丹參注射液對非酒精性脂肪肝炎性因子IL-6、TNF-a的影響

閆 蕾,張洪宇,郭英君

(寧夏自治區人民醫院 感染科，寧夏 銀川 750001)

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丹參注射液對非酒精性脂肪肝炎性因子IL-6、TNF-a的影響

閆 蕾,張洪宇,郭英君

(寧夏自治區人民醫院 感染科，寧夏 銀川 750001)

目的：觀察丹參注射液對非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠血清中白細胞介素(IL-6)及腫瘤壞死因子-a(TNF-a)的影響，從而驗證丹參注射液對非酒精性脂肪肝治療作用。方法：將40只大鼠隨機分為正常組、模型組、丹參小劑量組(400mg/kg)、丹參大劑量組(1 600mg/kg)，8周后采用免疫組化法(ELLSA)檢測各組大鼠血清中IL-6及TNF-a的水平。結果：模型組大鼠血清中IL-6、TNF-a水平明顯增高；與模型組比較，不同劑量丹參組血清中IL-6、TNF-a水平顯著降低。結論：丹參可能通過降低血清中IL-6、TNF-a水平，從而抑制肝細胞炎癥反應，減輕肝組織損傷，達到治療NAFLD的效果。

非酒精性脂肪肝；丹參；IL-6;TNF-a

非酒精性脂肪肝病(NAFLD)是引起肝功能紊亂的主要誘因，是指以無過量飲酒史的肝細胞脂肪變性和脂肪貯積為病理特征的臨床病理綜合征，NAFLD可迅速進展為纖維化和肝硬化，是隱源性肝硬化的重要因素之一。近年來，非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)逐漸取代了病毒性肝炎，成為歐美發達國家的最主要肝病。據預測，僅需10年左右的時間，NAFLD將有可能成為終末期肝病和肝移植的首要病因。因此，開展NAFLD相關研究具有重要意義[1]。丹參為活血化瘀類中藥，其主要成分丹參酮ⅡA(TanshinoneⅡA，TSA)具有抗腫瘤、抗菌、抗炎、抗氧化和抗凋亡等作用。本文采用高脂飲食誘導NAFLD大鼠模型，檢測血清中IL-6、TNF-a水平，初步探討丹參對NAFLD大鼠肝臟炎性因子的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

實驗動物：健康雄性SD大鼠40只，體重150～200g，購自寧夏醫科大學動物實驗中心；丹參注射液購自四川升和藥業股份有限公司；IL-6、TNF-a試劑盒購自武漢博士德生物工程公司；高脂飼料購自寧夏醫科大學動物實驗中心。

1.2 方法

健康雄性SD大鼠40只，正常喂養1周后，隨機分為4組，每組10只，即：正常組、模型組、低劑量丹參組(400mg/kg)、高劑量丹參組(1 600mg/kg)。正常組喂飼普通飼料，其余各組均給予高脂飼料，連續8周。造模開始第5周，干預組大鼠給予肌肉注射不同劑量的丹參注射液28天，正常組、模型組均給予肌肉注射等量生理鹽水，各組大鼠均于第8周結束處死。

1.3 檢測指標

所有觀察對象抽取靜脈血，分離血清，放置于-20℃低溫冰箱貯存備用。檢測前將血清置室溫復融，轉離心，取上清液進行檢測。采用光度酶聯免疫分析法(ELLSA)檢測各組大鼠的TNF-a和IL-6含量。

1.4 統計學處理

2 結果

經檢測，模型組血清中IL-6和TNF-a含量明顯升高；經丹參治療后，低、高劑量丹參注射液組血清中IL-6和TNF-a含量均低于模型組(P<0.05)。低、高劑量組之間差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 不同組各指標比較 (±s，ng/mL)

注：與模型組比較，*P<0.05。

3 討論

非酒精性脂肪肝(NAFLD)是近年來全球范圍內患病率迅速增高的一種獲得性代謝應激性肝損害，包括一系列由脂肪在肝臟堆積誘發引起的疾病：單純性脂肪肝，伴有肝細胞損傷和炎癥反應的非酒精性脂肪性肝炎，最終可發展為肝纖維化、肝硬化、肝癌。該癥常合并有內臟性肥胖、血脂紊亂、高血壓、糖調節異常和2型糖尿病等多元代謝性紊亂疾病。病理組織學表現為：肝細胞脂肪變性及肝實質炎癥反應。隨著現代生活方式、行為方式的改變，NAFLD發病率呈逐年升高趨勢，是隱源性肝硬化最主要原因。

近年來研究發現，多種炎性因子、脂肪細胞因子對NAFLD發病具有一定作用，如TNF-a、IL-6等。TNF-a作為一種肝毒性細胞因子，在NAFLD發生時表達增加，成為導致脂肪肝炎發生的首要因子[2]。TNF-a直接損傷肝細胞是通過TNF-a與肝細胞膜受體結合，活化Caspase-8，進而活化Caspase-3，導致肝細胞凋亡；另外，TNF-a是脂蛋白酶強力抑制劑，高濃度TNF-a可減少外周組織脂肪分解，并促進肝細胞甘油三酯的合成及聚集。TNF-a還可誘導激活肝臟Kupffer細胞，釋放大量IL-6、IL-8等炎性因子，可直接引起肝細胞脂肪變性、炎癥及肝細胞壞死[3]。TNF-a可活化其它細胞因子如IL-6、IL-8和一些黏附分子，形成炎癥瀑布反應，誘發肝臟炎癥，導致胰島素抵抗(IR)進而引起NAFLD[4]。

IL-6是由單核細胞和巨噬細胞等多種細胞產生，與肝臟局部炎癥反應有關，參與炎性損傷過程。IL-6可直接刺激肝細胞、儲脂細胞及庫普弗細胞增生分泌膠原、層黏連蛋白和蛋白多糖，參與肝纖維化形成，促進肝損害[5]。此外，IL-6與IR關系密切，可抑制肝臟胰島素信號，造成胰島素抵抗，高胰島素血癥可通過阻斷線粒體脂肪酸氧化，導致肝臟脂肪酸聚集，形成肝脂肪變性，IL-6可能與非酒精性脂肪肝炎的“第一次打擊”有關[6]。因此，炎癥細胞因子的表達改變與NAFLD疾病進程密切相關。

丹參為傳統臨床中藥，具有活血通絡、祛肝經之瘀、增強肝臟血運等作用，現代藥理顯示：丹參含有兒茶酸、丹參素、丹參酮等化學成分，文獻表明主要成分丹參酮ⅡA是一種新型有效的細胞內脂質過氧化產物，是與DNA相互作用的抑制劑[7]。丹參可能通過抑制促炎因子的分泌，上調抑炎癥因子水平，從而顯著抑制小鼠血清IL-6、TNF-α表達的上調而發揮作用。

本研究證實：丹參組血清中IL-6、TNF-a水平含量與模型組比較差異均有統計學意義(P<0.05)；高、低劑量組的IL-6、TNF-a含量差異無統計學意義(P>0.05)。因此，IL-6、TNF-a與NAFILD發病關系密切，丹參可能通過降低血清中IL-6、TNF-a水平，調節體內炎性因子變化，從而抑制肝細胞炎癥反應，減輕肝組織損傷，達到治療NAFLD的目的。

[1] KIM D，KIM WK KIM HJ,et a1．Association between noninvasive fibrosis markers and mortality among adults with nonalcoholic fatty liver disease in the United States[J]．Hepatology,2013，57：1357-1365．

[2] 張慧，胡義揚．腫瘤壞死因子、脂聯素與非酒精性脂肪性肝病[J]．肝臟，2006，11(2)：137-139．

[3] 韓婷，井源，吳靜，等．酒精性脂肪肝的肝損傷機制研究近況[J]．實用肝臟病雜志，2007，10(4)：279-281．

[4] RUAN H，LODISH H F．Insulin resistance in adiposetissue：direct and indirect effects of tumor necrosis factor-alpha[J].Cytokine Growth Factor Rev，2003，22：447-455．

[5] HILL DB ,MARSANO L,COHEN D,et a1.Increased plasma interleukin-6 concentrations in alcoholic hepatitis [J].Lab Clin Med,1992,119:547-552.

[6] KIM HJ, HIGA SHIMORI T,PARK SY,et al.Differential effects of interleukin-6 and -10 on skeletal muscle and liver insulin action in vivo[J].Diabetes,2004,53:1060-1067.

[7] 曹恩華,劉曉麒,李景福,等.天然抗氧化劑丹參酮ⅡA對干細胞脂質過氧化產物與DNA相互作用的影響[J].生物物理學報, 1996(12):24-27.

(責任編輯：李嵐春)

Injection of Non-Alcoholic Steatohepatitis Factor IL-6, TNF-a Salvia

Yan Lei, Zhang Hongyu ,Guo Yingjun

(Ningxia Autonomous Region People's Hospital of Infectious Diseases, Ningxia 750001,China)

Objective:Salvia serum of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) in rats injections of interleukin (IL-6 ) and tumor necrosis factor-a (TNF-a) , so as to verify Salvia Injection on non-alcoholic fatty liver treatment.Methods:The 40 rats were randomly divided into normal group, model group and low dose group salvia (400mg / kg), Salvia high dose group (1 600mg / kg), after 8 weeks using immunohistochemistry (ELLSA) detected group, serum levels of IL-6 and TNF-a in. Results:Model group, the serum IL-6, TNF-a levels were significantly higher ; compared with the model group, each group with different doses of Salvia serum IL-6, TNF-a levels were significantly reduced. Conclusion:Salvia possible by reducing the serum IL-6, TNF-a levels,inhibiting the inflammatory response in liver cells,reducing damage to liver tissue , the therapeutic effect of NAFLD.

Non-alcoholic Fatty Liver;Salvia;IL-6;TNF-a

2014-08-25

閆蕾(1983-)，女，寧夏自治區人民醫院主治醫師，研究方向為脂肪肝治療。

R285.5

A

1673-2197(2014)24-0010-02