肌苷氯化鈉注射液內(nèi)控質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂

王麗軍,劉 棟

（中國(guó)人民解放軍第一五三中心醫(yī)院藥械科,河南 鄭州 450042）

肌苷參與體內(nèi)能量代謝及蛋白質(zhì)合成,用于治療各種原因所致的白細(xì)胞和血小板減少[1]、急性肝炎及慢性遷延性肝炎、心功能不全和其他心臟疾患[2]。2010年版《中國(guó)藥典(二部)》采用高效液相色譜法測(cè)定肌苷氯化鈉注射液中肌苷的含量[3],雖準(zhǔn)確度高,但不太適用于制劑半成品快速檢測(cè)的需要。因此,本研究中對(duì)含量測(cè)定方法進(jìn)行了改進(jìn),制訂了簡(jiǎn)便、快速的肌苷氯化鈉注射液內(nèi)控質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),用于制劑半成品的質(zhì)量檢驗(yàn)。

1 儀器與試藥

LC-10A型高效液相色譜儀,包括 SPD-10A型紫外檢測(cè)器、手動(dòng)進(jìn)樣器、LabSoulations型色譜工作站（日本島津公司）；pHS-3C型酸度計(jì)（上海雷磁儀器廠）；UV-2450型紫外分光光度計(jì)（Shimadzu）；BT 125D型電子天平（德國(guó)賽多利斯公司）。肌苷（注射級(jí),新鄉(xiāng)制藥股份有限公司,批號(hào)為01130206-2）；氯化鈉（天津海光藥業(yè)有限公司,批號(hào)為01130301）；肌苷氯化鈉注射液（醫(yī)院自制,批號(hào)為13082101～13082105）；甲醇為色譜純（天津市四友精細(xì)化學(xué)品有限公司）,其他試劑均為分析純,水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 肌苷氯化鈉注射液制備

取處方量的肌苷和氯化鈉,加入注射用水適量溶解,再加入注射用水至足量,半成品檢驗(yàn)合格后灌封、滅菌即得。規(guī)格為100 mL,其中含肌苷 0.6 g,含氯化鈉 0.9 g。

2.2 性狀與鑒別

性狀:本品為無色的澄明液體。

鑒別:取0.01%供試品溶液適量,加等體積的3,5-二羥基甲苯溶液（取3,5-二羥基甲苯與三氯化鐵各0.1 g,加鹽酸配制成 100 mL）,混勻,在水浴中加熱約 10 min,即顯綠色；照 2.3.2項(xiàng)下方法試驗(yàn),供試品溶液主峰的保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品溶液主峰的保留時(shí)間一致；pH 應(yīng)為 6.0～8.0。

2.3 含量測(cè)定

2.3.1 紫外分光光度法

波長(zhǎng)選擇:精密稱取105℃干燥至恒重的肌苷對(duì)照品50 mg,置50 mL容量瓶中,用水溶解稀釋至刻度,搖勻,精密量取0.9 mL,置100 mL容量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻,制成含肌苷9μg/mL的溶液,以水為空白,于200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描,肌苷在248 nm波長(zhǎng)處有最大吸收。另按處方量稱取除肌苷外的輔料,加注射用水制成不含肌苷的空白溶液,同法在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描,結(jié)果輔料在248 nm波長(zhǎng)處無吸收(見圖1)。故確定肌苷的紫外測(cè)定波長(zhǎng)為248 nm。

圖1 肌苷氯化鈉注射液紫外波長(zhǎng)掃描圖

標(biāo)準(zhǔn)曲線制備:精密稱取105℃干燥至恒重的肌苷對(duì)照品50 mg,用水制成含肌苷100μg/mL的貯備液。分別精密量取肌苷貯備液適量,加水制成含肌苷為 6.0,8.0,10.0,12.0,14.0μg/mL 的溶液,照分光光度法[2010年版《中國(guó)藥典（二部）》附錄],以水為空白,于248 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以吸光度（A）對(duì)肌苷濃度（C）進(jìn)行線性回歸,得回歸方程 A=0.0456C-0.0028,R2=0.9996（n=5）。結(jié)果表明,肌苷溶液的質(zhì)量濃度在 6.0～14.0μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

回收率試驗(yàn):精密稱取105℃干燥至恒重的肌苷對(duì)照品約54,60,66mg,精密稱定,用不含肌苷的溶液（其他輔料按100%投料）進(jìn)行溶解,按處方工藝制成相當(dāng)于肌苷標(biāo)示量90%,100%,110%的溶液。照樣品含量測(cè)定項(xiàng)下方法平行制備3份溶液,計(jì)算肌苷含量。結(jié)果平均回收率為99.31%,RSD為0.25%（n=9）。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取樣品含量測(cè)定項(xiàng)下的供試品溶液,于室內(nèi)自然光條件下放置,分別于 0,1,2,4,6,8 h 時(shí)測(cè)定吸光度。結(jié)果的RSD為0.20%(n=6),表明肌苷溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批（批號(hào)為13082101）樣品5 mL共 6份,按樣品含量測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定含量。結(jié)果計(jì)算得肌苷的平均含量為99.49%,RSD為0.26%（n=6）,表明方法重復(fù)性良好。

樣品含量測(cè)定:取本品5批,每批平行測(cè)定6次,分別精密量取5mL,置100mL容量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻,精密量取3mL,置100 mL容量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻,制成每1 mL含肌苷9μg的溶液,照分光光度法[2010年版《中國(guó)藥典（二部）》附錄],以水為空白,于248 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,計(jì)算肌苷含量。結(jié)果見表1。

2.3.2 高效液相色譜法

色譜條件:色譜柱為 DiamonsilTMC18柱（250mm ×4.6mm,5μm）；流動(dòng)相為甲醇-水（10∶90）；流速為 1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為248 nm。肌苷峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求,理論板數(shù)按肌苷峰計(jì)算不低于2000。色譜圖見圖2。

圖2 高效液相色譜圖

對(duì)照品貯備液制備:精密稱取105℃干燥至恒重的肌苷對(duì)照品 60 mg,制成含肌苷的 0.6 g/L的貯備液。

樣品含量測(cè)定:取樣品5批,每批平行測(cè)定6次,分別精密量取5mL置50mL容量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻,再精密量取3 mL,置100 mL容量瓶中,用水稀釋至刻度,即得每1 mL含肌苷18μg的供試品溶液,精密量取20μL注入高效液相色譜儀,記錄色譜圖；另取對(duì)照品貯備液適量,用水制成每1mL含肌苷18μg的對(duì)照品溶液,同法測(cè)定,按外標(biāo)法計(jì)算肌苷含量,結(jié)果見表1。

表1 5批樣品含量測(cè)定結(jié)果比較（%,±s,n=6）

表1 5批樣品含量測(cè)定結(jié)果比較（%,±s,n=6）

?

2.3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

利用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件,對(duì)2種方法測(cè)得的含量進(jìn)行t檢驗(yàn),結(jié)果表明,在α=0.05水平上,紫外分光光度法和高效液相色譜法不存在顯著性差異。

3 討論

肌苷氯化鈉注射液是《中國(guó)藥典》收載的制劑,其中肌苷的含量測(cè)定采用高效液相色譜法,雖然該法靈敏度高、準(zhǔn)確度好,但使用液相法對(duì)儀器要求較高,并且色譜柱的平衡也較費(fèi)時(shí)間,因此不適合該制劑半成品的快速測(cè)定。為了滿足半成品含量測(cè)定簡(jiǎn)便、快捷的要求,制訂了內(nèi)控質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),采用紫外分光光度法替代高效液相色譜法測(cè)定半成品中肌苷的含量。考慮到肌苷的水溶性很大,紫外分光光度法測(cè)定肌苷含量采用水作為稀釋溶劑,方便、準(zhǔn)確、快捷。

參考文獻(xiàn):

[1]陳新謙,金有豫,湯 光.新編藥物學(xué)[M].第17版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2010:557.

[2]徐 帆,徐貴麗,馮恩富,等.肌苷氯化鈉注射液與維生素B6注射液的配伍穩(wěn)定性研究[J].中國(guó)藥業(yè),2009,18（19）:20-22.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:279.