高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器法測定人參健脾丸中黃芪甲苷含量

陳 健,胡 幸,呂紫璇,張傳平

（重慶市涪陵食品藥品檢驗所,重慶 408000）

人參健脾丸主要由人參、白術、茯苓、山藥、陳皮、木香、炙黃芪等11味中藥組方,具有健脾益氣、和胃止瀉的功效。方中黃芪是補氣的主藥,而黃芪甲苷是其主要成分,原標準無黃芪甲苷的含量測定,不能有效控制產(chǎn)品質量。筆者采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器（HPLC-ESLD）法對人參健脾丸中黃芪甲苷的含量進行了測定[1-3],方法簡單、準確、重復性好,可用于產(chǎn)品的質量控制。

1 儀器與試藥

島津LC-20A型高效液相色譜儀；島津ELSD-LTⅡ型蒸發(fā)光散射檢測器；Sartorius-ME235S型電子天平。黃芪甲苷對照品（中國食品藥品檢定研究院,批號為 110781-200613,含量100.00%）；人參健脾丸（云南騰沖制藥股份有限公司,批號分別為 20130403,20130503,20130401）；甲醇為色譜純,水為超純水,其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:AgilentEclipse XDBC18柱（250mm ×4.6mm,5μm）；流動相:甲醇-水（75∶25）；流速:1.0mL/min；柱溫:30 ℃；ELSD 檢測條件:漂移管溫度40℃,增益4；進樣量:20μL。

2.2 溶液制備

稱取黃芪甲苷對照品14.65 mg,精密稱定,置50 mL容量瓶中,加甲醇適量,振搖使溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得對照品溶液。取本品研細的內容物約10 g,精密稱定,置索氏提取器中,加甲醇100 mL,冷浸過夜,加熱回流4 h,提取液回收溶劑并濃縮至干,殘渣加水10 mL,微熱使溶解,用水飽和的正丁醇振搖提取4次,每次30 mL,合并提取液,用氨試液充分洗滌2次,每次30 mL,棄去氨液,正丁醇液蒸干,殘渣加甲醇溶解,轉移至5mL容量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得供試品溶液。按人參健脾丸制備工藝,制備缺黃芪的陰性樣品,照供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

系統(tǒng)適用性試驗:取2.2項下3種溶液,按擬訂色譜條件進樣測定。結果供試品溶液色譜中,黃芪甲苷與其他成分色譜峰能完全分離,陰性樣品對測定無干擾,見圖1。

線性關系考察:精密吸取對照品溶液 5,10,15,20,25 μL,按擬訂色譜條件分別注入液相色譜儀,以黃芪甲苷對照品進樣量的自然對數(shù)值為橫坐標（X）、黃芪甲苷峰面積的自然對數(shù)值為縱坐標（Y）進行線性回歸,得回歸方程 Y=0.4430X＋2.5944,r=0.9995（n=5）。結果表明,黃芪甲苷進樣量在 1.465～7.325 μg范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗:精密吸取同一對照品溶液,分別取10,20μL,按擬訂色譜條件重復進樣6次。結果的 RSD為0.48%（n=6）,表明儀器精密度良好。

重復性試驗:精密取同一批（批號為20130403）樣品,依法制備6份供試品溶液并進樣測定。結果黃芪甲苷峰面積的 RSD為0.22% （n=6）,表明方法重復性良好。

圖1 高效液相色譜圖

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液,分別于 0,2,4,8,12,24 h時進樣10μL,依法測定。結果黃芪甲苷峰面積的 RSD為0.29%（n=6）,表明供試品溶液在24 h內穩(wěn)定。

加樣回收試驗:取已知含量的樣品（批號為20130403）6份,精密加入黃芪甲苷對照品適量,按供試品溶液制備方法制備溶液并依法測定,計算回收率。結果見表1。

表1 黃芪甲苷加樣回收試驗結果（n=6）

2.4 樣品含量測定

取樣品3批,按擬訂色譜條件操作,測定含量。結果批號為20130401,20130403,20130503的3批樣品中黃芪甲苷的含量分別為 0.0428,0.0434,0.0432mg/g。

3 討論

蒸發(fā)光散射檢測器適用于檢測黃芪甲苷類等無紫外吸收或微弱紫外末端吸收的物質,具有較高的檢測靈敏度,且穩(wěn)定性和重復性良好。由于本品成分復雜,經(jīng)過水飽和正丁醇提取分離,避免了雜質污染色譜柱和檢測器,峰形及結果均理想。方法學考察結果表明,該方法簡單、準確、重復性好,可用于人參腱脾丸的質量控制。

參考文獻:

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