高效液相色譜法測定腎石消膠囊中延胡索乙素含量

郭迎霞 ,何棟梁,宋靜莉,栗 娟

（1.河北省邯鄲市食品藥品檢驗中心,河北 邯鄲 056001； 2.河北省大名縣人民醫院,河北 邯鄲 056900）

腎石消膠囊是邯鄲市中醫院的自制制劑,臨床應用療效顯著,由延胡索、石葦、金錢草等九味中藥組方,具化石排石、利濕止痛的功效,主治泌尿系結石及泌尿系感染。此制劑現有質量標準簡單,尚無定量內容。為此,參考文獻[1-3],建立了測定其主要成分延胡索乙素含量的高效液相色譜法。該方法簡便、準確、靈敏度高,為控制該制劑的質量奠定了基礎。

1 儀器與試藥

島津 LC-2010AHT型高效液相色譜儀（日本島津公司）；UV-VIS,Lcsolution型色譜工作站；AUW 120D型電子天平（日本島津公司,十萬分之一）。延胡索乙素對照品（中國食品藥品檢定研究院,批號為 10726-201213,含量為 99.8%）；腎石消膠囊（邯鄲市中醫院,批號分別為 120101,120201,120301,120302,120303,120401,規格為每粒 0.5 g）；甲醇為色譜純,水為純化水,其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Shimadzu VP-ODS柱（250mm ×4.6mm,5μm,日本島津公司）；流動相:0.1%磷酸（用三乙胺調節pH至6.0）-甲醇（40∶60）；流速:1 mL/min；檢測波長:280 nm；進樣量:20 μL；理論板數按延胡索乙素峰計算不低于5000。

2.2 溶液制備

精密稱取延胡索乙素對照品0.01044 g,置100 mL容量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,作為對照品貯備液；吸取對照品貯備液5 mL,置 50 mL容量瓶中,制成每1 mL含10.44μg的溶液,作為對照品溶液。精密稱取本品1.5 g,置具塞錐形瓶中,精密加入濃氨-甲醇（1∶20）混合溶液 50 mL,稱定質量,冷浸 1 h后加熱回流1 h,放冷,再稱定質量,用濃氨-甲醇（1∶20）混合溶液補足減失的重量,搖勻,濾過；精密量取續濾液25 mL,蒸干,殘渣加甲醇溶解,轉移至5mL容量瓶中,并稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續濾液,即得供試品溶液。按處方比例依據該制劑制備工藝制備不含延胡索的陰性樣品,依據供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗:分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液各20μL,按擬訂色譜條件進樣測定。結果陰性對照品溶液色譜在與延胡索乙素對照品主峰的相同保留時間處無色譜峰,見圖 1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察:精密量取對照品貯備液 2,4,5,8,10 mL,分別置50mL容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,分別取20μL進樣,測定峰面積,以對照品進樣量（X,μg）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸,得回歸方程 Y=1.292×106X＋6.932×103,r=0.9997（n=5）。結果表明,延胡索乙素進樣量在 0.0833～0.4168μg范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗:精密吸取同一對照品溶液（質量濃度為10.44 μg/mL）20μL,重復進樣 5次,計算延胡索乙素色譜峰面積。結果的 RSD為0.42%（n=5）,表明儀器精密度良好。

重復性試驗:取同一批（批號為120101）樣品5份,依法制備供試品溶液,按擬訂色譜條件進樣測定。結果延胡索乙素平均含量為 69μg/g,RSD 為 0.33%（n=5）,表明方法重復性良好。

穩定性試驗:取同一（批號為120101）供試品溶液,分別于0,2,4,8,12,24 h 時進樣測定。結果的 RSD 為 0.65% （n =6）,表明供試品溶液在室溫下放置24 h穩定。

回收率試驗:取已知含量的同一批（批號為120101,含量為69μg/g）樣品共 6份,每份約 0.75 g,精密稱定。精密吸取對照品貯備液5 mL,置500mL容量瓶中,加濃氨-甲醇（1∶20）混合溶液溶解,并稀釋至刻度,配制成質量濃度為 1.044μg/mL的溶液。每份樣品精密加入50 mL此溶液,依法制備供試品溶液,進樣測定。結果見表1。

表1 延胡索乙素加樣回收試驗結果（n=6）

2.4 樣品含量測定

按2.2項下方法制備供試品溶液,按擬訂色譜條件進樣測定4 次。結果 6 批樣品中延胡索乙素含量分別為 69,54,71,68,72,52μg/g,其 RSD 分別為 0.24%,0.18%,0.11%,0.32%,0.29%,0.40%。

3 討論

延胡索乙素為延胡索的主要成分,參照2010年版《中國藥典（一部）》延胡索項下的含量測定方法,采用高效液相色譜法對該制劑中延胡索乙素的含量進行測定。

用紫外分光光度法對對照品溶液在200～400 nm波長范圍掃描,延胡索乙素在281 nm波長處有最大吸收峰。與文獻記載其最大吸收峰在280 nm波長處相近[4],為使檢測波長在使用時達到統一,而又不影響測定結果,且又便于記憶,故將測定波長定為280nm波長。

2010年版《中國藥典（一部）》延胡索含量測定項下規定,按干燥品計算,含延胡索乙素不得少于0.050%。本研究結果表明,該制劑中延胡索乙素的含量符合2010年版《中國藥典(一部)》的規定,且與原藥材含量基本一致。因此,確定的腎石消膠囊中延胡索乙素的含量測定方法結果準確、重復性好,可用于腎石消膠囊中延胡索乙素的質量控制。

參考文獻:

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京:中國醫藥科技出版社,2010:130.

[2]朱慶才,吳 迪,李 艷,等.高效液相色譜法測定復方元胡止痛膠囊中延胡索乙素的含量[J].時珍國醫國藥 ,2000,1（11）:1727.

[3]黃立明,黃東萍,蔣貴發,等.RP-HPLC法測定復方金蒲片中延胡索乙素的含量[J].中國中醫藥信息雜志,2010,17（8）:45.

[4]趙建英,包瑋鴛.高效液相色譜法測定婦樂顆粒中延胡索乙素的含量[J].中國藥業,2005,14（8）:420.