反相高效液相色譜法測定保嬰鎮驚丸中大黃素和大黃酚含量

鞏長芹

（山東省臨沂市食品藥品檢驗檢測中心,山東 臨沂 276001）

保嬰鎮驚丸收載于部頒標準第八冊,由大黃、甘草、朱砂組方,原質量標準中只有性狀和檢查項目,而無含量測定項,不能有效地控制該產品的質量。該處方中大黃為主藥,大黃素和大黃酚為大黃的主要活性成分。本研究中選擇測定大黃藥材中大黃素和大黃酚的含量作為本品質控定量指標,建立了準確、簡便、可靠的大黃素和大黃酚的分析方法,能有效控制該產品的質量。現報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent1260型高效液相色譜儀（配在線脫氣機、G1311C四元泵、G1329B自動進樣器、G1315DDAD檢測器,美國 Agilent公司）；XS205DU型電子分析天平（梅特勒-托利多公司）；電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫療儀器廠）。大黃素對照品（供含量測定用,中國藥品生物制品檢定所,批號為110756-200110）,大黃酚對照品（供含量測定用,中國藥品生物制品檢定所,批號為110796-201017,含量以 99.6%計）；保嬰鎮驚丸（濟南宏濟堂制藥有限責任公司,批號為 1012001,1012002,1012003）；甲醇為色譜純,水為純化水,其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent Zorbax SB-C18柱（250mm ×4.6mm,5μm）；流動相:甲醇-0.1% 磷酸（85∶15）；流速:1.0mL/min；柱溫:35℃；進樣量:5μL。大黃素和大黃酚的分離度分別為3.4和9.5,理論板數分別為14510和18265。

2.2 溶液制備

精密稱取大黃素對照品 4.12mg、大黃酚對照品9.10mg,置100mL容量瓶中,加甲醇溶解,并稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液。取本品適量,研細,取約1 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇25 mL,稱定質量,置水浴中回流30 min,放冷,再稱定質量,用甲醇補足減失的質量,濾過,取續濾液10 mL,蒸干,加水20mL使溶解,加鹽酸2mL,三氯甲烷20mL,置水浴中回流1 h,取出,放冷,取三氯甲烷液,水液用三氯甲烷提取3次,每次15mL,合并三氯甲烷液,蒸干,用甲醇溶解并轉移至10mL容量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,過濾,取續濾液,即得供試品溶液。按保嬰鎮驚丸處方比例精密稱取全方中除大黃以外的其他藥材,按供試品溶液制備方法制備,即得陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

干擾試驗:取對照品溶液、供試品溶液、缺大黃的陰性對照品溶液,按擬訂色譜條件進樣分析。結果,在供試品溶液色譜圖中,分別有與對照品大黃素、大黃酚保留時間一致的特征峰,保留時間分別為6.26,8.44min,陰性對照品溶液無此特征峰,表明陰性樣品對所測組分無干擾,見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察:取 2.2 項下的對照品溶液 1,2,4,6,8,10,12,15μL,按擬訂色譜條件分別自動進樣,記錄色譜圖。以峰面積（Y）為縱坐標、進樣量（X,μg）為橫坐標進行線性回歸,得大黃素、大黃酚回歸方程 Y素=2880.116 X-0.1906（r=0.999999）,Y酚=4244.042 X＋2.3637（r=0.999998）。結果表明,大黃素、大黃酚進樣量分別在 0.0412～0.6180μg和 0.09060～1.3890μg范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗:取2.2項下的對照品溶液,按擬訂色譜條件自動重復進樣6次,進樣量5μL,記錄色譜圖。結果大黃素、大黃酚峰面積平均值分別為593和1927,RSD分別為0.09%和0.07%(n=6),表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:取同一供試品（批號為1012002）溶液,室溫下放置,分別于配制后 0,2,4,6,8,10,12,24 h 時各進樣 1 次,進樣量5μL,記錄色譜圖。結果大黃素、大黃酚峰面積平均值分別為512 和 1257,RSD 分別為 0.11% 和 0.05%(n=8),表明供試品溶液在24 h內穩定。

重復性試驗:分別精密稱取同一批（批號為1012002）樣品6份,依法制備供試品溶液,按擬訂色譜條件分別進樣5μL,記錄大黃素、大黃酚的峰面積。結果大黃素、大黃酚平均含量分別為0.890mg/g和 1.478mg/g,RSD 分別為 0.18% 和 0.14%(n =6),表明方法重復性良好。

加樣回收試驗:取已知含量的同一批（批號為1012002）保嬰鎮驚丸6份,每份0.5 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,分別精密加入大黃素、大黃酚對照品溶液10 mL。依法制備供試品溶液,按擬訂色譜條件,分別進樣5μL測定。結果見表1。

表1 大黃素、大黃酚加樣回收試驗結果（n=6）

2.4 樣品含量測定

取3批樣品,依法制備供試品溶液,按擬訂色譜條件,分別進樣5μL,記錄大黃素、大黃酚峰面積,按外標法計算含量。結果批號為1012001,1012002,1012003的樣品中大黃素和大黃酚的含量分別為 0.912,0.890,0.899mg/g 和 1.489,1.478,1.502mg/g。

3 討論

保嬰鎮驚丸具有清熱、鎮驚、導滯的功效,主治小兒急熱驚風、實熱目赤、口瘡、便燥、小便赤黃。大黃具有瀉熱毒、破積滯、行瘀血之功效,治實熱便秘、譫語發托、食積痞滿、痢疾初起、里急后重等癥,為方中君藥。為了用藥安全,必須控制其質量,建立其標準。

蒽醌類成分在254 nm波長處有最大吸收[1-5],故檢測波長選擇254 nm。參考2010年版《中國藥典（一部）》中大黃藥材含量測定的流動相[1-3],結果以甲醇-0.1% 磷酸溶液（85∶15）為流動相,各成分峰形好,分離度高,陰性無干擾。且此方法簡便、準確,為保嬰鎮驚丸質量標準的制訂提供了科學依據。

參考文獻:

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