ-2D型超凈工作臺 蘇州技術有限公司；酶標儀 SANRSE1006003938 SECUN公司；406828型細胞培養箱 SETECAT公司；Millex33mm 無菌高溫過濾器MILLIPORE；96孔板 KOATSR公司；XB-T-25血球計數 上海通用儀器廠等。
環磷酰胺 山西藥業有限公司；胰蛋白酶 ISMA公司；MTT M-2128 SIMA公司；DMEM培養液 BICO公司；胎牛血清等。
1.1.3 配置培養基和溶液 MTT溶液：準確稱量MTT1克，然后加入200毫升的PBS緩沖溶液，將其攪拌溶解除菌過濾，得到濃度為0.5毫克/毫升MTT溶液，置于4℃冰箱中。
PBS緩沖溶液：準確稱量0.2克 KCl、8克 NaCl、0.2克 K2PO4、1.15克 Na2PO4，倒入超純水1000毫升， pH值調節至7.4，高壓滅菌之后常溫保存。
胰酶細胞消化液：準確稱量2.5克胰蛋白酶、0.2克 Na2EDTA，除菌溶解于1000毫升PBS溶液中，放入-20℃冰箱中。
DMEM培養液：稱取DMEM粉末溶于700毫升超純水，溶解后進行除菌，再加入10%的胎牛血清和已經配好的1%谷氨酰胺溶液。
1.2 受試的藥品配制
稱取臭菘各極性萃取膏25.6毫克，再加入適量DMSO，溶解后攪拌均勻，加入配制好濃度為0.08、0.32和1.28毫克/毫升超級水。環磷酰胺為陽性對照組藥物，同上述配置四個濃度的梯度。
1.3 實驗方法[4]
1.3.1 復蘇細胞
1.3.2 細胞的傳代培養 首先，取出達到一定生長密度的Caco-2后，去除培養液；然后用PBS緩沖溶液對其反復沖洗3次，再用胰酶細胞消化液對其反復沖洗2次后，將液體再次倒掉，這時再加入幾滴胰酶消化液，進行消化1～2分，放在倒置的顯微鏡下觀察后，當看到細胞呈現圓粒狀的時候，表示已消化完畢；再取出胰酶消化液，再次加入細胞培養液，待細胞充分均勻的分散后進行分裝，然后放入到CO2培養箱內，以上操作都是在嚴格的無菌條件下進行的。
1.4 測定對Caco-2細胞給藥影響
實驗組有5個以上的平行，然后分別設定24小時、48小時、72小時進行培養，培養完成棄上層清液，再洗3次后棄除藥液。再加入0.5毫克/毫升MTT200 升，常溫培養4小時，棄除上清液并洗脫3次，再次加DMSO200升溶解MTT還原成甲臜沉淀，最后用波長492納米來測定吸光度（A）值，并計算癌細胞的抑制率。
A：給藥劑組的吸光值 P：腫瘤細胞的抑制率 ACK：對照組的吸光值
2 結果與分析
比較試驗結果可知，對照組明顯高于給藥組（吸光度A值），表明給藥組對Caco-2細胞有明顯抑制，并隨著時間的延長和濃度的增大，對其抑制趨勢越強。同一濃度下氯仿的提取物，對Caco-2細胞抑制活性明顯高于其他極性提取物組和對照組。
3 結語
李艷鳳等人研究發現白附子乙酸乙酯萃取物對胃癌細胞具有增殖的抑制活性；李桂玲等研究發現掌葉半夏提取物使子宮癌細胞Bcl-2和PCNA蛋白表達量遞減；本實驗采用MTT法，研究臭菘不同極性提取物對Caco-2細胞的抑制作用，結果顯示，各極性提取物均有不同程度對癌細胞的抑制活性，同時隨著濃度增加，抑制率也呈上升趨勢，初步表明臭菘中含有細胞毒性成分，在實驗中氯仿萃取物表現出較強的抑制癌細胞活性。
參考文獻
[1] 中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志（第十三卷第二分冊）[M].北京：科學出版社，1979，（9）：1-12.
[2] 伊廷雙，李德銖.天南星科分類系統的沿革[J].武漢植物學研究，2002，20（1）：49-61.
[3] 喬恒，隋希英.吉林省重點保護野生植物名錄[J].吉林林業科技，2009，38（2）：24-41.
[4] 程鑫穎，包海鷹，丁燕.瓦寧木層孔菌中5個化合物的抗腫瘤活性篩選[J].菌物研究，2011，9（3）：175-180.
作者簡介：魏麗，吉林農業大學中藥材學院，研究生，研究方向：植物藥。
網絡出版時間：2014-4-8 13：17：49
網絡出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/22.1186.S.20140408.1317.002.html
摘要：為了研究臭菘提取物對癌細胞的體外抑制活性，本文采用MTT法研究臭菘不同極性提取物，針對結腸癌細胞抑制作用，結果顯示其提取物，均不同程度抑制Caco-2活性，且氯仿萃取物在實驗中表現出較強的細胞抑制活性。
關鍵詞：臭菘；提取物；癌細胞；抑制活性
中圖分類號： R979.1 文獻標識碼： A 文章編號： 1674-0432（2014）-06-21-1
臭菘[Symplocarpus foetidus （Linn.） Salisb.]別名又叫黑瞎子白菜，是天南星科臭菘屬草本植物[1]。作為中草藥，其具有解表止咳、化痰平喘等功效 [2]。許多研究表明，天南星科植物大部分具有抗癌作用[3]。本實驗研究臭菘抑制癌細胞活性，為對臭菘臨床等實驗研究，提供有利依據。
1 材料與方法
1.1 實驗材料、設備與試劑
1.1.1 實驗材料 一是提取臭菘不同極性溶劑的提取物；二是人結腸癌細胞株Caco-2（吉林大學動植物實驗室提供）。
1.1.2 試劑與儀器 SW-CJ-2D型超凈工作臺 蘇州技術有限公司；酶標儀 SANRSE1006003938 SECUN公司；406828型細胞培養箱 SETECAT公司；Millex33mm 無菌高溫過濾器MILLIPORE；96孔板 KOATSR公司；XB-T-25血球計數 上海通用儀器廠等。
環磷酰胺 山西藥業有限公司；胰蛋白酶 ISMA公司；MTT M-2128 SIMA公司；DMEM培養液 BICO公司；胎牛血清等。
1.1.3 配置培養基和溶液 MTT溶液：準確稱量MTT1克，然后加入200毫升的PBS緩沖溶液，將其攪拌溶解除菌過濾，得到濃度為0.5毫克/毫升MTT溶液，置于4℃冰箱中。
PBS緩沖溶液：準確稱量0.2克 KCl、8克 NaCl、0.2克 K2PO4、1.15克 Na2PO4，倒入超純水1000毫升， pH值調節至7.4，高壓滅菌之后常溫保存。
胰酶細胞消化液：準確稱量2.5克胰蛋白酶、0.2克 Na2EDTA，除菌溶解于1000毫升PBS溶液中，放入-20℃冰箱中。
DMEM培養液：稱取DMEM粉末溶于700毫升超純水，溶解后進行除菌，再加入10%的胎牛血清和已經配好的1%谷氨酰胺溶液。
1.2 受試的藥品配制
稱取臭菘各極性萃取膏25.6毫克，再加入適量DMSO，溶解后攪拌均勻，加入配制好濃度為0.08、0.32和1.28毫克/毫升超級水。環磷酰胺為陽性對照組藥物，同上述配置四個濃度的梯度。
1.3 實驗方法[4]
1.3.1 復蘇細胞
1.3.2 細胞的傳代培養 首先，取出達到一定生長密度的Caco-2后，去除培養液；然后用PBS緩沖溶液對其反復沖洗3次，再用胰酶細胞消化液對其反復沖洗2次后，將液體再次倒掉，這時再加入幾滴胰酶消化液，進行消化1～2分，放在倒置的顯微鏡下觀察后，當看到細胞呈現圓粒狀的時候，表示已消化完畢；再取出胰酶消化液，再次加入細胞培養液，待細胞充分均勻的分散后進行分裝，然后放入到CO2培養箱內，以上操作都是在嚴格的無菌條件下進行的。
1.4 測定對Caco-2細胞給藥影響
實驗組有5個以上的平行，然后分別設定24小時、48小時、72小時進行培養，培養完成棄上層清液，再洗3次后棄除藥液。再加入0.5毫克/毫升MTT200 升，常溫培養4小時，棄除上清液并洗脫3次，再次加DMSO200升溶解MTT還原成甲臜沉淀，最后用波長492納米來測定吸光度（A）值，并計算癌細胞的抑制率。
A：給藥劑組的吸光值 P：腫瘤細胞的抑制率 ACK：對照組的吸光值
2 結果與分析
比較試驗結果可知，對照組明顯高于給藥組（吸光度A值），表明給藥組對Caco-2細胞有明顯抑制，并隨著時間的延長和濃度的增大，對其抑制趨勢越強。同一濃度下氯仿的提取物，對Caco-2細胞抑制活性明顯高于其他極性提取物組和對照組。
3 結語
李艷鳳等人研究發現白附子乙酸乙酯萃取物對胃癌細胞具有增殖的抑制活性；李桂玲等研究發現掌葉半夏提取物使子宮癌細胞Bcl-2和PCNA蛋白表達量遞減；本實驗采用MTT法，研究臭菘不同極性提取物對Caco-2細胞的抑制作用，結果顯示，各極性提取物均有不同程度對癌細胞的抑制活性，同時隨著濃度增加，抑制率也呈上升趨勢，初步表明臭菘中含有細胞毒性成分，在實驗中氯仿萃取物表現出較強的抑制癌細胞活性。
參考文獻
[1] 中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志（第十三卷第二分冊）[M].北京：科學出版社，1979，（9）：1-12.
[2] 伊廷雙，李德銖.天南星科分類系統的沿革[J].武漢植物學研究，2002，20（1）：49-61.
[3] 喬恒，隋希英.吉林省重點保護野生植物名錄[J].吉林林業科技，2009，38（2）：24-41.
[4] 程鑫穎，包海鷹，丁燕.瓦寧木層孔菌中5個化合物的抗腫瘤活性篩選[J].菌物研究，2011，9（3）：175-180.
作者簡介：魏麗，吉林農業大學中藥材學院，研究生，研究方向：植物藥。
網絡出版時間：2014-4-8 13：17：49
網絡出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/22.1186.S.20140408.1317.002.html
